新生兒缺氧缺血性腦病血清HMGB1、脂蛋白a 水平變化及臨床意義

姜淑萍 朱洪斌 劉 芳 才海燕 馮寧寧 閆愛霞

河北省秦皇島市婦幼保健院新生兒科，河北秦皇島 066000

缺氧缺血性腦病是指圍生期新生兒窒息所引起的缺氧缺血性腦損傷，是新生兒神經(jīng)系統(tǒng)異常和死亡的主要因素[1]。其在新生兒中的發(fā)病率為0.2%～0.4%，其預(yù)后較差，死亡率較高[2]。目前的臨床診斷主要綜合影像學(xué)診斷結(jié)果、新生兒的臨床表現(xiàn)及病史進(jìn)行判斷，缺乏客觀、準(zhǔn)確且有效的缺氧缺血性腦病血清生化標(biāo)志物[3]。高速泳動(dòng)族蛋白B1（HMGB1）屬于非組蛋白家族成員，主要分布于細(xì)胞核內(nèi)，參與DNA 復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及損傷修復(fù)過程。有報(bào)道顯示，HMGB1 與心力衰竭、急性腦梗死等心腦血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生密切相關(guān)[4-5]。脂蛋白a 主要由肝臟合成，能夠抑制血栓溶解，在腦卒中和冠心病等心腦血管疾病患者中表達(dá)上調(diào)，與腦卒中和冠心病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6-8]。目前新生兒缺氧缺血性腦病的血清診斷標(biāo)志物仍然十分缺乏，本研究通過檢測(cè)缺氧缺血性腦病新生兒血清HMGB1、脂蛋白a 水平，分析這兩個(gè)指標(biāo)與新生兒神經(jīng)行為測(cè)評(píng)（NBNA）評(píng)分的關(guān)系及其對(duì)診斷價(jià)值。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018 年1 月—2020 年3 月河北省秦皇島市婦幼保健院（以下簡稱“我院”）診治的105 例缺氧缺血性腦病新生兒作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①出生后24 h 內(nèi)發(fā)生缺氧缺血性腦病；②符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)制訂的《新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)》[9]；③腦部CT 結(jié)果顯示有低密度灶改變。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在遺傳代謝性疾病；②心肺功能異常；③合并其他類型腦部疾病；④治療期間轉(zhuǎn)院；⑤治療期間死亡及治療結(jié)束出院后失訪；⑥有貧血和呼吸道阻塞性疾病。觀察組中男60 例，女45 例；首胎91 例，非首胎14例；孕齡37～43 周，平均（39.88±2.61）周；出生體重2190～4310 g，平均（3033.79±996.37）g。參考新生兒缺氧缺血性腦病分度標(biāo)準(zhǔn)[10]將其進(jìn)一步分為輕度組57 例，中度組33 例和重度組15 例。選擇同期在我院婦產(chǎn)科出生的53 名健康新生兒作為對(duì)照組，其中男31 名，女22 名；首胎43 名，非首胎10 名；孕齡37～42 周，平均（39.15±2.73）周；出生體重2235～4408 g，平均（3089.46±1000.83）g。觀察組和對(duì)照組性別比例、首胎比例和孕齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。新生兒家屬均簽署知情同意書，本研究經(jīng)過我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核。

1.2 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

①兩組于出生后立即采集3 mL 靜脈血，室溫靜置30 min，以轉(zhuǎn)速5000 r/min 離心30 min，離心半徑為12 cm，吸取上清液至另一潔凈離心管中，-80℃凍存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清HMGB1、脂蛋白a水平，試劑盒購自美國Abcam 科技有限公司（批號(hào)：ab18256、ab212165）。②于哺乳后1 h 測(cè)定觀察組的NBNA 評(píng)分[11]，主要包括行為能力評(píng)估（6 項(xiàng)）、原始反射評(píng)估（3 項(xiàng)）、主動(dòng)肌張力評(píng)估（4 項(xiàng)）和被動(dòng)肌張力評(píng)估（4 項(xiàng)），總分＜35 分為腦損傷，35～36 分為可疑腦損傷，＞36 分為正常。③比較各組血清HMGB1、脂蛋白a 水平及NBNA 評(píng)分，分析血清HMGB1、脂蛋白a水平與NBNA 評(píng)分的相關(guān)性及其對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析血清HMGB1、脂蛋白a 水平與NBNA 評(píng)分的相關(guān)性，采用受試者工作特征（ROC）曲線評(píng)估血清HMGB1、脂蛋白a 水平對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病的診斷價(jià)值。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組和觀察組血清HMGB1、脂蛋白a 水平比較

觀察組血清HMGB1 和脂蛋白a 水平均顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05）。見表1。

表1 對(duì)照組和觀察組血清HMGB1、脂蛋白a 水平比較（ng/mL，）

表1 對(duì)照組和觀察組血清HMGB1、脂蛋白a 水平比較（ng/mL，）

注：HMGB1：高速泳動(dòng)族蛋白B1

2.2 不同分度缺氧缺血性腦病新生兒血清HMGB1、脂蛋白a 水平及NBNA 評(píng)分比較

三組血清HMGB1、脂蛋白a 水平及NBNA 評(píng)分比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05）。重度組血清HMGB1、脂蛋白a 水平高于中度組和輕度組，NBNA評(píng)分低于中度組和輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05）。中度組血清HMGB1、脂蛋白a 水平高于輕度組，NBNA 評(píng)分低于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05）。見表2。

