新型冠狀病毒IgM/IgG膠體金試劑應(yīng)用情況分析

王曼, 吳衍恒, 羅樂(lè), 李雷, 劉新霞

中山市疾病預(yù)防控制中心 1防疫科, 2檢驗(yàn)科, 3 辦公室 (廣東中山 528403)

《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第八版)》[1-2]，與前期版本相比，在核酸檢測(cè)的基礎(chǔ)上，增加了血清學(xué)IgM和IgG作為診斷依據(jù)。目前，國(guó)家藥監(jiān)局批準(zhǔn)了多家公司生產(chǎn)的新型冠狀病毒抗體檢測(cè)試劑，包括膠體金法、化學(xué)發(fā)光法、熒光免疫層析法等，其中膠體金技術(shù)具有方便快捷、不需要特殊設(shè)備和試劑、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)，特別適合于廣大基層檢驗(yàn)人員以及大批量檢測(cè)和大面積普查。中山市位于珠江三角洲地區(qū)，2020年1月22日?qǐng)?bào)告首例新型冠狀病毒肺炎確診病例[3]。2020年3月3日開(kāi)始，在出院病例健康隨訪和密切接觸者中開(kāi)始應(yīng)用血清學(xué)IgM/IgG膠體金試劑?，F(xiàn)針對(duì)其應(yīng)用情況進(jìn)行分析，為下一步血清學(xué)膠體金試劑應(yīng)用提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 數(shù)據(jù)收集與分析 采用Excel 2010 收集整理2020年3月3日至5月26日，中山市血清學(xué)檢測(cè)對(duì)象的血清學(xué)和核酸檢測(cè)結(jié)果，針對(duì)血清學(xué)和核酸檢測(cè)結(jié)果不一致對(duì)象，收集整理相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查資料。

1.2 血清學(xué)檢測(cè)對(duì)象 出院病例：采用RT-PCR方法核酸檢測(cè)呼吸道標(biāo)本結(jié)果為陽(yáng)性，結(jié)合臨床癥狀進(jìn)行診斷。確診病例和無(wú)癥狀感染者達(dá)到出院標(biāo)準(zhǔn)(連續(xù)2次核酸檢測(cè)陰性)后，第7、14天和第3個(gè)月進(jìn)行隨診，采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)。密切接觸者：在納入觀察第1、4、7天和解除隔離前采集咽拭子進(jìn)行核酸檢測(cè)，同時(shí)在納入觀察期第7天和第14天采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法 血清學(xué)檢測(cè)：采用英諾特(唐山)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的新型冠狀病毒IgM/IgG膠體金試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行結(jié)果判斷。核酸檢測(cè):采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司和上海伯杰醫(yī)療科技有限公司的新型冠狀病毒(2019-nCoV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)進(jìn)行檢測(cè)，按照國(guó)家防控方案進(jìn)行結(jié)果判定[1-2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行Kappa一致性分析和2檢驗(yàn)(Fisher確切概率法)。

2 結(jié)果

2.1 基本情況 2020年3月3日至5月26日，累計(jì)開(kāi)展血清學(xué)檢測(cè)242人385人次。其中確診病例和無(wú)癥狀感染者64人96人次，其核酸檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性；密切接觸者178人289人次，其核酸檢測(cè)結(jié)果均為陰性。開(kāi)展重復(fù)血清學(xué)檢測(cè)的人群中，僅1例確診病例發(fā)生IgG從陽(yáng)性到陰性轉(zhuǎn)化。血清學(xué)IgG無(wú)發(fā)生轉(zhuǎn)化的241人中，IgG和核酸檢測(cè)符合率為95.9%(231/241)(Kappa=0.889，P=0.334)。

2.2 確診病例血清學(xué)檢測(cè)情況 54例核酸檢測(cè)陽(yáng)性的確診病例，累計(jì)完成77次血清學(xué)檢測(cè)。出院后不同時(shí)間檢測(cè)結(jié)果詳見(jiàn)表1。

