異常糖鏈糖蛋白不同截斷值排查消化道腫瘤的效能

鄭加蓮 黃麗芳 蔣燕飛 邢麗娟 沈霞 許慧青 朱勇

消化道腫瘤（gastrointestinal tumors,GITs）包括結腸癌、直腸癌、胃癌等，近年來發病率逐漸遞增，極大危害患者的健康和生命，早發現、早治療是改善患者預后的關鍵所在[1-2]。異常糖鏈糖蛋白（tumor abnormal protein,TAP）是腫瘤細胞在新陳代謝過程中釋放的糖蛋白和鈣-組蛋白復合物的總稱，在甲狀腺、肺部、乳腺癌等多種腫瘤中呈高表達，逐漸呈現出其在鑒別惡性腫瘤中的作用，但以往的報道常受限于樣本量不足，可能造成數據的偏倚，且關于不同截斷值排查消化道腫瘤效能的報道較少[3-5]。鑒于此，本研究探討TAP不同截斷值排查GITs的效能，并初步形成GITs的排查流程，報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2018年1月至2019年12月嘉興市第一醫院健康管理中心的1 192例體檢者，男617例，女 575 例，年齡 39～82（51.33±6.10）歲；其中惡性 GITs患者263例，良性消化道疾病患者355例，健康人群574例。納入標準：（1）以往無惡性腫瘤病史者；（2）入組前無放化療等相關治療史者；（3）惡性GITs患者均經病理學檢查明確診斷；（4）無嚴重凝血功能障礙；（5）臨床資料完整。排除標準：（1）有嚴重的心、肝、腎功能不全者；（2）精神疾病患者；（3）骨折未愈合患者；（4）妊娠期患者；（5）合并自身免疫性疾病患者；（6）腫瘤復發患者。本研究經本院醫學倫理委員會批準，所有患者及家屬均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器 TAP凝集法檢測試劑盒購自浙江瑞生醫療科技有限公司；TAP檢測用圖像分析儀購自浙江省慈溪市瑞生醫療儀器廠。

1.2.2 TAP表達水平檢測 （1）樣本采集：采指端末梢血（第1、2滴），分別滴到兩張載玻片上，推制厚薄均勻、占玻片長度2/3以上的血片2張，置水平臺上，自然干燥。將已干燥血片移至恒溫恒濕（溫度18～25℃、相對濕度45%～60%）工作環境，約10 min，使血片的溫度和濕度達到工作條件。將試劑充分搖勻，吸取上層液垂直滴加到血片上，每張間隔均勻滴加3滴（每滴約50 μl），液滴斑點直徑 10～12 mm。放置 1.5～2 h，待血片上試劑自然干燥后（TAP與檢測試劑充分反應），在滴過試劑的地方形成圓形的“斑點”，即標本制作完成。（2）檢測：將標本置于集成閱片儀之顯微鏡下，采用4×平場消色差物鏡在顯示屏上依次掃描觀察血片標本的3個斑點，尋找特異形態的凝聚物，遇可疑圖像轉用高倍鏡分辨。（3）質控：在同樣實驗環境和條件下檢測陽性和陰性質控品，確保實驗環境、實驗條件、儀器和人員處于正常工作狀態。（4）結果判定標準：在6個色斑中，以40×物鏡放大下，使用TAP檢測圖文系統拍攝采集顆粒圖片，并使用軟件面積測量功能測量顆粒大小，并記錄到《凝聚物面積計算表》上。

1.3 觀察指標 （1）將凝聚物面積＜121 μm2定義為TAP-，將凝聚物面積≥121 μm2定義為TAP+[6]，統計TAP 檢出惡性 GITs情況。（2）分析截斷值為 121 μm2時，TAP診斷惡性GITs的靈敏度、特異度和準確率。（3）比較不同類型惡性GITs患者TAP表達水平。（4）分析TAP鑒別不同類型GITs的截斷值、靈敏度、特異度。（5）比較不同TAP截斷值范圍各類型惡性GITs發生率。（6）比較不同分期惡性GITs患者TAP表達水平。

2 結果

2.1 TAP檢出GITs情況 臨床病理診斷惡性GITs共263例（食管癌82例、胃癌85例、結直腸癌96例），非惡性GITs共929例（包括良性病變355例與健康人群574例）。當截斷值為121 μm2時，TAP檢出惡性GITs 371例，非惡性GITs 821例，見表1。

表1 TAP檢出GITs情況

2.2 TAP診斷惡性GITs的效能 當截斷值為121 μm2時，TAP診斷惡性GITs的靈敏度為89.35%，特異度為85.36%，準確率為 86.24%（1028/1192），見圖 1。

圖1 異常糖鏈糖蛋白（TAP）診斷惡性消化道腫瘤（GITs）的ROC曲線

2.3 不同類型惡性GITs患者及健康人群TAP表達水平比較 食管癌、胃癌、結直腸癌患者及健康人群性別、年齡、腫瘤T分期、分化程度比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）；食管癌、胃癌、結直腸癌患者及健康人群TAP表達水平比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同惡性GITs類型患者及健康人群TAP表達水平比較

2.4 TAP鑒別不同類型惡性GITs的效能分析 TAP鑒別食管癌的AUC為0.825，最佳截斷值為＞281.79 μm2（P＜0.05）；TAP鑒別胃癌的AUC為0.816，截斷值為＞240.06 μm2（P＜0.05）；TAP鑒別結直腸癌的AUC為0.797，最佳截斷值為＞221.88 μm2（P＜0.05）。見圖2、表3。