表2 不同分度缺氧缺血性腦病新生兒血清HMGB1、脂蛋白a 水平及NBNA 評(píng)分比較（）

表2 不同分度缺氧缺血性腦病新生兒血清HMGB1、脂蛋白a 水平及NBNA 評(píng)分比較（）

注：與輕度組比較，aP ＜0.05；與中度組比較，bP ＜0.05。HMB1：高速泳動(dòng)族蛋白B1；NBNA：新生兒神經(jīng)行為測(cè)評(píng)

2.3 缺氧缺血性腦病新生兒血清HMGB1、脂蛋白a 水平與NBNA 評(píng)分的相關(guān)性

血清HMGB1 水平（r=-0.9123，P ＜0.05）、脂蛋白a 水平（r=-0.9045，P ＜0.05）均與NBNA 評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。見圖1。

2.4 血清HMGB1、脂蛋白a 水平對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病的診斷價(jià)值

血清HMGB1、脂蛋白a 聯(lián)合檢測(cè)的ROC 曲線下面積（AUC）、靈敏度和特異度均高于各項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè)，見表3、圖2。

3 討論

缺氧缺血性腦病主要由腦部缺氧缺血所致，目前普遍認(rèn)為細(xì)胞代謝紊亂、免疫功能失調(diào)、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)和圍生期缺血再灌注等是缺氧缺血性腦病的主要發(fā)病機(jī)制[12-14]。缺氧缺血性腦病的發(fā)病過程較為復(fù)雜，病死率高且后遺癥多[15]。因此尋找與缺氧缺血性腦病發(fā)病密切相關(guān)的血清標(biāo)志物，并將其應(yīng)用于新生兒缺氧缺血性腦病的診斷和治療中具有重要的臨床意義。

圖1 血清HMGB1、脂蛋白a 水平與NBNA 評(píng)分的相關(guān)性

表3 血清HMGB1、脂蛋白a 水平對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病的診斷價(jià)值

圖2 血清HMGB1、脂蛋白a 對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病的受試者工作特征曲線

在缺氧缺血性腦病發(fā)病過程中存在嚴(yán)重的氧化應(yīng)激反應(yīng)，而HMGB1 在氧化應(yīng)激過程中起到一定促進(jìn)作用[16]。本研究提示在缺氧缺血性腦病新生兒血清HMGB1 水平顯著高于對(duì)照組，且與其病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，顯示HMGB1 水平升高與缺氧缺血性腦病的發(fā)生及病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。Yin 等[17]的研究發(fā)現(xiàn)HMGB1 能夠促進(jìn)氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。氧化應(yīng)激產(chǎn)生的過氧化物和超氧化物等氧自由基具有較強(qiáng)的氧化性，對(duì)細(xì)胞膜上的受體蛋白造成氧化損傷，從而抑制神經(jīng)元細(xì)胞的增殖和損傷修復(fù)等過程，導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞大量死亡而引起新生兒出現(xiàn)神經(jīng)功能損傷[18]。同時(shí)，Wang 等[19]的研究顯示HMGB1 能夠激活核因子κB 炎癥信號(hào)通路并促進(jìn)巨噬細(xì)胞的趨化和變形運(yùn)動(dòng)。由于核因子κB 炎癥信號(hào)通路下游靶基因?yàn)榘捉樗睾湍[瘤生長因子等炎癥因子，因此在新生兒缺氧缺血性腦病中血清HMGB1 水平升高，活化核因子κB 炎癥信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。白介素和腫瘤生長因子等炎癥因子作用于組織細(xì)胞并引起組織細(xì)胞損傷，導(dǎo)致局部組織壞死。隨血清HMGB1 水平升高，心腦血管組織壞死程度也隨之增加，新生兒病情逐漸加劇[20-21]。

脂蛋白a 能夠抑制組織細(xì)胞代謝，在缺氧缺血性腦病發(fā)病過程中，腦組織存在嚴(yán)重的代謝紊亂[22]。本研究顯示脂蛋白a 在缺氧缺血性腦病新生兒中表達(dá)升高且與其病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。Ma 等[23]研究發(fā)現(xiàn)脂蛋白a 水平異常升高會(huì)抑制胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）信號(hào)通路的活化，由于ERK 信號(hào)通路在細(xì)胞糖代謝和增殖中起到促進(jìn)作用，因此缺氧缺血性腦病新生兒血清脂蛋白a 水平升高會(huì)抑制新生兒神經(jīng)元細(xì)胞中ERK 信號(hào)通路的活化，使其神經(jīng)元細(xì)胞糖代謝異常，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞損傷和凋亡，加劇病情[24]。同時(shí)，McCormick 等[25]研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元細(xì)胞上存在脂蛋白a 的受體，脂蛋白a 與受體結(jié)合后能夠抑制G 蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)通路的活化。由于G 蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)通路在神經(jīng)元細(xì)胞的增殖、凋亡和損傷修復(fù)等過程均起到一定調(diào)節(jié)作用。因此缺氧缺血性腦病新生兒血清脂蛋白a 水平異常升高會(huì)引起G 蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)通路異常，在抑制神經(jīng)元細(xì)胞增殖和損傷修復(fù)功能的同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致新生兒的神經(jīng)功能損傷[26-27]。

本研究結(jié)果還顯示，血清HMGB1、脂蛋白a 聯(lián)合診斷新生兒缺氧缺血性腦病的價(jià)值較高，優(yōu)于HMGB1、脂蛋白a 單獨(dú)檢測(cè)的價(jià)值，提示檢測(cè)新生兒血清HMGB1、脂蛋白a 水平可作為診斷缺氧缺血性腦病的重要生化標(biāo)志物。

綜上所述，新生兒缺氧缺血性腦病血清HMGB1、脂蛋白a 水平異常升高，且與病情嚴(yán)重程度相關(guān)，可作為診斷缺氧缺血性腦病的生化標(biāo)志物。