血漿miR-26b 表達鑒別診斷急性呼吸窘迫綜合征和急性心力衰竭的臨床價值

呂小波,郜長江,胡洪磊

急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是臨床常見的急危重癥,病死率極高[1]。ARDS 是在嚴重感染、創傷、休克等非心源性肺內外疾病過程中,肺部毛細血管內皮細胞和肺泡上皮細胞損傷造成彌漫性肺間質及肺泡水腫,導致急性低氧性呼吸功能不全或衰竭[2]。急性心力衰竭(acute heart failure,AHF)是指繼發于心臟功能異常而迅速發生或惡化的癥狀和體征,并伴有血漿利鈉肽水平提高,既可能是急性起病,也可能表現為慢性心力衰竭急性失代償,其中后者更為常見,占70%～80%,臨床上又以急性左心衰竭最為常見[3]。AHF 常危及病人生命,必須快速診斷并進行緊急施救和治療[4]。由于臨床上重癥監護室(intensive care unit,ICU)病人常處于平臥位,且由于鎮靜原因不能遵照指令呼氣、吸氣,在胸部X 線片上多表現出心影增大,因此,ARDS 病人需要與AHF 病人進行鑒別[5]。目前,臨床常用超聲心電圖對二者進行鑒別,但易受外界因素干擾,在快速鑒別兩種疾病過程中存在不足。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一類由19～25nr組成的小分子編碼RNA,通過與靶基因3"非翻譯區堿基的互補配對結合,在轉錄后水平調控靶基因蛋白表達[6]。miR-26b 存在于2 號染色體CTDSP1 基因第4 個內含子,多富集于心臟[7]。miR-26b 與心臟功能有關,但是否能夠作為AHF 與ARDS 疾病鑒別診斷的指標仍缺乏相關研究,因此,本研究探討血漿miR-26b 水平對ARDS 及AHF 的鑒別診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月—2019 年8 月我院收治的ARDS 病人45 例作為ARDS 組,年齡(63.7±12.5)歲,其中男24 例,女21 例;AHF 病人50 例作為AHF 組,年齡(65.4±11.8)歲,其中男28 例,女22 例。兩組年齡、性別比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。納入標準:①胸部X 線片顯示雙肺均有滲出性表現;②ARDS 組符合2012 年柏林會議制訂的ARDS 標準[8];③AHF 組符合2010 年中華醫學會心血管病學分會標準。排除標準:①有慢性心力衰竭、繼發肺動脈栓塞、肺源性心臟病、慢性肺阻塞肺疾病、肺間質纖維化病人;②超聲心動圖檢查圖像不清晰者。本研究獲得我院醫學倫理委員會批準,病人及家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 主要試劑及儀器 RNA 提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司,DP443)、逆轉錄試劑盒(北京天根生化科技有限公司,FP209);臺式離心機(美國,Beekman 公司)、高速冷凍離心機(德國,EPPENDORF 公司)、超低溫冷凍冰箱(德國,Siemens 公司)、多功能酶標儀(瑞士,TECAN 公司)、熒光定量PCR 儀AB17500(美國,ABI 公司)。

1.3 研究方法

1.3.1 樣品采集及保存 兩組受試者于入院第2 日清晨空腹狀態下,抽取靜脈血5 mL,以3.8%枸櫞酸鈉抗凝,常溫下靜置1～2 h,再使用離心機在4 ℃下3 000 r/min 離心15 min。離心后取出離心管,將上層血漿移至滅菌的EP 管中,并放置于-80 ℃保存。

1.3.2 qRT-PCR 法檢測血漿中miR-26b 水平 按試劑盒說明書提取血漿總RNA,按照逆轉錄試劑盒說明書進行反轉錄,將RNA 逆轉錄為cDNA,產物置于- 20 ℃保存。使用 Reverse Transcription Kit(Takara)進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應(qRTPCR)檢測miR-26b 含量。利用ABI7500 系統進行qRT-PCR 反應。反應條件為:95 ℃10 min,95 ℃15 s,72 ℃15 s,共40 個循環。采用2-△△CT法對血清miR-26b 表達水平進行定量分析,以U6 為內參,記錄每個反應的Ct 值。引物序列見表1。

表1 qRT-PCR 引物序列

1.4 觀察指標 ARDS 病人于入院第1 天、AHF 病人于發病第1 天尚未采取利尿措施時,進行超聲心動圖檢測、床旁胸片檢測及血氣分析。超聲心電圖由心臟超聲科專業醫師進行檢測。左室舒張末期內徑(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD):采用二維超聲胸骨旁長軸圖像測量二尖瓣腱索水平的左室短軸內徑;下腔靜脈直徑(inferior vena cava diameter,IVCD):病人于俯臥位,測量劍突下下腔靜脈長軸距離右房入口2 cm 處的內徑;左房壓測量:采用多普勒超聲技術測量二尖瓣最大反流速度,估測左房壓;肺動脈壓力:采用連續多普勒超聲技術測量三尖瓣最大反流速度,估測肺動脈收縮壓。

1.5 統計學處理 應用SPSS 21.0 軟件進行統計學分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示,采用t檢驗;采用受試者工作特征曲線(ROC)分析血漿中miR-26b、超聲心動圖對ARDS 及AHF 的鑒別診斷價值。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組病人一般資料比較 兩組病人年齡、性別、體質指數(BMI)、收縮壓、舒張壓、空腹血糖比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。詳見表2。