圖2 異常糖鏈糖蛋白（TAP）鑒別不同類型惡性消化道腫瘤（GITs）的ROC曲線

表3 ROC分析結果

2.5 不同TAP截斷值范圍各類型惡性GITs發生率比較 以ROC分析得到的3個截斷值為分界，劃分入組 者 為 221.88 ～＜240.06 μm2、240.06 ～281.79 μm2、＞281.79 μm2。結直腸癌患者占比在TAP截斷值介于221.88～＜240.06 μm2時最高，食管癌患者占比在TAP截斷值＞281.79 μm2時最高，胃癌患者占比在TAP截斷值介于 240.06～281.79 μm2時最高（P＜0.05），見表4。不同TAP截斷值排查GITs的流程見圖3。

圖3 不同異常糖鏈糖蛋白（TAP）截斷值排查消化道腫瘤（GITs）的流程

表4 不同TAP截斷值范圍各類型惡性GITs發生率比較[例（%）]

2.6 不同分期惡性GITs患者TAP表達水平比較 不同分期惡性GITs患者TAP表達水平比較差異有統計學意義（P＜0.05）；隨著腫瘤T分期的遞增，TAP表達水平逐漸升高（P＜0.05）。見表5。

表5 不同分期惡性GITs患者TAP表達水平比較（μm2）

3 討論

目前我國惡性GITs的診斷金標準為病理學檢查，但其具有有創性，適用對象為高風險對象，不適用于大樣本人群排查；內窺鏡、影像學具有直觀、無創等優點，但消化道腫瘤種類較多，需進行多項檢查，流程繁瑣，成本較高；腫瘤標志物是近年來篩查癌癥的一種重要手段，其價值已被大量臨床實踐證實，如癌胚抗原、糖類抗原199、糖類抗原724等，但不同腫瘤類型可能腫瘤標志物不同，臨床應用受限，因此研究其他有效腫瘤標志物意義重大[7-8]。

細胞惡變過程中，修飾蛋白質的糖鏈結構發生異常改變，即異常糖基化，主要表現為異位合成、糖鏈合成不全、隱蔽糖鏈的暴露等，從而產生TAP，當惡變細胞接近108個時，產生的TAP可釋放入血即被檢測到，因此能在早期發現惡性腫瘤[9-12]。祁潔等[13]研究結果顯示，TAP在乳腺癌患者中陽性率為83.02%，明顯高于健康人群的0%，提示TAP可能有助于惡性腫瘤的診斷。但關于TAP不同截斷值排查GITs效能的報道鮮見，本研究首次對此進行探討顯示，當截斷值為121 μm2時，TAP診斷惡性GITs的靈敏度為89.35%，特異度為85.36%，準確率為86.24%，可為臨床診斷惡性GITs提供量化參考。Sun等[14]報道指出，TAP以121 μm2為分界劃分陽性與陰性的標準，在結腸炎、結腸息肉與結腸腺癌中，TAP的陽性表達分別為6.76%和92%，可用于篩查消化道癌前病變，從側面佐證了本研究的觀點。糖基化修飾的改變在糖基酶催化下進行，產生不同的聚糖并分布于細胞外基質與細胞表面是細胞相互接觸的第一環節，故癌癥狀態下糖鏈的改變較蛋白質更為顯著，高表達的TAP與惡性GITs息息相關，呈現出較高的排查效能[15-18]。且隨著腫瘤T分期的遞增，TAP表達水平逐漸升高，提示TAP與惡性GITs分期有關，TAP表達水平越高，腫瘤T分期越晚。

食管癌、胃癌、結直腸癌是惡性GITs的常見類型，現階段關于TAP排查不同類型GITs截斷值與效能的價值尚不明確。本研究結果顯示，TAP鑒別食管癌的AUC＞胃癌＞結直腸癌，截斷值分別為＞281.79、240.06、221.88 μm2，可為臨床區分不同類型惡性GITs提供循證支持與客觀參考。為驗證以上結果的可靠性，本研究進一步分析發現，結直腸癌患者占比在TAP介于221.88～＜240.06 μm2時最高，食管癌患者占比在TAP＞281.79 μm2時最高，胃癌患者占比在TAP介于240.06～281.79 μm2時最高，佐證了ROC分析獲得的截斷值具有可信度與臨床實際參考價值，但受限于本研究觀點的新穎性，仍需后續深入研究的進一步證實。此外本研究不足之處在于為回顧性研究，納入的惡性GITs包括常見且整體預后較差的食管癌、胃癌、結直腸癌，雖然初步形成了不同TAP截斷值排查GITs的效能及流程，可為臨床提供重要的參考價值，但未納入胰腺癌等消化系統腫瘤，排查胰腺癌等腫瘤的截斷值與效能仍有待后續的研究；且關于TAP表達水平與癌胚抗原、糖類抗原125等常規血清腫瘤標志物等表達水平的關系尚不明確，亦有待后續的進一步探討。

綜上所述，本研究結果提示，當截斷值為121 μm2時，TAP排查惡性GITs的效能較高，且TAP＞281.79、240.06、221.88 μm2時，可為臨床鑒別不同類型惡性GITs提供量化參考。