熒光定量聚合酶鏈式反應(FQ-PCR)法、染色涂片法檢測腦脊液(CSF)結核桿菌值對比

苑高翔

摘要：目的：對比分析熒光定量聚合酶鏈式反應（FQ-PCR）與染色涂片法檢測腦脊液（CSF）用于結核桿菌檢測中的診斷價值。方法：樣本選取80例疑似結核性腦膜炎（TBF）患者，就診時間為2019年2月～2020年2月，取CSF標本，均行FQ-PCR檢測與染色涂片法檢測。結果：FQ-PCR檢測陽性率高于染色涂片法檢測陽性率，P<0.05;FQ-PCR法靈敏度、特異度、診斷符合率均高于染色涂片法，P<0.05。結論：FQ-PCR技術檢測結核桿菌，特異性、敏感性較高，用于TBF患者診斷中具有重要價值。

關鍵詞：FQ-PCR;染色涂片法;CFS;TBF;腦脊液

Comparison of Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction （FQ-PCR） and Staining Smear in the Detection of Mycobacterium Tuberculosis in Cerebrospinal fluid （CSF）

YUAN Gao-xiang （Taiyuan Fourth People's Hospital， ShanxiTaiyuan 030053）

Abstract： Objective： To compare and analyze the diagnostic value of fluorescence quantitative polymerase chain reaction （FQ-PCR） and staining smear in the detection of cerebrospinal fluid （CSF） in the detection of Mycobacterium tuberculosis. Methods： 80 patients with suspected tuberculous meningitis （TBF） were selected from February 2019 to February 2020. CSF samples were detected by FQ-PCR and staining smear. Results： the positive rate of FQ-PCR was higher than that of staining smear， P<0.05; The sensitivity， specificity and diagnostic coincidence rate of FQ-PCR were higher than those of staining smear， P<0.05.Conclusion： FQ-PCR has high specificity and sensitivity in the detection of Mycobacterium tuberculosis. It is of great value in the diagnosis of TBF patients.

Key words： FQ-PCR; Staining smear method; CFS; TBF; cerebrospinal fluid

結核桿菌（MTB）是常見傳染性致病菌，人體感染后可能處于無癥狀潛伏感染狀態，也可能引發進行性病變。肺外結核類疾病中，TBF發病風險較高，可致患者死亡[1]。一般而言，TBF高發于感染MTB 1年內，可能與化膿性腦膜炎、病毒性腦炎、腦腫瘤等多種疾病相混淆，具有病情進展快、誤診率高、預后不良等特征，因此早期診斷極為重要。結合臨床實踐分析，檢測CSF內抗酸桿菌，可提升MTB檢出率[2]。本文以80例疑似TBF患者探究FQ-PCR與染色涂片法檢測價值。現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

樣本選取80例疑似結核性腦膜炎（TBF）患者，就診時間2019年2月～2020年2月，男43例、女37例;年齡42～74歲，平均年齡（37.91±5.14）歲。TBF診斷標準：（1）培養MTB結果呈陽性。檢出腦膜炎后，檢測CSF，檢出MTB，且腦脊液內蛋白含量提升、氯化物降低。（2）采集腦脊液標本，開展真菌、細菌檢查，同時檢測腫瘤細胞學，呈陰性。（3）經抗結核治療，均好轉。疑似TBF選入標準：（1）采集樣本腦脊液標本，主要成分為淋巴細胞。（2）樣本腦脊液比血漿葡萄糖低于0.5。（3）進行CT或MRI檢查提示異常。（4）伴其他結核類疾病。（5）患者神志改變，且病程大于5d[3]。

1.2 方法

染色涂片法檢測：采集腦脊液標本后，開展離心處理，隨后對沉渣進行涂片染色，通過鏡檢觀察抗酸桿菌。

FQ-PCR法檢測：依據試劑盒要求進行相關操作，取500μL腦脊液標本與200μL濃縮液震勻，離心力8000*g，3min后，將上清液倒出，置入無菌生理鹽水1mL，進行重懸沉淀，再次調節離心力8000×g，3min后，將上清液倒出，獲取沉渣留用[4]。隨后置入核酸釋放劑50μL，混合均勻，隨后靜置2～3min。準備PCR反應液（38μL）+內標（1μL）+酶結合物（2μL）+制備好樣本（5μL）置入PCR反應管中。調節反應條件，94℃環境下預變5min，隨后94℃ 15s，57℃ 30s，反應45個循環調至25℃延伸10s。陰性標準：樣本Ct值>39，內標呈陽性;陽性標準：樣本Ct值≤39，曲線呈S形[5]。

1.3 統計學分析

采用SPSS21.0處理本文樣本數據，%、（）記錄疑似TBF患者資料，兩組差異經χ2、t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 分析兩種方案檢測結果

染色涂片法檢測，4例檢出抗酸桿菌，陽性率5.00%;FQ-PCR法檢測，檢出陽性12例，陽性率15.00%。見表1。

2.2 分析兩種方案檢測性能

對選入80例疑似TBF樣本進行CT與MRI等影像學檢查與CSF生化檢查，同時結合臨床癥狀分析，15例確診為TBF。計算兩種檢測方案靈敏度、特異度與診斷符合率，可見FQ-PCR法均高于染色涂片法。見表2。

3討論

臨床診斷TBF患者，多結合CSF檢查、臨床癥狀及CT、MRI等影像學診斷綜合分析，檢測CSF時，涉及學科較多，包括病原學、免疫學與細胞學等，診斷難度較高[6]。由于TBF病情較重，因此發病后需盡早診斷，以改善TBF患者預后[7]。臨床診斷結核類疾病金標準為培養MTB，檢出結果準確可靠，但檢測時間過長，受檢者需4～8周方可取得檢測結果，具有較高特異性。此外，培養MTB僅活菌可被培養，限制了結核類疾病初期診斷，不利于早期治療。近年來，FQ-PCR技術快速發展，具有靈敏度、特異度高等優點，已廣泛用于病原體檢測中[8]。

結核本實驗結果分析，60例疑似TBF開展染色涂片法檢測，4例檢出抗酸桿菌，陽性率5.00%;開展FQ-PCR法檢測，12例呈陽性，陽性率15.00%。FQ-PCR法檢測陽性率高于染色涂片法，P<0.05。對選入疑似TBF樣本進行CT與MRI等影像學檢查與CSF生化檢查，同時結合臨床癥狀分析，15例確診為TBF，可計算FQ-PCR法檢測靈敏度、特異度、診斷符合率均高于染色涂片法檢測。FQ-PCR法陽性率較染色涂片法高，可能與PCR敏感性過高有關，在檢查期間受感染影響，出現假陽性，導致FQ-PCR法檢出陽性率高于染色涂片法[9]。但本文數據中，FQ-PCR法檢出陽性患者與臨床確診病例相符，可見FQ-PCR檢測具有重要價值。

綜上所述，雖FQ-PCR技術不可取代傳統方案成為檢測結核類疾病金標準，但隨著FQ-PCR技術不斷成熟，已成為診斷MTB重要方案，具有檢查周期短、靈敏度高等優點，適用于不典型病例或傳統方案無法檢出病例檢查中，具備臨床推廣價值。

參考文獻

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[8]季雪蘭.熒光定量PCR法與直接涂片抗酸染色法檢測結核桿菌結果對比[J].國際感染病學：電子版，2019，8（2）：177-178.

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