VITEK-2全自動微生物鑒定儀在蠟樣芽孢桿菌檢測中應用分析

鐵嶺市疾病預防控制中心 （ 遼寧 鐵嶺 112000）

內容提要： 目的：分析蠟樣芽胞桿菌采用VITEK-2全自動微生物鑒定儀檢測的結果。方法：使用標準方法對蠟樣芽胞桿菌的標準菌株、陽性菌株檢測，使用VITEK-2全自動微生物鑒定系統檢測，對比兩種檢測方法的檢出時間和檢出率。結果：標準方法與VITEK-2全自動微生物鑒定儀在19株蠟樣芽胞桿菌檢測中符合率為100.00%，縮短檢測時間為7～47h。結論：VITEK-2全自動微生物鑒定系統在鑒定蠟樣芽胞桿菌中具有較高的準確性，且檢測速度更為快捷，操作步驟更為簡便等特點，對于食源性疾病監測、食物中毒檢測工作中更適合。

在芽胞桿菌中包括蠟樣芽孢桿菌，存在于土壤、水、空氣以及動物腸道，菌體細胞呈現桿狀，末端方，成短鏈（至少1.0～3.0μm）或長鏈（1.2～3.0μm），適宜生長溫度在20～45°C，若生長溫度在10°C以下則會減慢生長速度或者停止生長。現階段關于蠟樣芽孢桿菌細菌的報道中，多以食源性疾病為主，在食物中檢出此細菌的概率較大。若人體過多攝入蠟樣芽孢桿菌細菌，會增大食物中毒癥狀的發生概率。所以，進行蠟樣芽孢桿菌細菌的快速、精準檢測，對于保障人們健康有著至關重要的影響。蠟樣芽孢桿菌細菌分布范圍較廣，是菌體細胞中典型的一種，某些菌株可生出1.5μm有色桿狀腸毒素，其孢子為橢圓形，會出現腹瀉型胃腸炎腸毒素和致嘔吐型胃腸炎腸毒素兩類，因此，對于該細菌的檢查對臨床具有重要的意義。對于VITEK-2檢測儀的應用，能在避免人為誤差發生的同時，通過對反應結果自動讀取、生成，實現對食源性疾病的高效檢測。且相較于傳統API生化鑒定的應用，VITEK-2檢測儀的準確性更高。目前對于蠟樣芽孢桿菌的檢查通常采用檢驗室標準的方法，VITEK-2全自動微生物鑒定系統檢測是今年發展起來的檢查方法，而本次研究為了改善蠟樣芽胞桿菌的檢測結果，利用并分析VITEK-2全自動微生物鑒定系統和標準方法檢測蠟樣芽胞桿菌陽性菌株及蠟樣芽胞桿菌的結果，內容如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 菌株來源

本單位工作中分離、疾控中心、中國藥品生物制品鑒定所、中國普通微生物菌種保藏中心分別提供10株、5株、2株、2株蠟樣芽胞桿菌。

1.1.2 培養基和檢測儀器

VITEK-2全自動微生物鑒定儀、濁度儀（型號XA22-STZ-A1）、BAC芽孢桿菌鑒定卡（型號REF V1304：20張卡片/盒）。

1.2 方法

1.2.1 標準方法。根據GB/T4789.14-2003蠟樣芽胞桿菌的方法檢測，選取GB/T4789.28-2003食品衛生微生物學檢驗染色法、培養基和試劑，使用GB//T4789.2食品衛生微生物學檢驗菌落總數測定。

1.2.2 VITEK-2全自動微生物鑒定儀檢測。復蘇1 9株蠟樣芽胞桿菌陽性菌株和蘇云金芽孢桿菌1菌株，在甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂培養基上接種，溫度32°C，時間13h，選取典型菌落，劃線并分離，置于血瓊脂平板和含有多黏素菌B的瓊脂平板上，溫度、時間分別為32°C、13h，實施溶血和純培養試驗。分離純培養的菌株，同氯化鈉0.9%溶液+菌苔充分混勻，調菌懸液至0.3～0.5麥氏度，置于鑒定卡架上，連接菌液管和BAC鑒定卡，輸入鑒定卡信息至VITEK-2全自動微生物鑒定系統，鑒定卡置入儀器充填室實施自動填充，完成后將鑒定卡取出置入孵育室實施自動培養和檢測，15～18h后得到結果。

