miRNA-1290在胃癌患者血清中的相對表達水平及臨床意義

劉 倩，段 莎

陜西省人民醫院消化二科，陜西西安 710068

近年來隨著人們生活方式的改變，胃癌發病率呈逐年上升趨勢[1]。早期胃癌無明顯癥狀，約80%的胃癌患者在確診時就已經處于晚期，其治療手段以手術切除為主，但預后較差，5年生存率不足10%[2]，因此，提高患者早期診斷率對患者預后具有重要意義。微小RNA(miRNA)是新發現的一類小分子非編碼RNA，在腫瘤細胞的分化、增殖、凋亡、周期調控等過程中發揮重要作用。有研究表明，miRNA-1290與腫瘤的發生、發展過程聯系密切[3]，但關于其在胃癌中相對表達水平情況的研究較少。本文旨在探究miRNA-1290在胃癌患者體內的表達情況，為臨床胃癌早期診斷尋找新的標志物，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年3月至2020年9月本院消化內科收治的64例胃癌患者作為胃癌組，其中男41例，女23例；年齡42～78歲，平均(58.79±7.35)歲；腫瘤分期(TNM)：Ⅰ期15例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期12例；腫瘤直徑<5 cm 30例，腫瘤直徑≥5 cm 34例；分化程度：低分化21例，中分化24例，高分化19例。另選取同時間段在本院進行體檢的64例健康者作為對照組，男40例，女24例，年齡40～78歲，平均(57.84±7.42)歲。納入標準：(1)符合胃癌臨床診斷標準[4]；(2)經胃鏡檢查和病理活檢確診；(3)納入研究前未接受化療、放療和免疫治療等抗腫瘤治療；(4)簽署該項研究的知情同意書。排除標準：(1)合并其他部位腫瘤者；(2)出現其他臟器轉移者；(3)患有血液病、免疫系統疾病或結締組織疾病者；(4)心、肝、腎等臟器功能嚴重損傷者；(5)急慢性感染者；(6)臨床資料缺失者。本研究獲得本院倫理委員會批準。

1.2研究方法

1.2.1標本采集 健康體檢者于體檢時進行血液標本采集。所有胃癌患者采集血液標本，取清晨空腹靜脈血3 mL，放入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中備用，常溫環境下使用離心機離心10 min(轉速3 000 r/min，離心半徑13.5 cm)，將上清液取出，放入無RNA酶的管中，4 ℃環境下再次離心10 min(轉速12 000 r/min)，用新的離心管保存上清液，于-80 ℃環境下保存。

1.2.2儀器與試劑 反轉錄試劑盒(購自美國Thermo公司)，Trizol試劑(購自美國Thermo公司)，實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)儀(購自美國PE公司)，qRT-PCR試劑盒(購自美國Invitrogen公司)。

1.2.3血清miRNA-1290相對表達水平計算 取血清標本，加入1 mL TRIzol提取劑，提取總RNA，并進行測定。采用qRT-PCR反轉錄試劑盒對提取的總RNA進行反轉錄反應，先加水將RNA稀釋至2 ng/μL，再加入反轉錄溶液，16 ℃環境下反轉錄60 min、42 ℃環境下反轉錄30 min、85 ℃環境下反轉錄10 min，對反轉錄得到的cDNA進行冷卻處理及常規稀釋，將cDNA于-20 ℃保存。取2 μL cDNA標本作為PCR定量檢測模板，在qRT-PCR反應儀上進行PCR反應，PCR擴增條件：95 ℃預變性3 min，95 ℃變性5 s，61 ℃延伸30 s，35個循環。采用2-△△Ct法計算血清中miRNA-1290相對表達水平。

1.3觀察指標 (1)比較胃癌組及對照組血清miRNA-1290相對表達水平；(2)分析miRNA-1290相對表達水平與患者臨床特征的關系；(3)分析胃癌組血清miRNA-1290相對表達水平對胃癌的診斷價值。

