微核糖核酸-221對小鼠癲癇神經元細胞的作用及其機制研究

高 茜 趙紅霞 李忠春 孟憲良

癲癇是中樞神經系統的慢性、反復發作性短暫功能失調綜合征，其人群患病率僅次于腦卒中[1]。多數患者的病情經藥物治療后基本可得到控制，但仍有約20%的患者長期反復發作[2-3]。因此，研發有效的抗癲癇治療藥物具有重要臨床意義[4]。微核糖核酸(microRNA，miRNA)為長度在19～25個核苷酸之間的短鏈、非編碼、內源性小RNA，其可靶向結合mRNA的3’非翻譯區(UTR)序列，調控基因轉錄的穩定性和翻譯效率[5]。Simonato等[6]發現，miRNA參與的調控機制在癲癇疾病的防治中扮演重要角色。癲癇患者腦內的氧化應激反應活躍，癲癇發作時自由基(free radical，FR)含量顯著增加，遠超過機體對FR的清除能力。大量的FR可以直接使脂質、蛋白質和脫氧核糖核酸(DNA)等大分子物質發生氧化損傷，從而破壞細胞膜和其他細胞結構。當腦組織受到FR和內源性毒素等攻擊時，核轉錄相關因子2(nuclear transcription-related factor 2，Nrf2)與其特異性受體KELCH樣ECH相關蛋白1(Keap-1)解除偶聯，半衰期明顯延長，轉位進入細胞核，與抗氧化反應原件(antioxidant response element，ARE)結合后誘導抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶基因的表達。因此，考慮癲癇發生的相關機制可能與Nrf2-ARE信號通路的激活相關。本研究旨在探討miRNA-221在小鼠癲癇神經元模型中的調節作用及其對上述信號通路的調控機制。

1 材料與方法

1.1 實驗細胞與試劑 小鼠神經元細胞株購自上海康朗公司。LipofectamineTM2000轉染試劑盒、二喹啉甲酸(BCA)蛋白質定量試劑盒、反轉錄試劑盒均購自大連寶生物工程有限公司。miRNA抽提試劑盒、人谷胱甘肽(GSH)檢測試劑盒、丙二醛(MDA)檢測試劑盒、聚偏二氟乙烯(PVDF)印跡膜、電化學(ECL)發光液和放射免疫沉淀法(RIPA)蛋白質裂解液均購自上海碧云天生物技術有限公司。……