分析高危型HPVDNA 檢測在宮頸病變篩查和宮頸癌預(yù)防中的應(yīng)用效果

朱月娥

玉溪市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，云南云溪 653100

宮頸癌是對女性健康威脅較大的一種惡性腫瘤。 患者發(fā)病早期無明顯癥狀，發(fā)展到晚期，會(huì)出現(xiàn)陰道出血等癥狀[1]。 宮頸癌目前無治愈方法，但在發(fā)病前或者發(fā)病早期進(jìn)行明確的診斷，并采取積極的診療措施，可有效延長患者遠(yuǎn)期生存率及生存質(zhì)量[2]。 世界衛(wèi)生組織建議女性每年進(jìn)行宮頸病變篩查，以提高宮頸癌前病變檢出率，進(jìn)行宮頸癌預(yù)防[3]。 臨床研究顯示，宮頸癌是由高危型HPV 持續(xù)感染導(dǎo)致，進(jìn)行高危型HPV 篩查，可有效檢出宮頸癌前病變，進(jìn)行治療和提前預(yù)防。 而目前的檢測技術(shù)中，還不能夠?qū)Ω呶Ｐ虷PVDNA 進(jìn)行細(xì)胞組織培養(yǎng)， 并且生殖道感染患者的血清學(xué)中，高危型HPVDNA 未有明顯的顯示，因此， 需要采用直接高危型HPVDNA 檢測方式開展臨床檢測。 高危型HPVDNA 檢測及薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查都是臨床常用的檢測宮頸病變的有效手段。 該研究將兩種檢測方法應(yīng)用在2019 年2 月—2020 年1 月于該院進(jìn)行宮頸病變篩查的300 例患者中， 目的是對比分析高危型HPVDNA 檢測的應(yīng)用效果。 現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

300 例病例均為該院宮頸病變篩查患者。 患者年齡20～62 歲，中位35.45 歲。 文化程度高中以上學(xué)歷120 例，初高中學(xué)歷150 例，小學(xué)及以下學(xué)歷30 例。 納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均為已婚女性，性生活規(guī)律。 因常規(guī)體檢、陰道分泌物異常、陰道不規(guī)則出血等來院檢查。 排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他生殖系統(tǒng)病變者。患者及家屬知情并同意參加該研究。該研究報(bào)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 對比方法 同時(shí)對入組對象進(jìn)行高危型HPVDNA檢測薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查及陰道鏡檢查， 將陰道鏡檢查下定點(diǎn)活檢作為金標(biāo)準(zhǔn)， 對高危型HPVDNA 檢測及薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行對比研究。

1.2.2 檢測方法①高危型HPVDNA 檢測 患者行結(jié)石膀胱位， 使用窺陰器將宮頸完全暴露， 用專用的標(biāo)本采集器，收集患者宮頸管及黏膜交界處細(xì)胞組織，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5 圈后，停留30 s。 將刷頭折斷后，裝在專用的無菌容器（內(nèi)有4 mL 保存液）中，將瓶蓋擰緊后，填寫患者信息，放入2～8℃的冰箱中保存并及時(shí)送至檢驗(yàn)室。 使用第二代雜交捕獲技術(shù)（HC2）檢測。 檢測工具為美國Digene 第二代基因雜交捕獲信號放大檢測系統(tǒng)（HC2）。使用配套的試劑盒對國內(nèi)女性人群中常感染的幾種高危型HPV 病毒16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、 58、59、68 進(jìn) 行 篩 查。發(fā)現(xiàn)任意一種高危型HPV 病毒或者高危型HPVDNA 值在1.0 ng/L 以上者為檢測陽性。 ②陰道鏡檢查檢測 應(yīng)用的儀器為深圳金科威公司的SLC2000 電子陰道鏡。 患者行膀胱截石位，使用擴(kuò)陰器擴(kuò)陰，并使用醋酸棉球（5%）將宮頸濕敷30 s。 陰道鏡下醋白上皮區(qū)碘染宮頸不著色或者著色淺以及有芥末黃色變色則可判定碘試驗(yàn)陽性或者可疑。則在異常部位進(jìn)行多點(diǎn)活檢。將病理活檢標(biāo)本及時(shí)送檢。 病理活檢結(jié)果判定為正常、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，宮頸癌。③薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查 檢測采用的儀器為美國利普LPT，包括配套的宮頸細(xì)胞學(xué)采樣器、細(xì)胞保存液。患者行膀胱截石位，使用專用的擴(kuò)陰器擴(kuò)充陰道。輕擦去分泌物。使用專用的細(xì)胞刷于患者宮頸口處以及頸管處收集細(xì)胞，朝一個(gè)方向轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)胞刷8～10 圈。 取樣完畢后，將刷頭放置保存液中送檢。 采用TBS 描述性報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分析診斷。 診斷結(jié)果分為正常、 非典型細(xì)胞（ASCUS）、低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）、高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）、癌細(xì)胞。 后4 種的細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果均為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)3 組宮頸病變篩查結(jié)果。與陰道鏡檢查結(jié)果相比，評估高危型HPVDNA 檢測的準(zhǔn)確度、特異度及靈敏度。

