β-連環蛋白和CD146在胃癌組織中的表達及臨床意義△

謝軍，周磊

復旦大學附屬華山醫院靜安分院消化內科，上海 200040

胃癌起源于胃黏膜上皮，是消化道最常見的惡性腫瘤，為多種因素（如遺傳因素、飲食因素、幽門螺桿菌感染）作用于胃黏膜致使其病變并逐步演變而來，至2018年全球胃癌發病率居惡性腫瘤第5位，病死率為8.2%，僅次于肺癌、結直腸癌，國內胃癌發病率高居第2位，僅次于肺癌，好發于50歲以上人群，以男性居多[1-3]。目前許多國家已建立胃癌早期篩查、診斷和治療制度，在一定程度上顯著延長了患者的生存期，但依然無法扭轉胃癌進展的趨勢，胃癌患者常因腫瘤復發和轉移而死亡[4-5]。探尋惡性腫瘤標志物或治療靶點是目前醫學界研究的熱點，腫瘤標志物或治療靶點在早期篩查、腫瘤進展評估和治療方法中發揮了重要作用[6-7]。β-連環蛋白（β-catenin）是一種多功能蛋白，主要介導細胞間黏附和參與基因的表達，廣泛分布于內皮細胞、成骨細胞、成纖維細胞等多種類型的細胞內并參與這些細胞的增殖、分化和凋亡等過程[8]。CD146屬于免疫球蛋白超家族成員，是一種具有跨膜結構的黏附分子，可參與腫瘤細胞的黏附、轉移和新生血管的形成[9]。本研究通過觀察β-catenin、CD146在胃癌組織中的表達情況，分析其與胃癌之間的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年10月至2018年10月復旦大學附屬華山醫院靜安分院收治的胃癌患者的病歷資料。納入標準：①符合胃癌的診斷標準[10]；②術前未行放療、化療；③組織標本保存完好；④臨床資料完整。排除標準：①合并其他胃部疾病；②合并其他惡性腫瘤。根據納入、排除標準，共納入108例胃癌患者（胃癌組），男性68例，女性40例；年齡36～68歲，平均（51.97±8.86）歲；取108例胃癌組織標本。另選取40例因胃部疾病就診的非胃癌患者（對照組），男性25例，女性15例；年齡35～69歲，平均（52.31±9.36）歲；取40例胃組織標本。兩組患者年齡、性別比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫組織化學法

采用免疫組織化學法檢測胃組織中β-catenin、CD146的表達情況。將篩選入組的石蠟包埋組織標本連續4 μm切片，完成切片后經二甲苯脫蠟處理，梯度酒精水化處理，使用3%過氧化氫消除內源性過氧化酶活性，在檸檬酸鈉溶液（pH值為6.0）中進行微波抗原修復，封閉。加入兔抗人β-catenin單克隆抗體、CD146抗體，4℃過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗2～3次，加入二抗，室溫孵育，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色液顯色，蘇木素復染，脫水，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結果。按照免疫組織化學SP法試劑盒說明書由同一病理科人員嚴格進行操作。

1.3 結果判定

隨機取10個高倍視野應用半定量積分法對染色細胞進行判讀。β-catenin陽性為細胞膜、細胞質、細胞核出現棕黃色顆粒。陽性細胞比例：1分，0%＜陽性細胞比例≤10%；2分，10%＜陽性細胞比例≤50%；3分，陽性細胞比例＞50%。染色強度：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將二者得分相乘計算總積分：0～4分為陰性，＞4分為陽性[11]。CD146為細胞膜或細胞質內出現彌漫性棕黃色顆粒。陽性細胞比例：0分，陽性細胞比例＜5%；1分，5%≤陽性細胞比例＜10%；2分，10%≤陽性細胞比例＜20%；3分，20%≤陽性細胞比例＜50%；4分，陽性細胞比例≥50%。染色強度：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分。二者相乘積分≥3分為陽性[12]。

1.4 病歷資料收集

收集入組患者臨床資料，包括性別、年齡、浸潤深度、TNM分期、分化程度、淋巴結轉移等，由專人統計和錄入，并核查原始數據。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據處理，計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關分析采用Spearman相關性分析；多因素分析采用Logistic多因素回歸分析；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 β-catenin、CD146表達情況的比較

胃癌組組織中β-catenin、CD146陽性表達率均明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組組織 β-catenin、CD146表達情況的比較[n（%）]

2.2 β-catenin、CD146陽性表達與胃癌的相關性

Spearman相關性分析顯示，β-catenin、CD146陽性表達與胃癌的發生均呈正相關（r=0.568、0.587，P＜0.01）。

2.3 不同臨床特征胃癌患者的胃癌組織中β-catenin、CD146表達情況的比較

不同分化程度、TNM分期、淋巴結轉移情況胃癌患者的胃癌組織中β-catenin陽性表達率比較，差異均有統計學意義（χ2=5.334、4.426、4.964，P＜0.05）；不同TNM分期、淋巴結轉移情況胃癌患者的胃癌組織中CD146陽性表達率比較，差異均有統計學意義（χ2=5.939、5.791，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征胃癌患者的胃癌組織中 β-catenin、CD146的表達情況（n=108）

