亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性及甲狀腺功能與妊娠期糖尿病的相關性

王玲玲，郭志國，陶曉明，孫啟玉，陳向華*

(1.承德醫學院附屬醫院 檢驗科，河北 承德067000；2.圍場滿族蒙古族自治縣婦幼保健院 普外科，河北 承德068450)

妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus，GDM)是妊娠期一種常見的內分泌疾病，據報道，在我國妊娠期糖尿病的發病率已經達到14.34%-22.73%[1]。近年來妊娠期糖尿病的發病率不斷增加，妊娠期糖尿病孕婦不僅會發生糖代謝紊亂，巨大兒、胎膜早破和宮內感染等不良妊娠結局的發生率也會升高。GDM的發病機制尚不清楚，有學者認為，可能與遺傳和內分泌紊亂等因素有關[2]。亞甲基四氫葉酸還原酶(methylene tetra hydro folate reductase，MTHFR)基因第677位點C-T的突變可以降低MTHFR活性，導致葉酸代謝過程障礙和同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平增加，從而影響機體內的糖代謝，增加發生GDM的風險[3-4]。甲狀腺激素作為機體內比較重要的內分泌激素，在維持能量代謝和胎兒生長發育等方面發揮著重要作用[5]。因此，本研究通過分析GDM患者MTHFR C677T基因多態性和甲狀腺功能，為進一步探討GDM的危險因素提供一定依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取承德醫學院附屬醫院2017年1月至2019年12月住院分娩的孕婦，51例妊娠期糖尿病患者為病例組，60例健康孕婦為對照組。兩組的基礎資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準：符合GDM診斷標準，年齡>20周歲，臨床資料完整，接受孕期常規檢查，獲得醫院倫理委員會審批。排除標準：孕前糖尿病、甲狀腺疾病等代謝性疾病，惡性腫瘤、自身免疫疾病、其他臟器疾病，不良妊娠史，孕期未按要求進行常規檢查，臨床資料不全。診斷標準：于24-28孕周進行75 g口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)，排除孕前糖尿病，滿足以下任意一項標準即可診斷為GDM。(1)空腹血糖(FPG)≥5.1 mmol/L;(2)餐后1 h血糖值≥10.0 mmol/L;(3)餐后2 h血糖值≥8.5 mmol/L。對照組樣本進行H-W檢驗，達到了遺傳平衡(χ2=4.671,P>0.05)。

1.2 檢測方法

抽取空腹肘靜脈血2 mL，EDTA抗凝；采用PCR-熒光探針法檢測MTHFR基因C677T 的多態性，檢測試劑盒由深圳奧薩醫藥有限公司提供，檢測儀器為羅氏480熒光定量PCR儀。抽取空腹肘靜脈血3 mL，肝素抗凝；采用酶循環法檢測血漿同型半胱氨酸(Hcy)水平，檢測試劑盒由天津中成佳益生物科技有限公司提供，檢測儀器為貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀。抽取空腹肘靜脈血5 mL,采用化學發光法檢測血清游離三碘甲腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)和促甲狀腺激素(TSH)水平，檢測試劑盒由貝克曼庫爾特實驗系統有限公司提供，檢測儀器為貝克曼庫爾特DXI800全自動免疫分析儀。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 兩組MTHFR C677T基因型分布和等位基因頻率比較

GDM組與對照組比較，基因型分布差異有統計學意義(χ2=19.351,P<0.01)。GDM組T等位基因頻率為61.76%，C等位基因頻率為38.24%，與對照組比較，其差異有顯著性(χ2=25.047,P<0.01)，見表1。

表1 病例組和對照組MTHFR基因型和等位基因頻率分布情況[例(%)]

2.2 GDM組與對照組甲狀腺功能指標和同型半胱氨酸水平比較

GDM組51例，對照組60例，兩組結果比較，GDM組Hcy的水平(13.21±4.69 μmol/L)高于對照組(11.29±2.85 μmol/L),差異有統計學意義(F=7.301,P<0.05);GDM組TSH的水平(3.02±1.23 mIU/L)高于對照組(1.87±0.97 mIU/L),差異有統計學意義(F=4.600,P<0.01)；GDM組與對照組FT3和FT4比較，差異無顯著性，見表2。

表2 病例組與對照組甲狀腺功能指標和同型半胱氨酸水平比較

2.3 兩組內不同基因型孕婦的甲狀腺功能指標和同型半胱氨酸水平比較

無論是病例組還是對照組內，存在MTHFR基因C677T突變者，其甲狀腺功能指標和同型半胱氨酸水平較無基因突變者有所不同；GDM組內，TT基因型孕婦Hcy(16.73±4.87 μmol/L)和TSH(3.31±1.40 mIU/L)水平較CC基因型孕婦(8.34±0.85 μmol/L、2.11±0.66 mIU/L)更高，差異有統計學意義(P<0.01);CT基因型孕婦Hcy(11.69±1.56 μmol/L)和TSH(3.16±1.06 mIU/L)水平較CC基因型孕婦更高，差異有統計學意義(P<0.01);非GDM對照組內，TT基因型孕婦Hcy(15.12±3.98 μmol/L)和TSH(2.60±0.88 mIU/L)水平較CC基因型孕婦(9.74±1.08 μmol/L、1.46±0.54 mIU/L)更高，差異有統計學意義(P<0.01);CT基因型孕婦Hcy(12.52±1.78 μmol/L)水平較CC基因型孕婦更高，差異有統計學意義(P<0.01)；CT基因型孕婦TSH(2.41±1.32 mIU/L)水平較CC基因型孕婦更高，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組中，各亞組FT3和FT4比較，差異無顯著性，見表3。