2 結(jié)果

2.1 3 組宮頸病變篩查結(jié)果統(tǒng)計(jì)

高危型HPVDNA 檢測出癌前病變46 例（34+7+5），宮頸癌2 例， 共檢出宮頸病變48 例。 陰道鏡檢查檢測出癌前病變共20 例（17+2+1），宮頸癌1 例。 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查診斷癌前病變30 例（16+10+4），宮頸癌0 例。 與陰道鏡檢查相比， 高危型HPVDNA 對宮頸病變檢出率為16.00%， 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查對宮頸病變的檢出率為1.00%。 見表1。

表1 宮頸病變篩查結(jié)果統(tǒng)計(jì)[n（%）]Table 1 Statistics of screening results of cervical lesions[n(%)]

2.2 評估高危型HPVDNA 檢測的準(zhǔn)確度、 特異度及靈敏度

高危型HPVDNA 檢測宮頸病變的準(zhǔn)確度為92.00%，特異度為80.00%，靈敏度為96.00%。

3 討論

HPV 感染是宮頸癌發(fā)病的主要原因。 及早發(fā)現(xiàn)高危型HPV 感染是宮頸癌前病變的重要診斷方法， 可有效對宮頸癌進(jìn)行預(yù)防[4]。 臨床研究證實(shí)，宮頸癌是一個(gè)慢性變化過程， 高危型HPV 持續(xù)感染是大多宮頸癌發(fā)生的必需條件。 而癌前病變患者，發(fā)展至浸潤癌需要8～12 年左右的時(shí)間[5-6]。 由此診斷可明確，對CIN 進(jìn)行早期的診斷，可對宮頸癌進(jìn)行有效的預(yù)防。

臨床研究顯示，HPV 屬于嗜上皮性病毒群，該病毒分型比較多， 已知的女性生殖道高危型HPV 感染類型有35種，而我國女性中易感染的高危類型有19 種亞型[7]。 這19 種類型與宮頸癌前病變及宮頸癌均有很大的關(guān)系。

高危型HPVDNA 檢查，可通過初步篩查手段，對宮頸病變尤其是具有高風(fēng)險(xiǎn)的癌前病變有較高的應(yīng)用價(jià)值。這種檢查方式，可以單獨(dú)應(yīng)用于宮頸病變的篩查中，也可與細(xì)胞學(xué)檢查方式相結(jié)合， 提高檢出率。 通過高危型HPVDNA 檢查，還可對篩查者的宮頸病變風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行預(yù)測，并確定下一次的篩查時(shí)間[8]。 對于有高度宮頸癌病變風(fēng)險(xiǎn)的患者，還可以進(jìn)行持續(xù)的檢測，具有較高的隨訪價(jià)值。該檢查中，患者陰性預(yù)測值也比較高，可以降低假陰性的診斷率，防止耽誤患者治療。 并且該檢查方法具有較高的客觀性， 檢測結(jié)果比較準(zhǔn)確。 研究結(jié)果顯示， 高危型HPVDNA 檢測宮頸病變的準(zhǔn)確度為92.00%， 特異度為80.00%，靈敏度為96.00%。這與晏燕等[9]的研究中，高危型HPVDNA 檢測宮頸病變的敏感性93.9%，特異性95.4%的研究結(jié)果具有較高一致性。 表明其對宮頸病變的篩查具有較高的利用價(jià)值。