表2 兩組病人一般資料比較

2.2 兩組血漿miR-26b 表達水平比較 ARDS 組血漿miR-26b 表達水平高于AHF 組,差異有統計學意義(P＜0.05)。詳見表3。

2.3 兩組超聲心動圖指標比較 ADRS 組LVEDD、IVCD 均低于AHF 組(P＜0.05),兩組左房壓升高及肺動脈壓升高例數比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。詳見表4。

表3 兩組血漿miR-26b 表達水平比較(±s)

表3 兩組血漿miR-26b 表達水平比較(±s)

注:t =7.577,P ＜0.001。

組別 例數 miR-26b ARDS 組 45 9.48±2.47 AHF 組 50 6.08±1.89

表4 兩組超聲心動圖指標比較

2.4 血漿miR-26b、LVEDD、IVCD 對急性呼吸窘迫及AHF 的鑒別診斷價值 ROC 結果顯示,血漿miR-26b表達水平鑒別診斷ARDS 和AHF 的ROC 曲線下面積(AUC)為0.855,敏感度為71.1%,特異性為86.0%,95%CI(0.781,0.929);超聲心動圖(LVEDD 聯合IVCD)鑒別診斷ARDS 和AHF 的AUC 為0.799,敏感度為82.2%,特異性為72.0%,95%CI(0.709,0.899)。miR-26b 與超聲心動圖對ARDS、AHF 的診斷結果一致(P＞0.05)。詳見表5 及圖1。

表5 miR-26b、超聲心動圖對ARDS、AHF 鑒別診斷價值比較

圖1 血漿中miR-26b 水平、超聲心動圖鑒別診斷ARDS、AHF 的ROC 曲線圖

3 討 論

ARDS 是常見的危重病,嚴重危害病人生命健康,已成為重要的公共衛生問題[9]。ARDS 的發病機制復雜且不完全明確,目前認為主要有兩種可能機制:①細菌負荷、炎癥細胞浸潤及炎癥介質的釋放[10];②肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡及肺泡表面活性物質系統的變化。越來越多的研究證明miRNAs 參與了ARDS 的發生與發展[11]。AHF 在臨床上以急性左心衰最為常見。急性左心衰是急性發作或加重的左心功能異常所導致的心肌收縮力明顯降低,心臟負荷加重,造成急性心排血量驟減,肺循環壓力突升,周圍循環阻力增大,引起肺循環充血而出現急性肺淤血、肺水腫的臨床綜合征[12]。急性右心衰竭是某些原因導致右心室心肌收縮力急劇下降或右心室前后符合突然加重,導致右心排血量急劇降低的臨床綜合征[13]。ARDS 與AHF 在臨床診斷過程中具有極高的相似度,為了確保病人的病情得到及時診治,采取有效的手段鑒別兩種疾病迫在眉睫。臨床鑒別兩種疾病常采用超聲心動圖,但是其操作過程受操作者能力的影響較大,診斷指標存在一定局限性,而miR-26b 檢測具有方便、快捷、結果規范統一等優點。因此,本研究探討miR-26b 作為鑒別兩種疾病指標的可能性與診斷價值。ARDS 和AHF都可導致胸腔積液增多,在胸部X 線片上表現為雙肺滲出[14-15]。有研究表明,ARDS 病人及AHF 病人胸部X 線片均有部分表現為心影增大,因此,ARDS 及AHF疾病很難以彌散性滲出的胸片來進行鑒別[16]。目前已有研究證明,miRNAs 與ARDS 的發生發展有關,證實miRNAs 在炎癥反應和細胞凋亡中具有重要作用[17];且miRNAs 被認為是心血管診斷和預后具有研究前景的生物標志物。有研究表明,miR-26b 水平與冠狀動脈病變具有相關性,可作為冠狀動脈病變程度的參考指標[18]。本研究結果表明,與AHF 組相比,ARDS 組血漿miR-26b 水平明顯升高,差異有統計學意義(P＜0.05),提示miR-26b 是鑒別ARDS 及AHF疾病的潛在生物學指標。

超聲心動圖是一種利用超聲原理進行心血管疾病診斷的方法,具有較高的靈活性,能對心臟進行全方位多角度的檢查,具有經濟、無創、無放射性等優點[19]。目前,有研究表明,超聲心動圖檢測一定程度上能夠鑒別ARDS 及AHF[20]。本研究通過對兩組病人進行超聲心動圖檢測,結果顯示,LVEDD 與IVCD 能夠協助鑒別ARDS 與AHF,左房壓升高及肺動脈壓升高則對ARDS 及AHF 的鑒別無顯著性影響。ROC 結果顯示,miR-26b 對ARDS 及AHF 的鑒別具有較好的診斷價值,AUC 為0.855,敏感度為71.1%,特異性為86.0%;超聲心動圖鑒別診斷ARDS 及AHFF 的AUC 為0.799,敏感度為82.2%,特異性為72.0%,miR-26b 與超聲心動圖對ARDS、AHF 的診斷結果一致,miR-26b 對ARDS 及AHF 的鑒別診斷與超聲心動圖診斷相比效果一致,表明超聲心動圖和miR-26b 均能對ARDS 及AHF 進行鑒別,但miR-26b 的操作更為簡單、規范,受人為操作及客觀外在條件影響較小,具有更快捷、高效的優勢,提示miR-26b 可以作為ARDS、AHF 鑒別診斷的指標。

綜上所述,miR-26b 在ARDS 病人血漿中呈高表達,在AHF 病人血漿中呈低表達,且ROC 結果顯示,miR-26b 與超聲心動圖對ARDS、AHF 的鑒別診斷結果一致,但miR-26b 能夠更為快捷、規范,對ARDS 及AHF 的鑒別診斷具有一定價值。