表3 疾病組與對照組中不同基因型亞組甲狀腺功能與Hcy水平比較

2.4 GDM組內甲狀腺功能與同型半胱氨酸的相關性

血清促甲狀腺激素水平與血漿同型半胱氨酸水平呈明顯正相關(P<0.01),見表4。

表4 GDM患者甲狀腺指標與同型半胱氨酸的相關性r(P)

2.5 二元Logistic回歸分析

二元Logistic回歸分析結果顯示，高水平的促甲狀腺激素和同型半胱氨酸是導致孕婦罹患妊娠期糖尿病的重要危險因素，見表5。

表5 二元Logistic回歸分析

3 討論

GDM作為妊娠期比較常見的并發癥，其胎兒死亡、畸形、早產、難產、剖宮產等發生風險明顯增高。如果能夠做到GDM的早期預測和干預，可能會降低其發病率[6]。因此，GDM的預測是未來研究的熱點和重點。有研究發現亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性和甲狀腺疾病同GDM發生有關[7-9]。MTHFR基因核苷酸677處C-T的突變，導致MTHFR的酶活性和耐熱性下降。而MTHFR是蛋氨酸和半胱氨酸代謝過程的關鍵酶之一，同型半胱氨酸(Hcy)是此代謝過程的一個重要中間產物；如果MTHFR活性下降，會導致Hcy的水平升高。本研究發現，GDM組與對照組比較，基因型分布差異有統計學意義(P<0.01)；妊娠期糖尿病組T等位基因頻率為61.76%，C等位基因頻率為38.24%，與對照組比較，其差異有顯著性(P<0.01)；GDM組與對照組比較，其Hcy水平高于對照組,差異有統計學意義(P<0.05)。這進一步證明MTHFR基因C677T多態性導致高水平的Hcy可能是GDM發生的危險因素。

在妊娠早期，胎兒所需的甲狀腺激素均來源于母體；在妊娠中晚期，胎兒甲狀腺只能分泌少量甲狀腺激素，母體還是胎兒甲狀腺激素的主要來源；因此，孕婦甲狀腺功能的異常可能會影響胎兒的生長發育[10-11]。有研究表明，妊娠期糖尿病孕婦是甲狀腺功能減退癥的高發人群，司越等[12]研究發現，140例妊娠期糖尿病孕婦中，并發甲狀腺功能減退癥的有30例，其發病率高達21.4%左右。本研究表明，GDM組與對照組甲狀腺功能比較，其促甲狀腺激素(TSH)的水平高于對照組,差異有統計學意義(P<0.05)；這提示高水平的TSH可能是GDM的危險因素。由于妊娠期孕婦體內激素水平的變化，可能會影響甲狀腺的功能。呂青青等[13]研究表明，妊娠期婦女甲狀腺功能減退的發生率大概在4%-10%，在初期處于代償狀態，僅表現為TSH的輕度升高，并沒有其他明顯癥狀。GDM和甲狀腺功能減退是妊娠期兩種常見的內分泌疾病，甲狀腺激素水平的異常變化會導致糖代謝過程紊亂，導致胰島素抵抗情況加重，使血糖控制不佳[14-15]。因此，甲狀腺功能的異常可能與GDM的發生發展有關，孕期應該檢測甲狀腺功能，預防GDM的發生。

GDM的發病機制尚不明確，可能是遺傳因素和環境因素共同作用的結果。本研究中不同基因型孕婦的甲狀腺功能和同型半胱氨酸水平比較，無論是GDM組還是對照組內，存在MTHFR基因C677T突變者，其甲狀腺功能和同型半胱氨酸水平較無基因突變者有所不同，即TT基因型孕婦和CT基因型孕婦TSH和Hcy水平較CC基因型孕婦更高，差異有統計學意義(P<0.05)；GDM組內甲狀腺功能與同型半胱氨酸的相關性分析，TSH水平與血漿Hcy水平呈明顯正相關(P<0.01)；二元Logistic回歸分析結果顯示，高水平的TSH和高水平Hcy是導致孕婦罹患妊娠期糖尿病的重要危險因素。因此，MTHFR基因C677T位點多態性、同型半胱氨酸和甲狀腺功能改變可能與妊娠期糖尿病的發生有關，T等位基因、升高的同型半胱氨酸和促甲狀腺激素可能是妊娠期糖尿病的重要危險因素。但是，本研究還存在一些不足：(1)標本量少，下一步應該進行多中心的研究；(2)本研究僅發現了GDM組的TSH和Hcy較對照組高，但是并沒有給出合適的臨界值，應該進一步確定臨界值，為GDM的預防提供一定的線索。

綜上所述，在女性備孕前可以進行MTHFR基因C677T多態性的檢測；同時，攜帶有突變基因的女性，在懷孕期間應該監測甲狀腺功能和同型半胱氨酸水平；促甲狀腺激素和同型半胱氨酸水平高的女性，可以通過營養、運動等手段提前預防GDM的發生。