2.結果

2.1 檢測結果

蠟樣芽胞桿菌19株在營養瓊脂平板（包含多粘菌素B）菌落形態是融蠟狀、邊緣不整、不透明、灰白色。

2.2 蠟樣芽胞桿菌采取標準方法檢測

2.2.1 證實試驗。革蘭陽性桿菌，芽胞全部在菌體內。明膠液化、動力、硝酸鹽還原、厭氧下葡萄糖發酵、過氧化氫酶、甘露醇分別為（+）、（+）、（+）、（+）、（+）、（-）。

2.2.2 鑒別蘇云金芽孢桿菌試驗。紅色結晶小體和游離芽胞均不存在，結果是陰性。

2.3 VITEK-2全自動微生物鑒定儀系統檢測蠟樣芽胞桿菌

19株菌株的鑒定結果：調兵山8#菌株、7#菌株98%蠟樣芽胞桿菌；調兵山10#菌株、11#菌株、9#菌株、6#菌株、5#菌株、1#菌株，開原2#菌株、3#菌株、4#菌株96%蠟樣芽胞桿菌；調兵山2#菌株、3#菌株、4#菌株，開原1#菌株91%蠟樣芽胞桿菌。標準1#菌株、標準2#菌株分別為100%蠟樣芽胞桿菌、100%蘇云金芽孢桿菌。鑒定時間為15h。

3.討論

蠟樣芽胞桿菌攝入量直接影響到患者食物中毒的發生概率，以＞105CFU/g（mL）為標準值，若人體蠟樣芽胞桿菌攝入量超過上述閾值，極易引起食物中毒現象的發生。具體癥狀表現為類似于金黃色葡萄球菌的嘔吐型和以及類似于氣莢膜梭菌的腹瀉、腹痛型，不同癥狀的潛伏期不同。

標準的檢驗蠟樣芽胞桿菌的方法中，病原菌鑒定利用生化性狀觀察形態、培養特性等證實試驗進行鑒定，在具體工作中，因為復雜的檢測樣本和蠟樣芽胞桿菌導致的中度癥狀是非特異性，鑒定病原菌工作具有很大難度，常常需要利用較多項技術實施綜合驗證和判斷[1]。同時在標準方法中，鑒別蘇云金芽孢桿菌也比較繁瑣同時鑒定時間大大延長，是由于此類均同蠟樣芽胞桿菌生化特性、培養形態相似度較高[2]。

VITEK在檢測蠟樣芽胞桿菌是利用VITEK-2鑒定系統生化鑒定純培養的菌落[3]。生化反應項目超過30項，較標準方法生化反應項目多很多[4]。本研究結果可知，19株蠟樣芽胞桿菌、陽性標準菌株VITEK可信度分別為96%、100%，根據有動力特征性反應、強溶血、典型的純培養菌落特征，可對VITEK的鑒定結果進行證實。同時完成鑒別蘇云金芽孢桿菌。所以利用VITEK鑒定蠟樣芽胞桿菌使實驗步驟減少，降低實驗結果受到不良因素影響而出現的誤差概率，縮短檢測時間，較標準方法檢測節省7～47h[5]。

VITEK特點為重復性、操作簡單、敏感性、特異性、認為誤差小，同時可自動分析、定期掃描、聯機孵育[6]。本研究利用VITEK快速鑒別蠟樣芽胞桿菌，驗證了標準方法和形態學，說明其準確性和可靠性[7]。所以，給予VITEK鑒定可快速鑒別食品中的蠟樣芽胞桿菌。

利用標準方法鑒定食物中毒病原菌需要時間較長，工作量大，盡管有時會將可疑菌株分離出來，但是因為條件不具備、經驗不豐富等原因對于正確的判斷很難實現[8]。對VITEK充分利用，按照蠟樣芽胞桿菌的生化特性和培養可短時間內鑒定，并減少人工，在檢測較多樣本時保證有序和冷靜的檢驗。保證檢測報告及時且準確，將科學依據提供給食源性疾病的處理工作中，應用價值較高。