2.4 β-catenin、CD146陽性表達影響因素的Logistic多因素回歸分析

Logistic多因素回歸分析顯示，低分化，TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期，淋巴結轉移均是胃癌患者胃癌組織中β-catenin陽性表達的危險因素（P＜0.05）；TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期和淋巴結轉移均是胃癌患者胃癌組織中CD146陽性表達的危險因素（P＜0.05）。（表3、表4）

表3 β-catenin陽性表達影響因素的Logistic多因素回歸分析

表4 CD146陽性表達影響因素的Logistic多因素回歸分析

3 討論

惡性腫瘤的分子生物學和基因診斷及治療是目前研究的熱點，并已取得了較大的進展，對臨床腫瘤早期診斷、進展評估和治療意義重大。近年來與胃癌相關的分子靶向治療研究也取得不少進展，包括表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）通路、抗血管生成、細胞周期素激酶等，與傳統手術及放化療相比，分子靶向治療具有分子特異性和高選擇性，能精準殺傷腫瘤細胞，減少機體正常組織不必要的損傷[13]。在腫瘤細胞侵襲、轉移的過程中，細胞黏附分子發揮了重要作用，該類細胞分子可以使細胞間及細胞與細胞外基質發生黏附，并參與細胞識別、細胞活化、細胞增殖與分化、細胞伸展與移動、信號轉導等過程。β-catenin基因定位于3p22-3p21.3，含781個氨基酸，是WNT/β-catenin信號通路的關鍵蛋白，參與由鈣黏蛋白介導的上皮細胞黏附和信號轉導功能，在正常狀態下起著維持機體生理平衡的作用，其異常表達、基因突變、轉位與多種腫瘤的發生密切相關[14]。CD146是位于人11號染色體長臂的單拷貝基因，具有細胞骨架重組、局部粘連聚集、細胞形態維持、細胞游走和增殖調控的作用，參與腫瘤轉移和腫瘤血管的形成，是繼血管內皮生長因子之后的又一種腫瘤血管新靶標。

本文通過數據分析后發現胃癌組患者胃癌組織中β-catenin、CD146陽性表達率均明顯高于對照組，Spearman相關性分析顯示，β-catenin、CD146陽性表達與胃癌的發生均呈正相關，這表明β-catenin、CD146陽性表達與胃癌的發生密切相關。程玉等[15]研究中表明，β-catenin在正常胃組織中表達定位于細胞膜，被固定在粘合連接處，與α-catenin相互作用調節激動蛋白細胞骨架，釋放后被破壞復合體磷酸化降解，但是部分β-catenin可在抗原呈遞細胞（antigen-presenting cell，APC）的保護下蓄積，出現細胞質、細胞核或質/核異位表達，在細胞質內WNT信號能阻礙破壞復合體的激活導致β-catenin水平升高，到達細胞核后與轉錄因子T細胞因子/淋巴增強因子（T cell factor/lymphatic enhancement factor，TCF/LEF）家族結合驅動 WNT/β-catenin 信號通過靶基因轉錄，該信號通路異常可導致腫瘤的發生。CD146可同時表達于正常細胞和腫瘤細胞，在腫瘤組織中參與新生血管的形成，為腫瘤血管形成和轉移提供必要的營養，其機制可能與激活基質金屬蛋白酶2有關。胃癌患者胃癌組織中β-catenin陽性表達與胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴結轉移有關，CD146陽性表達與胃癌的TNM分期、淋巴結轉移有關。Logistic多因素回歸分析顯示，低分化，TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期，淋巴結轉移均是胃癌患者胃癌組織中β-catenin陽性表達的危險因素；TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期和淋巴結轉移均是胃癌患者胃癌組織中CD146陽性表達的危險因素。這與劉婷和齊然[16]、戚紅霞和潘曉燕[17]研究結果類似。在尹磊等[18]研究中認為，WNT/β-catenin信號通路活化可促進腫瘤細胞增殖和遷移，導致胃癌進展。CD146能促進腫瘤細胞同型黏附，使腫瘤細胞聚集成簇，利于腫瘤生長，同時還可與表達CD146的腫瘤血管內皮細胞結合，使內皮細胞活化，上調內皮細胞其他黏附分子表達，產生黏附分子介導的級聯反應，隨后腫瘤細胞通過損傷的血管外滲進而發生轉移[19]。

綜上所述，β-catenin、CD146陽性表達與胃癌的發生、發展密切相關，可作為胃癌篩查、評估胃癌進展和治療的靶點。