2 結 果

2.1胃癌組及對照組血清miRNA-1290相對表達水平比較 qRT-PCR檢測結果顯示，胃癌組血清miRNA-1290相對表達水平為4.58±0.54，明顯高于對照組的(1.17±0.35)，差異有統計學意義(t=42.393，P<0.001)。

2.2胃癌患者miRNA-1290相對表達水平與臨床特征的關系 不同TNM分期、淋巴結轉移情況、分化程度、腫瘤直徑胃癌患者血清miRNA-1290表達水平差異有統計學意義(P<0.05)；不同性別、年齡、病理類型胃癌患者血清miRNA-1290相對表達水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 胃癌患者miRNA-1290相對表達水平與臨床特征的關系

續表1 胃癌患者miRNA-1290相對表達水平與臨床特征的關系

2.3胃癌患者血清miRNA-1290相對表達水平對胃癌的診斷價值 ROC曲線顯示，miRNA-1290診斷胃癌的靈敏度為91.4%，特異度為87.3%，AUC為0.816(95%CI=0.691～0.942，P<0.05)，最佳截斷值為4.92。見圖1。

圖1 血清miRNA-1290對胃癌診斷價值的ROC曲線

3 討 論

胃癌指源于胃黏膜上皮細胞的惡性腫瘤，主要為胃腺癌，發病率較高，具有早期診斷率低、復發率高的特點，尋找有效地早期診斷方法對改善患者預后具有重要意義[5-7]。miRNA是一類內源性非編碼RNA，一般由18～25個核苷酸組成，在生命過程中主要通過與靶基因核糖體RNA(mRNA)3′端非編碼區互補配對，抑制翻譯過程發揮作用[8]。許麗芳等[9]研究中指出，miRNA參與個體發育，在細胞分化、增殖、侵襲、吸附、凋亡等方面具有重要的調控作用，miRNA異常調控常伴隨基因突變、缺失、DNA甲基化水平異常等表觀遺傳學的改變，這些基因表觀遺傳學的改變與腫瘤的發生及發展存在密切聯系[10-11]。

miRNA包括抑癌和促癌兩大類，抑癌miRNA一般在腫瘤細胞中表達較低，主要作用是促進細胞凋亡，抑制腫瘤細胞的增殖、侵襲后轉移；促癌miRNA一般在腫瘤細胞中高表達，作用是抑制細胞凋亡，促進腫瘤細胞的增殖、侵襲后轉移[11-12]。miRNA-1290是miRNA中的一個重要組成分子，有研究發現，miRNA-1290在肝癌、肺癌、宮頸癌、胃癌患者中的相對表達水平異常升高，可能成為腫瘤早期診斷及預測預后的一項重要標志分子[13]。本研究發現，胃癌患者血清miRNA-1290相對表達水平明顯高于健康人，提示miRNA-1290在胃癌的發生、發展過程中發揮了重要作用[14-15]。通過觀察胃癌患者miRNA-1290相對表達水平與不同臨床特征的關系發現，不同TNM分期、淋巴結轉移情況、分化程度、腫瘤直徑胃癌患者血清miRNA-1290相對表達水平差異有統計學意義(P<0.05)；不同性別、年齡、病理類型胃癌患者血清miRNA-1290相對表達水平差異無統計學意義(P>0.05)。提示miRNA-1290的相對表達水平與胃癌的進展程度有關[16-17]。ROC曲線顯示，AUC為0.816，miRNA-1290診斷胃癌具有較高的靈敏度和特異度，可作為臨床胃癌早期診斷及判斷患者預后的靶基因。miRNA-1290能夠抑制細胞凋亡，促進胃癌細胞的增殖、分化及轉移，可能與調控某種基因有關，具體作用機制有待進一步研究[18]。

綜上所述，miRNA-1290在胃癌患者血清中相對表達水平升高，對胃癌具有一定的診斷價值，可作為胃癌早期診斷的一項重要分子標志。