早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表達及其臨床意義

操龍洋，王志榮，張俊杰，劉文芳，梅麗紅

近年來胃癌已成為發病率最高的消化道惡性腫瘤，隨著消化內鏡等檢查手段的應用，越來越多的胃癌患者能夠在早期得到確診和治療。內鏡黏膜下剝離術（ESD）是早期胃癌的標準治療方法[1]，但部分患者術后復發，影響患者預后。Y染色體性別決定區相關高速泳動族框因子9（SOX9）與胃癌轉移和浸潤密切相關[2]；尾型同源盒轉錄因子2（CDX2）對消化道上皮黏膜發育起到重要調控作用，可誘導胃黏膜腸化生導致其分化異常，最終產生癌變[3]；膜聯蛋白A2（ANXA2）在胃癌、肝癌、食管癌等多種惡性腫瘤中存在異常高表達的情況[4]。本研究旨在探究早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表達水平，并分析其與早期胃癌患者臨床病理特征及術后復發的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集杭州市臨安區第一人民醫院2015年1月至2018年12月收治的150例早期胃癌患者。納入標準：（1）符合早期胃癌的診斷標準[5]，并經臨床檢查確診；（2）行ESD，自愿參與本研究并簽署知情同意書。排除標準：（1）術前接受放化療；（2）既往存在惡性腫瘤史；（3）肝、腎、心、肺等臟器功能異常；（4）中途失訪；（5）合并影響本研究結果的其他因素。其中男82例，女68例；年齡35～75歲，平均（62.3±3.8）歲；腫瘤直徑＜1.5 cm 89例，≥1.5 cm 61例；TNM分期T1a期46例，T1b期104例；腫瘤位置：胃體57例，賁門胃底部49例，幽門部44例；分化程度：低未分化69例、中高分化81例；浸潤深度：黏膜內95例，黏膜下55例。本研究獲得本院醫學倫理委員會批準通過。

1.2 方法 術前行常規腹部超聲、內鏡超聲或CT檢查。行全身麻醉，取平臥位。明確病灶范圍后以0.4%靛胭脂染色，并對病灶邊緣0.5～1.0 cm行氬氣刀電凝標記，于病灶邊緣行靛胭脂、腎上腺素和0.9%氯化鈉注射液多點注射。Dual刀切開病灶邊緣，內鏡直視下完整剝離黏膜下層并切除，剝離過程中持續注射混合液促進病灶剝離，剝離病灶黏膜以負壓吸入內鏡前段透明膜。觀察創面是否平整，有無穿孔、出血、病灶殘留等，可對創面血管性氬離子固化、熱活檢鉗和噴灑止血藥物等凝固治療，必要時可應用止血夾夾閉血管。將取出的組織采用10%甲醛溶液固定，常規包埋、切片，行病理組織學檢查。所有患者ESD術后隨訪1～2年，形式包括胃鏡、血常規及血生化等，每3～6個月檢查1次。

1.3 觀察指標 免疫組織化學法（ABC）染色檢測胃癌組織、癌旁組織中SOX9、CDX2及ANXA2的表達水平，染色結果判定由2位病理科主治醫師進行雙盲法閱片，并采用半定量計分法進行判定。對每張切片陽性細胞數比例染色細胞百分比進行評分，顯微鏡視野內陽性細胞百分數：0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，75%為4分。染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。通過2項評分乘積進行綜合判斷：0分為陰性，1～4分為弱陽性（+），5～8分為中度陽性（2+），9～12分為強陽性（3+）。

1.4 統計方法 采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，計數資料以百分比表示，采用2檢驗；COX模型分析早期胃癌患者ESD術后復發的危險因素；受試者工作特征曲線（ROC）及曲線下面積（AUC）分析SOX9、CDX2及ANXA2對于ESD術后復發的預測價值。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表達 胃癌組織SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性率均高于癌旁組織（2≥63.949，均P＜0.05）。見表1、封三彩圖4。

表1 胃癌組織、癌旁組織SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性率分析 例（%）

圖4 胃癌組織及癌旁組織SOX9、CDX2及ANXA2表達免疫組織化學染色結果

2.2 SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性率與臨床病理特征的關系 SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性率與性別、年齡、腫瘤位置及腫瘤直徑無相關性（2≤2.912，均P＞0.05）；SOX9、CDX2表達陽性率與TNM分期相關（2=13.036、12.409，均P＜0.05），ANXA2表達陽性率與TNM分期無相關性（2=3.066，P＞0.05）；SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性率與分化程度、浸潤深度及復發情況相關（2≥3.865，均P＜0.05）。見表2。

表2 SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性率與臨床病理特征的關系 例（%）

2.3 ESD術后復發影響因素的分析至末次隨訪，150例生存率為95.3%（143/150），復發率為8.7%（13/150）。單因素COX回歸分析顯示，TNM分期、低未分化、浸潤黏膜下及SOX9、CDX2、ANXA2表達陽性與術后復發相關（均P＜0.05）。見表3。

表3 ESD術后復發影響因素分析

2.4 多因素分析 多因素COX回歸分析顯示低未分化、浸潤黏膜下及SOX9、CDX2、ANXA2表達陽性為早期胃癌患者ESD術后復發的危險因素（＜0.05）。見表4。

表4 早期胃癌患者ESD術后復發影響因素的多因素Cox回歸分析

2.5 SOX9、CDX2及ANXA2對ESD術后復發的預測價值分析 ROC曲線顯示SOX9、CDX2、ANXA2及聯合檢測對于ESD術后復發的預測的AUC分別為0.792（95%CI 0.731～0.854）、0.836（95%CI 0.772～0.899）、0.891（95%CI 0.848～0.933）、0.922（95%CI 0.889～0.954）。見封三彩圖5。

圖5 SOX9、CDX2及ANXA2對于ESD術后復發預測價值的ROC曲線

3 討論

近年來，對于胃癌發病機制的研究越來越多，多種基因、蛋白等分子標志物在早期胃癌的發生中存在重要作用。本研究探討SOX9、CDX2及ANXA2在胃癌患者中的表達水平，結果顯示上述指標均在胃癌組織中呈高表達，其陽性率明顯高于癌旁正常組織。

胃癌等惡性腫瘤的病理特征惡化與腫瘤復發、疾病預后及總生存期有關[6-7]。本研究結果顯示，SOX9、CDX2表達陽性率與早期胃癌患者TNM分期、分化程度、浸潤深度及復發情況相關；ANXA2表達陽性率與早期胃癌患者分化程度、浸潤深度及復發情況相關。COX回歸模型顯示，SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性為早期胃癌患者ESD術后復發的危險因素；ROC曲線結果顯示，SOX9、CDX2、ANX A2及聯合檢測對于ESD術后復發的預測的AUC分別為0.792（95%CI 0.731～0.854）、0.836（95%CI 0.772～0.899）、0.891（95%CI 0.848～0.933）、0.922（95%CI 0.889～0.954）。COX回歸分析及ROC曲線結果均提示，SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性對于早期胃癌患者ESD術后預后復發具有預測價值。

綜上所述，早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2表達陽性率明顯增加，并對患者ESD術后復發具有預測價值。