乳腺癌、胃癌HER-2免疫組織化學檢測中液態陽性對照的制作和應用

李 韜，羅依蔓，伏陽燕

四川綿陽四0四醫院病理科，四川綿陽 621000

免疫組織化學是目前病理科使用較多的鑒別診斷方法，但是在檢測時會出現假陰性、假陽性的情況。為了保證檢測結果的準確性和可靠性，質量控制必不可少。人類表皮生長因子受體2(HER-2)是乳腺癌[1-3]及胃癌[4-5]中最為重要的預后判斷因子，它是否存在陽性過表達與治療方案的制訂密切相關[6-7]，所以HER-2檢測中的陽性對照尤為重要。目前常用的陽性對照制作步驟比較煩瑣，不利于陽性對照的保存。本課題組選取了HER-2免疫組織化學染色呈強陽性的乳腺癌及胃癌組織制作液態陽性對照[8]，旨在解決上述問題。

1 材料與方法

1.1實驗材料 已知HER-2免疫組織化學染色呈強陽性的乳腺癌及胃癌組織[9]。

1.2方法

1.2.1組織前期處理 選取已知HER-2免疫組織化學染色呈強陽性的乳腺癌及胃癌組織，切片時注意避開纖維結締組織以及周圍正常組織，保留腫瘤細胞，切片厚度為4 μm。將上述切片放入50 mL離心管中，用玻璃棒將組織切片充分碾碎直到切片完全變成顆粒狀為止。向離心管中加入10 mL的脫蠟劑置于振蕩器上振蕩數秒，直至肉眼觀察石蠟完全溶解后離心，4 000 r/min離心5 min，倒掉脫蠟劑，重復該步驟兩次直到石蠟完全洗脫干凈。再向離心管中加入10 mL的無水乙醇后置于振蕩器上振蕩數秒后離心，4 000 r/min離心5 min，倒掉無水乙醇，重復該步驟兩次，以便充分洗掉脫蠟劑。

1.2.2液態對照制作 將上述沉淀轉移至新的離心管中，加入沉淀體積20倍的100%乙醇懸濁沉淀，懸濁液置于4 ℃保存待用，見圖1。

圖1 制作的液態陽性對照

1.2.3腫瘤細胞確定 將上述懸濁液吸取1～2 μL滴加載玻片上，充分烤片后進行HE染色，顯微鏡下觀察腫瘤細胞數量,以及有無重疊現象，見圖2。

圖2 液態陽性對照的HE染色

1.2.4免疫組織化學檢測 將上述懸濁液吸取1～2 μL滴加至陽離子防脫片載玻片上，干燥后于60 ℃烤箱中過夜。本科室使用丹科的PTLINK修復儀[10]及全自動免疫組織化學染色機[11]，按照設定的程序分別對液態對照的HER-2進行免疫組織化學檢測。

1.2.5重復性驗證 每隔15 d重復1.2.4步驟，3個月后對比每次染色的效果。

1.2.6實用性驗證 將上述液態陽性對照同時用于腫瘤組織HER-2檢測結果的判讀。

2 結 果

3個月共進行了6次免疫組織化學檢測，見圖3，發現液態陽性對照長時間放置對HER-2免疫組織化學檢測結果無明顯影響，染色結果能夠保持較高的一致性，均為強陽性，在染色過程中組織沒有出現掉片情況。同時，將上述液態陽性對照用于腫瘤組織HER-2染色結果的判讀，從弱陽性至強性的結果均有，與已知的判讀結果符合。

圖3 液態陽性對照3個月內不同時間的HER-2免疫組織化學染色

3 討 論

HER-2是表皮生長因子受體(HER)家族成員之一，具有重要的信號轉導作用，是重要的乳腺癌及胃癌預后判斷因子。HER-2的免疫組織化學染色結果的可靠性非常依賴于陽性對照的質量，所以要做好免疫組織化學染色的質控就是要做好陰、陽性對照。傳統的陽性對照獲取主要是依靠組織芯片法，組織芯片制作時會造成原有組織缺損的情況，多次制作時需要消耗大量的組織，對于病理科的標本保存管理不利，并且做好的組織芯片量大且不易保存。液態陽性對照選用已知陽性的組織，切片后制作成細胞懸濁液，保存在1.5 mL的離心管中，易于保存，不會因切片造成組織浪費。

液態陽性對照中的溶液為75%～100%乙醇，可根據科室實際情況選擇合適的乙醇濃度。若采用低濃度的乙醇制作液態陽性對照，其滴加于載玻片時散開非常快，如果滴加位置與實驗組織距離很接近，則非常容易引起交叉污染，且組織保存時間不長，長時間存放會導致組織蛻變而引起抗原丟失。若采用100%乙醇進行液態陽性對照的制作時，滴加時乙醇非常容易揮發，組織細胞散開不嚴重，不易造成交叉污染，保存時間較長，但是長時間浸泡于100%乙醇中的組織會變得干、脆。如果一次制作的液態陽性對照量不多時可以使用100%乙醇，這樣制作的對照片效果最好，液態陽性對照不宜長時間保存。本研究中的保存時間為3個月，對組織中的HER-2抗原沒有太大影響，但如果長時間放置會引起組織中抗原的丟失[12]。所以建議液態陽性對照制作時需要根據科室實際工作量的情況來決定液態陽性對照制作量的多少，避免長時間保存引起抗原丟失。

病理診斷中判讀乳腺癌、胃癌組織HER-2陽性染色的標準不一樣，但是乳腺癌、胃癌組織都可以用來制作液態陽性對照。除了HER-2抗體檢測以外，制作液態陽性對照的方法還能夠運用于其他抗原/抗體的檢測。

液態陽性對照的出現對于病理檢查中免疫組織化學染色的質控有很大的意義，讓陽性對照更加容易制作，方法簡單，應用于實際工作中穩定、可靠。