HPLC法測(cè)定10種藍(lán)莓中維生素C的含量

楊 偉，曹躍文，史彥會(huì)，常福蘭

（日照市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東日照 276800）

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

草酸：分析純；維生素C標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品：含量99.7%；甲醇：HPLC純；藍(lán)莓：為山東省日照市引進(jìn)的10個(gè)藍(lán)莓品種，德雷珀、利波特采自稼沃生態(tài)有限公司，奧尼爾、萊克西、公爵、卡拉采自莓美噠有限公司，藍(lán)豐、藍(lán)金采自博園農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司，明星、綠寶石采自金莓有限公司。各品種果實(shí)均于2021年7月采摘，置于4 ℃聚乙烯保鮮盒（11 cm×11 cm×4 cm）帶回實(shí)驗(yàn)室用于實(shí)驗(yàn)指標(biāo) 測(cè)定[1-4]。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1260Ⅱ高效液相色譜儀（配有DAD檢測(cè)器）；Agilent Eclipse Plus C18色譜柱；ME3002梅特勒電子天平。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理

將藍(lán)莓放置于組織勻漿機(jī)中勻漿，稱取5 g左右的藍(lán)莓樣品于25 mL的容量瓶中，用0.1%的草酸定容，混勻，分析前用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，HPLC法測(cè)定[5]。

1.3.2 維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品50.15 mg于小燒杯中，用0.1%的草酸溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL的棕色容量瓶中，用0.1%的草酸稀釋至刻度，得到維生素C含量為1 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 色譜條件

流動(dòng)相0.1%的草酸-甲醇（95∶5），流速為 1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，進(jìn)樣量為10 μL，柱溫箱溫度30 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制

用0.1%的草酸溶液配制不同濃度維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線見(jiàn)圖1說(shuō)明線性關(guān)系較好，分析過(guò)程中受樣品中其他雜質(zhì)的影響較少。

圖1 維生素C標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

2.2 回收率實(shí)驗(yàn)

在一組容量瓶中，分別加入等量藍(lán)莓樣品，然后分別加入不同量的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，同時(shí)做樣品空白，測(cè)定樣品中維生素含量及回收率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可知，方法采用0.1%的草酸-甲醇（95∶5）為流動(dòng)相測(cè)定藍(lán)莓中的維生素C含量，加標(biāo)回收率為97.76%～102.75%，說(shuō)明方法準(zhǔn)確性高、操作簡(jiǎn)便、實(shí)用。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

同一藍(lán)莓樣品在同一實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定6次，計(jì)算精密度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，通過(guò)對(duì)精密度的考察，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.39%，說(shuō)明該方法具有較高的再現(xiàn)性和重復(fù)性，方法穩(wěn)定、可靠。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 10種藍(lán)莓維生素C含量

每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，并計(jì)算平均值，結(jié)果以平均值表示，如表3所示。從表3可以看出，10種藍(lán)莓維生素C含量從高到低依次為公爵＞藍(lán)豐＞德雷珀＞萊克西＞綠寶石＞藍(lán)金＞奧尼爾＞卡拉＞明星＞利波特。

表3 10種藍(lán)莓維生素C含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)流動(dòng)相及樣品溶劑、檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇，建立了一種測(cè)定藍(lán)莓中維生素C含量的高效液相色譜方法，該方法測(cè)定藍(lán)莓中的維生素C含量相對(duì)可靠，還具有選擇性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。本研究利用該方法測(cè)定了日照地區(qū)10種藍(lán)莓中的維生素C含量，其中公爵維生素C含量最高，利波特維生素C含量最低，為進(jìn)一步了解日照地區(qū)藍(lán)莓中營(yíng)養(yǎng)成分、進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。