高危型HPVDNA 檢查，可明確高危型HPV 病毒感染情況，相比細(xì)胞學(xué)檢查及陰道鏡病理檢查，有更高的診斷價(jià)值。 高危型HPVDNA 檢查的作用原理為通過化學(xué)發(fā)光法將捕獲到的抗體信號進(jìn)行增強(qiáng)。 先將雙鏈DNA 分解，轉(zhuǎn)換成能夠參加雜交反應(yīng)的核苷酸單鏈DNA。 并通過將單鏈DNA 與RNA 探針組合成為RNADNA 雜合體。 將采集樣本中的靶DNA 與特異的高危型HPVRNA 探針雜交捕獲， 再將捕獲捕獲固定的雜交與堿性磷酸酶交聯(lián)的抗RNA∶DNA 抗體反應(yīng)[10]。通過將堿性磷酸酶應(yīng)用在檢測中，使酶底物發(fā)光。 通過對發(fā)光強(qiáng)弱的判斷，可以對樣本中的堿性磷酸酶含量進(jìn)行確定。 堿性磷酸酶含量對RNADNA雜合體的含量有明確的指示意義。 通過將堿性磷酸酶裂解底物釋放的光含量進(jìn)行單位轉(zhuǎn)換， 可以測得樣本中高危型HPV-DNA 負(fù)荷量，從而得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 該種檢驗(yàn)方法中， 采集的標(biāo)本中高危型HPV-DNA 負(fù)荷量在1.0 pg/mL以上時(shí)，則可認(rèn)定檢測陽性，具有較高的診斷準(zhǔn)確率。通過在癌變早期有效檢出，可進(jìn)行及早干預(yù)，阻斷宮頸癌繼續(xù)發(fā)展的途徑，降低宮頸癌引發(fā)的病死率[11-12]。薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查， 是通過對病變細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分析而診斷疾病的一種方法。 屬于一種宮頸疾病初步篩查方式，診斷結(jié)果分為正常、ASCUS、LSIL、HSIL、癌細(xì)胞。細(xì)胞學(xué)檢測陽性提示有宮頸病變。可再通過陰道鏡檢查做進(jìn)一步復(fù)查。這種檢測方式，受標(biāo)本采集等主觀影響比較大，結(jié)果有一定的差異。 研究結(jié)果顯示， 陰道鏡檢查檢測出癌前病變共20例，宮頸癌1 例。高危型HPVDNA 檢測出癌前病變46 例，宮頸癌2 例。 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查診斷癌前病變30 例，宮頸癌0 例。與陰道鏡檢查相比，高危型HPVDNA 對宮頸病變檢出率為16.00%， 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查對宮頸病變的檢出率為1.00%。 表明與薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查相比，高危型HPVDNA 對宮頸癌前病變及早期宮頸癌的檢測結(jié)果均比較準(zhǔn)確，可為臨床診療提供更科學(xué)的依據(jù)。

綜上所述，宮頸癌是威脅女性健康的惡性疾病之一，對于該疾病建議盡早預(yù)防和干預(yù)。 宮頸癌是高危型HPV感染導(dǎo)致的病變，對高危型HPVDNA 進(jìn)行檢測，可以通過高危型HPV 定量、分型等方法，提高宮頸癌前病變的檢出率。 應(yīng)用于宮腔病變以及宮頸癌的早期篩查中具有較高的價(jià)值，可有效預(yù)防宮頸癌。