23例完成2次檢測(cè)。12例同時(shí)完成出院后7 d和14 d血清學(xué)檢測(cè)，其兩次結(jié)果完全一致，8例IgM陽(yáng)性IgG陽(yáng)性，4例IgM陰性IgG陽(yáng)性；11例同時(shí)完成出院后第14天和第90天血清學(xué)檢測(cè)，其中6例從第14天的IgM陽(yáng)性IgG陽(yáng)性轉(zhuǎn)變?yōu)榈?0天的IgM陰性IgG陽(yáng)性，1例從第14天的IgM陽(yáng)性IgG陽(yáng)性轉(zhuǎn)變?yōu)榈?0天的IgM陰性IgG陰性，2例第14天和第90天均為 IgM陰性IgG陽(yáng)性，1例第14天和第90天均為IgM陰性IgG陰性。

31例僅完成1次檢測(cè)。15例出院后14 d進(jìn)行了檢測(cè)，其中10例IgM陽(yáng)性IgG陽(yáng)性，4例IgM陰性IgG陽(yáng)性，1例IgM陰性IgG陰性；16例出院后90 d進(jìn)行了檢測(cè)，12例IgM陰性IgG陽(yáng)性，4例IgM陰性IgG陰性。

表1 中山市新型冠狀病毒確診病例、無(wú)癥狀感染者和密切接觸者不同時(shí)間血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果 例(%)

2.3 無(wú)癥狀感染者血清學(xué)檢測(cè)情況 10例核酸檢測(cè)陽(yáng)性的無(wú)癥狀感染者，累計(jì)完成19次血清學(xué)檢測(cè)。出院后不同檢測(cè)結(jié)果詳見(jiàn)表1。9例同時(shí)完成出院后第7天和14天血清學(xué)檢測(cè)，其兩次結(jié)果完全一致，2例IgM陰性IgG陰性，7例IgM陰性IgG陽(yáng)性。1例完成出院后14 d血清學(xué)檢測(cè)，結(jié)果為IgM陽(yáng)性IgG陽(yáng)性。出院14 d，無(wú)癥狀感染者IgG陰轉(zhuǎn)率(20.0%)大于確診病例(5.3%)，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fisher 確切概率P=0.187)。

2.4 密切接觸者血清學(xué)檢測(cè)情況 178例核酸檢測(cè)陰性的密切接觸者，累計(jì)完成289次血清學(xué)檢測(cè)。其中111例在隔離第7天和隔離14天完成2次檢測(cè)，110例2次檢測(cè)結(jié)果均為IgM陰性IgG陰性，1例2次結(jié)果均為IgM陽(yáng)性IgG陽(yáng)性。67例僅完成隔離第14天血清學(xué)檢測(cè)，其中66例結(jié)果為IgM陰性IgG陰性，1例為IgM陽(yáng)性IgG陽(yáng)性。

2.5 核酸和血清學(xué)不一致個(gè)案信息 11例新型冠狀病毒核酸與血清學(xué)存在結(jié)果不一致的個(gè)案信息詳見(jiàn)表2。包括7例確診病例，2例無(wú)癥狀感染者和2例密切接觸者，其中僅1例確診病例發(fā)生了IgG陽(yáng)性到陰性的轉(zhuǎn)化。

表2 中山市新型冠狀病毒IgG血清學(xué)和核酸檢測(cè)結(jié)果不一致個(gè)案信息

3 討論

本文針對(duì)英諾特(唐山)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的新型冠狀病毒IgM/IgG膠體金試劑盒在新型冠狀病毒肺炎病例出院健康隨診和密切接觸者觀察期間的應(yīng)用進(jìn)行了系統(tǒng)分析，結(jié)果表明IgG和核酸檢測(cè)結(jié)果的一致性較好，符合率達(dá)到95.9%。提示在傳染源不明進(jìn)行傳染鏈追蹤時(shí)，可以考慮結(jié)合核酸檢測(cè)，輔助使用血清學(xué)膠體金檢測(cè)。

