2018年鄭州市手足口病病原學檢測及流行病學分析

史軍，牛衛東，許太彬，胡乃月，張航

(鄭州市疾病預防控制中心，河南 鄭州 450007)

手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是由一組腸道病毒引起的傳染病，多數患者癥狀較輕，個別患者可發展為重癥甚至死亡[1-2]。柯薩奇病毒A16型(coxsackievirus A16，CoxA16)和腸道病毒71型(enterovirus 71，EV71)是最常見的2種引發HFMD的病毒[3-5]。

2016年上半年，EV71疫苗在我國上市，讓HFMD的防控工作邁進了一大步[6]。2016年之前，鄭州市HFMD病原體以EV71和CoxA16為主，為探究EV71疫苗上市以來鄭州市HFMD病原譜是否出現變化，了解EV71疫苗上市后鄭州市HFMD的發病規律，本文對2018年鄭州市疾病預防控制中心病毒實驗室檢測的HFMD臨床病例進行分析，結果如下。

1 資料與方法

1.1 資料來源病例信息來自市轄縣(市、區)疾病預防控制中心2016—2019年上報的個案資料。病例標本為各縣區疾病預防控制中心每月采集的5例發病7 d內的臨床診斷輕癥病例糞便標本，重癥病例、聚集病例全部采集，用于病原核酸檢測。

1.2 試劑與儀器手足口熒光聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)試劑盒腸道病毒通用型(enterovirus，EV)、EV71+CoxA16型購自江蘇碩世生物科技股份有限公司。離心機為德國Eppendorf Centrifuge 5430R，生物安全柜為美國熱電Thermo 1300 SERIES A2，病毒核酸提取儀為德國Qiagen Qiaxtractor，基因擴增儀為美國伯樂公司Bio-Rad CFX96實時熒光PCR儀。

1.3 標本的處理與核酸提取在生物安全柜中，取黃豆大小糞便標本加入含100 μL三氯甲烷、800 μL生理鹽水的1.5 mL離心管中，使用震蕩器處理1 min，制成糞便混懸液，然后10 000 r·min-1離心10 min(離心半徑9.5 cm)，取200 μL上清液，根據Qiagen Qiaxtractor核酸提取儀使用說明及配套提取試劑盒進行核酸提取。

1.4 實時熒光PCR擴增按照試劑盒說明配制20 μL反應體系，其中反轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcription PCR，RT-PCR)主反應液7.5 μL，酶混合液5 μL，各型別病毒反應液4 μL，去RNA酶水3.5 μL。冰浴條件下按每份20 μL將反應體系分裝至100 μL八聯管，取核酸5 μL加入反應體系，瞬間離心后上機擴增。反應條件：50 ℃，30 min；95 ℃，5 min；95 ℃，10 s，55 ℃，40 s。共45個循環。在55 ℃時進行熒光檢測。檢測通道：FAM(EV、CoxA16)、VIC(EV71)。根據熒光PCR擴增曲線及試劑盒說明書對每份標本進行結果判定。當EV為陽性、EV71和CoxA16為陰性時，定義為其他腸道病毒陽性。

1.5 統計學方法采用Excel 2007軟件建立數據庫，采用SPSS 24.0統計軟件進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病原學檢測結果2018年實驗室共檢測690例臨床診斷為HFMD的病例，檢出腸道病毒感染病例439例(63.62%)，檢出EV71陽性30例(4.35%)，CoxA16陽性68例(9.86%)，341例(49.42%)為其他腸道病毒感染。檢測病例中162例為重癥病例，占檢測病例的23.48%，其中146例(90.12%)檢出腸道病毒感染。檢測病例與重癥病例的病原學檢測結果相比，差異有統計學意義(χ2=66.75，P<0.05)。EV71陽性病例中，重癥率為93.33%(28/30)；CoxA16陽性病例中，重癥率為22.06%(15/68)；其他腸道病毒陽性病例中，重癥率為30.21%(103/341)。見表1。

表1 2018年鄭州市HFMD病例病原學構成

2.2 性別分布2018年HFMD檢測病例中男396例，女294例，男女之比為1.35∶1。重癥病例中男94例，女68例，男女之比為1.38∶1。HFMD檢測病例和重癥病例的性別分布差異無統計學意義(χ2=0.02，P>0.05)。

