γ-干擾素釋放試驗QFT-GIT檢測可疑結核感染患者不確定結果的影響因素分析

王玉 陳曉俊 陳偉 何平 浮苗

我國是肺結核的高發國，是全球十大肺結核高發國之一[1]，如何快速準確對可疑結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染患者進行診斷是亟待解決的問題。QuantiFERON-TB Gold In-Tube（QFT-GIT）是一種診斷MTB感染的γ-干擾素釋放試驗，不僅可以診斷活動期MTB感染，同樣可以診斷非活動期MTB感染且不受卡介苗的影響[2]。QFT-GIT檢測結果包括陰性、陽性、不確定。不確定結果（Indeterminate test results,ITRs）的出現影響了潛伏性結核感染的診斷[3]。本研究探討可疑MTB感染患者QFT-GIT檢測ITRs的影響因素，以期為提高QFT-GIT檢測診斷MTB感染的準確性提供客觀依據。

1 對象和方法

1.1 對象 回顧2019年2月至2020年2月浙江大學醫學院附屬金華醫院進行QFT-GIT檢測的2 473例疑似MTB感染患者的檢測結果，排除有心臟病、高血壓等基礎疾病患者，其中男1 460例，女1013例，年齡1～98（50±22）歲。本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 分組 根據QFT-GIT檢測結果，分為ITRs組190例和確定結果組（陰性或者陽性）2 283例。根據陳孝嫚等[4]研究分為7個年齡組：0～5歲組104例，6～15歲組 87例，16～30歲組304例，31～45歲組435例，46～60歲組665例，61～75歲組662例，≥76歲組216例。按性別分為女性組1 013例和男性組1 460例。

1.2.2 方法 （1）標本采集與處理：采集患者外周靜脈全血4～6 ml置肝素鋰抗凝管，16 h內送至實驗室進行檢測。顛倒混勻10次后取標本分別置于絲裂原陽性對照（Mitogen）管、結核抗原（TBAg）管和空白對照（Nil）管，每管0.8～1.2 ml，立即上下顛倒振搖10次，確保整個試管內層都被血液覆蓋，以溶解管壁上的抗原，直立置于37℃孵育16～24 h，3 000 r/min離心 15 min。（2）結果計算與判定：采用德國QIAGEN凱杰公司生產的QuantiFERON-TB Gold In-Tube試劑盒，實驗過程嚴格按照說明書操作，酶標儀檢出數值采用德國QIAGEN公司提供的QFT分析軟件（DS2QFT 4pt v6.25版本）進行計算，結果判讀標準見表1。（3）記錄所有患者入院時WBC、淋巴細胞數（L）、血清總蛋白（TP）、血清白蛋白（Alb）、ALT、AST等指標；血常規檢測儀為日本希森美康 Xn2000[WBC 參考范圍：（3.5～9.5）×109/L（16歲以上），（5～12）×109/L（16 歲以下），（L 參考范圍：（1.2～3.2）×109/L）]，生化檢測儀為美國貝克曼，TP檢測采用雙縮脲法（參考范圍：65～85 g/L），Alb檢測采用溴甲酚綠法（參考范圍：40～55 g/L），ALT和AST檢測采用酶法（ALT參考范圍：7～40 U/L，AST 參考范圍：13～55 U/L）。

表1 QFT-GIT檢測結果判讀

2 結果

2.1 不同性別組QFT-GIT檢測ITRs發生率的比較QFT-GIT檢測不同性別組可疑結核感染患者的ITRs發生率差異無統計學意義（χ2=3.35，P＞0.05），見表2。

表2 不同性別組QFT-GIT檢測ITRs發生率的比較

2.2 不同年齡組QFT-GIT檢測ITRs發生率的比較2 473例可疑結核感染患者的QFT-GIT檢測結果中，0～5歲組ITRs發生率最高，0～5歲組與16～30歲組、31～45歲組、46～60歲組、61～75歲組比較差異均有統計學意義（χ2=13.56、20.61、11.17、11.01，均 P＜0.01）。6～15 歲組和31～45歲組比較差異有統計學意義（χ2=4.56，P＜0.05），≥76歲組和16～30歲組、31～45歲組、46～60歲組、61～75歲組比較差異均有統計學意義（χ2=8.58、14.64、6.29、6.15，均 P＜0.05）。見表 3。

