白細胞介素-17 A和白細胞介素-17 F在卵巢上皮性癌組織中的表達情況及與患者臨床特征的關系

閆美玲，張亞莉，張莉

商丘市第一人民醫院（徐州醫科大學商丘臨床學院）婦產科，河南 商丘 476100

卵巢上皮性癌是最常見的卵巢腫瘤，每年死亡人數約占全球惡性腫瘤死亡例數的5%，患者的5年生存率不到50%，早期癥狀不典型，患者就診時常發展至中晚期，腫瘤易轉移，手術切除等治療后預后較差。因此，尋找可盡早發現卵巢上皮性癌的檢測指標或方法以提高患者的生存率并改善預后具有重要的臨床意義。研究顯示，惡性腫瘤患者常伴有慢性持續性炎癥，炎性微環境可通過觸發基因突變、刺激微環境向免疫抑制微環境轉變，從而促進腫瘤的發生、發展，因此炎癥因子可能是腫瘤檢測與治療的新靶點。白細胞介素-17A（interleukin-17A，IL-17A）和白細胞介素-17F（interleukin-17F，IL-17F）均屬于白細胞介素-17（interleukin-17，IL-17）家族，由輔助性 T 細胞 17（T helper cell 17，Th17）表達，同源性高、染色體相似，在肝癌、乳腺癌、前列腺癌等腫瘤組織中均高度表達，參與腫瘤的發生發展。另有研究發現，IL-17A和IL-17F對胃癌的發生與發展具有促進作用，其表達與預后效果密切相關。本研究旨在探討IL-17A和IL-17F在卵巢上皮性癌組織中的表達及與患者臨床特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年1月至2019年10月商丘市第一人民醫院收治的卵巢上皮性癌患者。納入標準：①經病理學檢查確診為卵巢上皮性癌；②初診患者；③臨床資料完整。排除標準：①入院前曾接受過免疫治療或放化療；②合并其他部位腫瘤。依據納入和排除標準，本研究共納入90例卵巢上皮性癌患者，其平均年齡為（56.14±7.86）歲，平均體重指數為（23.75±4.13）kg/m，合并糖尿病 6例（6.67%）、高血壓 10例（11.11%）、高血脂3例（3.33%）。選擇同期收治的23例交界性卵巢腫瘤患者和21例良性卵巢腫瘤患者。交界性卵巢腫瘤患者的平均年齡為（55.67±8.11）歲，平均體重指數為（23.84±4.36）kg/m，合并糖尿病3例（13.04%）、高血壓4例（17.39%）、高血脂1例（4.35%）。良性卵巢腫瘤患者的平均年齡為（56.65±8.24）歲，平均體重指數為（24.05±5.22）kg/m，合并糖尿病 2例（9.52%）、高血壓 3例（14.29%）、高血脂1例（4.76%）。3種類型卵巢疾病患者的年齡、體重指數及并發癥發生情況比較，差異均無統計學意義（

P

＞0.05），具有可比性。

1.2 實驗試劑

兔抗人IL-17A單克隆抗體購自美國Invitrogen公司，兔抗人IL-17F單克隆抗體購自美國LS-Bio公司，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色劑購自上海信裕生物科技有限公司，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）購自北京中杉金橋生物技術有限公司，二甲苯購自上海吉至生化科技有限公司，乙醇購自上海經科化學科技有限公司。

1.3 免疫組織化學染色方法

①采用10%福爾馬林固定卵巢腫瘤組織標本，取材后脫水至透明；②將石蠟包埋組織切為厚5 μm的切片，40℃溫水展開后撈出，70℃烘干2 h；③將切片放入二甲苯中脫蠟2次，每次20 min；④依次加入100%乙醇（2次，每次4 min）、95%乙醇（2次，每次3 min）、90%乙醇（2次，每次2 min）、80%乙醇（2次，每次2 min）、70%乙醇（2次，每次2 min），蒸餾水沖洗脫蠟至水；⑤將切片與檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=6.0）一同放入修復盒中，置于高壓鍋中進行抗原修復，時間為3 min；⑥加入3%HO，于室溫下避光靜置15 min，PBS浸洗3次，每次3 min；⑦滴加IL-17A一抗（1∶150）、IL-17F一抗（1∶100）各50 μl，室溫孵育1 h后于4℃放置過夜；⑧過夜后于37℃復溫30 min，PBS浸洗3次，每次3 min；⑨滴加IL-17A二抗（1∶150）、IL-17F二抗（1∶100）各50 μl，37 ℃孵育40 min，PBS浸洗3次，每次5 min；⑩加入DAB進行顯色處理，顯微鏡下控制染色時間，完成后置于流動蒸餾水中沖洗；?采用蘇木素復染3 min，流水沖洗20 min；?1%鹽酸乙醇分化10 s，氨水返藍30 s；?切片依次加入70%乙醇（3 min）、80%乙醇（3 min）、95%乙醇（3 min）、無水乙醇（5 min）脫水，加入二甲苯（2次，每次8 min）；?使用中性樹膠封片，光學顯微鏡觀察。