2.3 時間分布2018年HFMD檢測病例數在5月達到高峰，檢測120例，5—7月共檢測303例病例，占檢測病例的43.91%。重癥病例數在6月達到高峰，5—7月重癥病例共129例，占重癥病例的79.63%，1、2、3、9、11月無送往實驗室檢測的重癥病例，見圖1。2018年HFMD檢測病例與重癥病例時間分布相比，差異有統計學意義(χ2=111.04，P<0.05)。

圖1 2018年鄭州市手足口病(HFMD)送檢和重癥

2.4 職業分布2018年HFMD檢測病例中散居兒童652例，占檢測病例的94.49%；幼托兒童38例，占檢測病例的5.51%。重癥病例中散居兒童149例，占重癥病例的91.98%；幼托兒童13例，占重癥病例的8.02%。2018年HFMD檢測病例與重癥病例職業分布差異無統計學意義(χ2=1.48，P>0.05)。

2.5 年齡分布2018年HFMD檢測病例年齡為1個月～27歲，其中1歲病例最多，為261例，占檢測病例的37.83%，5歲以下病例數達到647例，占檢測病例的93.77%。重癥病例年齡最大的為6歲10個月，最小的為1個月，1歲組重癥病例數最多(67例)，占重癥病例的41.36%，5歲以下重癥病例數155例，占重癥病例的95.68%。檢測病例與重癥病例年齡分布差異有統計學意義(χ2=17.90，P<0.05)。

圖2 2018年鄭州市手足口病(HFMD)病例年齡分布

2.6 EV71陽性HFMD病例變化趨勢根據2016—2019年疾病預防控制中心病毒實驗室檢測數據，2017年EV71占比較2016年大幅下降，2018及2019年下降趨勢延續，2019年EV71已不再是鄭州地區HFMD流行毒株。2016—2019年鄭州市HFMD病例EV71陽性構成比差異有統計學意義(χ2=192.64，P<0.05)。見表2。

表2 2016—2019年鄭州市EV71陽性HFMD病例構成比

3 討論

近年來，HFMD始終是各地衛生部門重點關注的傳染病之一。從鄭州市2018年病原學檢測情況來看，全年檢測病例和重癥病例的病原學構成差異有統計學意義。2018年鄭州市檢測到的EV71陽性HFMD病例僅占6.83%(30/439)，較前下降明顯，這可能與EV71疫苗的上市和推廣有關[7]。然而，30例EV71陽性病例中28例為重癥病例，重癥率達到93.33%，這與之前的報道[8]一致。全年檢測病例中其他腸道病毒陽性病例占49.42%，重癥病例中其他腸道病毒陽性病例占63.58%，說明與之前歷年不同，其他腸道病毒已取代EV71成為HFMD的主要病原體[9]。近年來，多地統計發現其他腸道病毒感染的比例正在逐年增加[10-12]，提醒相關醫務工作者應注重開展對其他腸道病毒的分析工作，關注EV71疫苗上市后HFMD流行毒株的變化。

2018年HFMD檢測病例與重癥病例性別分布差異無統計學意義，男性病例較多，這可能與男孩喜好活動、密切接觸機會多有關[13]。從年齡分布來看，2018年HFMD檢測病例與重癥病例年齡分布差異有統計學意義，檢測病例中5歲以下兒童占93.77%，重癥病例年齡分布更加集中，最大年齡為6歲10個月，95.68%為5歲以下兒童。感染病例仍以散居兒童為主，提示5歲以下散居兒童是HFMD的重點防治人群，應加強對相關兒童和家長衛生意識的培養[14]。

從時間分布來看，2018年HFMD檢測病例與重癥病例差異有統計學意義，檢測病例數在5月份達到高峰，重癥病例數高峰比檢測病例晚1個月，且重癥病例出現的時間更加集中，5—7月出現129例，占重癥病例的79.63%，這與以往報道[9]一致，提示5—7月應格外注意加強對HFMD的防控。

綜上所述，2018年鄭州市其他腸道病毒已取代EV71成為HFMD病例的主要病原體，應開展對其他腸道病毒的分型分析工作，密切關注EV71疫苗上市后鄭州市HFMD流行毒株的變化，研發新型疫苗應對新形勢。5—7月是HFMD的高發季節，應加強對5歲以下散居兒童HFMD的防治工作，加大衛生安全和疫苗接種宣傳力度，減少HFMD的發病。