本次分析發(fā)現(xiàn)，對(duì)于確診病例，在出院后的隨訪檢測(cè)中，IgG陽(yáng)轉(zhuǎn)率呈下降趨勢(shì)，從第7天的100.0%，下降到第14天的94.7%，第3個(gè)月的22.2%，且其中1例確診病例14 d IgG檢測(cè)陽(yáng)性，3個(gè)月隨訪IgG轉(zhuǎn)為陰性。另外在出院14 d的隨訪中，無(wú)癥狀感染者IgG陰轉(zhuǎn)率(20.0%)大于確診病例(5.3%)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測(cè)主要是樣本量較小導(dǎo)致。本結(jié)果與重慶醫(yī)科大學(xué)黃愛(ài)龍教授等6月18日在《Nature Medicine》雜志上發(fā)表的研究結(jié)果具有一致性[4]。有研究[4]對(duì)37例有癥狀病例和37例無(wú)癥狀感染者在出院后進(jìn)行了2個(gè)月隨訪觀察，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是有癥狀病例還是無(wú)癥狀感染者，其IgG和中和抗體的水平均處于下降趨勢(shì)；無(wú)癥狀者對(duì)新型冠狀病毒感染的免疫反應(yīng)較弱，出院8周后，即恢復(fù)期早期，無(wú)癥狀組中81.1%顯示中和抗體水平下降，抗體陰轉(zhuǎn)率為40%，而有癥狀組抗體水平下降的比例為62.2%，IgG陰轉(zhuǎn)的比例為12.9%。

既往關(guān)于新型冠狀病毒IgM/IgG抗體血清學(xué)應(yīng)用的報(bào)道[5-10]，主要集中于病例發(fā)病的早期和中期階段，采用的方法既包括化學(xué)發(fā)光法，也包括膠體金法，不同研究結(jié)果存在一定的差異，但結(jié)論都支持將抗體檢測(cè)試劑作為核酸檢測(cè)試劑的輔助診斷手段。本研究中血清學(xué)抗體針對(duì)確診病例和無(wú)癥狀感染者，用于出院后隨訪，屬于中后期的應(yīng)用。在感染個(gè)體中，血清學(xué)抗體檢測(cè)結(jié)果隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)，呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化。姜中毅等[11]評(píng)價(jià)了3種試劑盒檢測(cè)病毒特異性抗體的情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)病4～7 d時(shí),陽(yáng)性率在36.4%～45.5%之間;發(fā)病8～14 d時(shí),陽(yáng)性率在55.6%～77.8%之間;而發(fā)病15 d以上時(shí),陽(yáng)性率達(dá)到100%。在本次應(yīng)用中，沒(méi)有得到IgM單陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果，在病例的健康隨訪過(guò)程中，出院后14 d IgM和IgG雙陽(yáng)性者接近70%，出院后3個(gè)月，無(wú)IgM陽(yáng)性個(gè)體。結(jié)合全部病例的中位數(shù)住院時(shí)間為17 d，推測(cè)大多數(shù)感染個(gè)體，IgM在發(fā)病后1～3個(gè)月之間逐漸消失。

核酸檢測(cè)是目前病例確診最廣泛使用的檢測(cè)方法。既往研究發(fā)現(xiàn)[12-15]，由于采樣、運(yùn)輸及內(nèi)部質(zhì)控等因素，核酸檢測(cè)可能存在漏檢的情況。本次應(yīng)用中，發(fā)現(xiàn)2例多次核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性，但是血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者，其家庭成員中均有多名病例，推測(cè)其可能為無(wú)癥狀感染者。2例病毒感染劑量低，上呼吸道排毒量微小，達(dá)不到核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

本次應(yīng)用分析存在以下局限，首先本次針對(duì)新型冠狀病毒肺炎感染者，血清學(xué)檢測(cè)均是在其出院后健康隨訪期進(jìn)行，缺乏病例發(fā)病早期血清學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)，其次血清學(xué)檢測(cè)中確診病例和無(wú)癥狀感染者的數(shù)據(jù)樣本量較小，其血清學(xué)變化規(guī)律需要積累更多的數(shù)據(jù)。