1.4 免疫組織化學染色結果判斷

IL-17A和IL-17F陽性表達呈棕黃色或棕褐色顆粒。隨機選擇5個染色均勻的區域，在200倍顯微鏡下觀察著色細胞占視野總細胞的百分比，取平均值。陽性細胞百分比評分：陽性細胞百分比＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞百分比評分與染色強度評分相乘，≤2分為陰性（-），3～4分為弱陽性（+），5～8分為中等陽性（++），9～12分為強陽性（+++）。陽性表達率=（弱陽性+中等陽性+強陽性）例數/總例數×100%。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 IL-17 A和IL-17 F表達情況的比較

免疫組織化學染色結果顯示，IL-17A主要在細胞質中表達，呈棕褐色顆粒。IL-17F主要在細胞質中表達，呈棕黃色顆粒。卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的陽性表達率均高于交界性卵巢腫瘤患者和良性卵巢腫瘤患者，差異均有統計學意義（

P

＜0.05）（表1、表2）。

表1 不同類型卵巢疾病患者中IL-17 A的表達情況

表2 不同類型卵巢疾病患者中IL-17 F的表達情況

2.2 不同臨床特征卵巢上皮性癌患者中IL-17 A和IL-17 F表達情況的比較

不同年齡、腫瘤直徑、病理類型的卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（

P

＞0.05）。國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、中/低分化的卵巢上皮性癌患者中IL-17A的陽性表達率分別高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、高分化的患者，差異均有統計學意義（

χ

=5.205、8.725、5.198，

P

＜0.05）；FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、中/低分化的卵巢上皮性癌患者中IL-17F的陽性表達率分別高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、高分化的患者，差異均有統計學意義（

χ

=6.024、10.697、6.328，

P

＜0.05）。（表3）

表3 不同臨床特征卵巢上皮性癌患者中IL-17 A和IL-17 F的表達情況（ n=90）

3 討論

卵巢上皮性癌常見于中老年女性，病死率居全部婦科腫瘤之首，早期腫瘤小且癥狀不明顯，腹部不能觸及，確診時多處于中晚期，導致治療及預后效果差。早發現、早治療是提高婦科腫瘤患者預后最直接有效的方法。近年來研究發現，炎癥與腫瘤的發生、發展關系密切，其中白細胞介素（interleukin，IL）在免疫調節中具有重要作用。

IL-17A是由Th17細胞分泌的促炎因子，不僅可通過促進上皮細胞上調抗菌肽的表達從而抵御炎癥和病菌，還可刺激其他免疫相關細胞大量分泌趨化因子、細胞因子，誘導中性粒細胞、趨化單核細胞等游走至炎癥部位，發揮獲得性免疫和天然免疫雙重作用。然而IL-17A在腫瘤微環境中的作用截然相反，表現為促進腫瘤免疫抑制。IL-17F最初稱為細胞毒性T淋巴細胞相關抗原8（cytotoxic T lymphocyte associated antigen 8，CTLA8），因與IL-17A的同源性最高，遂加入IL-17家族，二者作用相近，IL-17F也可誘導各種免疫相關細胞分泌炎性因子、趨化因子，誘導中性粒細胞游走，從而抑制腫瘤。二者也各具獨特功能，IL-17F可上調內皮細胞中轉化生長因子-B1（transforming growth factor-B1，TGF-B1）的表達，下調血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、IL-6、IL-8的表達，抑制新生血管形成，發揮抗腫瘤作用。然而，IL-17F會刺激腫瘤微環境中的細胞分泌基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）1、MMP3、MMP13等，導致腫瘤浸潤和轉移。

IL-17家族在臨床診斷和評估機體炎癥、腫瘤中的作用越來越受到重視。張曉欲等研究發現，血清IL-17聯合糖類抗原125、微小RNA（microRNA，miRNA）-200a可用于早期診斷上皮性卵巢癌，并可通過其水平變化評估腫瘤進展情況。但是血清中IL-17A和IL-17F的來源廣泛，無法準確反映腫瘤局部浸潤水平，因此通過檢測腫瘤組織中相關因子的表達可更真實準確地反映腫瘤的浸潤水平，對于探究局部腫瘤微環境的免疫抑制狀態更具意義。本研究通過對卵巢疾病患者的腫瘤組織進行免疫組織化學染色，結果發現，卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的陽性表達率均高于交界性卵巢腫瘤患者和良性卵巢腫瘤患者，差異均有統計學意義（

P

＜0.05）。這與胃癌組織中IL-17A和IL-17F表達水平較高的結果具有相似性。此外，本研究結果還顯示，不同年齡、腫瘤直徑、病理類型的卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（

P

＞0.05）。FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、中/低分化的卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的陽性表達率分別高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、高分化的患者，差異均有統計學意義（

P

＜0.05）。

綜上所述，卵巢上皮性癌患者中IL-17A和IL-17F的陽性表達率較高，IL-17A和IL-17F表達情況與患者的FIGO分期、淋巴結轉移情況及組織分化程度密切相關，提示IL-17A和IL-17F可能作為卵巢上皮性癌的診斷指標和潛在治療靶點。