表3 不同年齡組QFT-GIT檢測ITRs發生率的比較

2.3 QFT-GIT檢測ITRs組和確定結果組各項指標的比較 ITRs組和確定結果組年齡差異無統計學意義（P ＞0.05），ITRs組患者 TP、Alb、L 水平均低于確定結果組（均 P＜0.01），ALT、AST、WBC 水平均高于確定結果組（均 P＜0.01），見表 4。

表4 QFT-GIT檢測ITRs組和確定結果組各項指標的比較

2.4 QFT-GIT檢測ITRs的獨立危險因素分析 QFTGIT檢測ITRs出現的獨立危險因素有低TP、低Alb、L降低和高WBC、高ALT，見表5。

表5 QFT-GIT檢測ITRs多因素logistic回歸分析

3 討論

結核病是全球高發傳染病，嚴重威脅人類的健康?！?019全球結核病報告》顯示，2018年全球新發結核病患者約為1 000萬，而中國和印度結核病患者占全球總數43%[1]。早診斷、早隔離、早治療是減少結核病發病和死亡的關鍵，而延誤診斷會導致治療不及時以及MTB的傳播[5]。

γ-干擾素釋放試驗QFT-GIT是使用特殊的血液培養管孵育全血，檢測受結核桿菌特異性抗原刺激產生的γ-干擾素含量，來判斷是否存在MTB感染的特異性細胞免疫反應，不受卡介苗的影響[6]，且由于結果判讀標準綜合了陽性對照管和陰性對照管，反應了結核桿菌特異性抗原的免疫反應，能更好的來檢測潛伏性MTB感染[7-8]。許多比較診斷MTB感染方法的研究發現QFT-GIT檢測更適用于涂片陰性MTB感染、大規模篩查[9-10]，但QFTGIT檢測會出現一定比例的ITRs，影響了MTB感染的診斷。

QFT-GIT檢測ITRs的發生多是由于陽性對照組未能釋放足夠的γ-干擾素，少數是因為空白對照過高，這表明機體的T淋巴細胞數量和活性對于ITRs的發生有一定影響，ITRs容易在免疫功能低下人群中出現[11]。本研究QFT-GIT檢測ITRs的總發生率為7.68%，低于朱琳等[12]關于發熱患者QFT-GIT檢測ITRs的發生率（30%），稍高于陳孝嫚等[4]研究結果（6.55%），這可能與本研究對象的機體狀況不同有關。

本研究發現QFT-GIT檢測ITRs男女總發生率差異無統計學意義，年齡0～5歲組發生率最高，其次是≥76歲組，且與16～30歲組、31～45歲組、46～60歲組、61～75歲組比較差異均有統計學意義，說明年齡是QFT-GIT檢測ITRs產生的重要影響因素，尤其是≤5歲和≥76歲人群的影響尤為突出，可能與不同年齡段機體的免疫功能和淋巴細胞活性不同有關，這與其他研究基本一致[13-14]。同時研究發現QFT-GIT檢測ITRs的患者TP、Alb和 L低于 QFT-GIT檢測確定患者，而ALT、AST和WBC高于QFT-GIT檢測確定患者，差異均有統計學意義（均P＜0.05），而經多因素logistic回歸分析后發現 TP、Alb、WBC、L和 ALT是 QFT-GIT檢測ITRs發生的獨立危險因素。

綜上所述，采用QFT-GIT檢測可疑結核感染時，綜合考慮患者的年齡、血清蛋白水平、WBC和L的影響，可提高QFT-GIT檢測確定結果檢出率。本研究還存在不足之處，如果對進行QFT-GIT檢測的患者根據疾病不同進行分類比較，可以更好的了解不同疾病對QFTGIT檢測結果的影響；如果對ITRs患者再次進行QFTGIT檢測，比較兩次檢測是否一致并分析原因，可更好的了解患者生理病理因素對于發生ITRs的作用。