RNF181與Hippo/YAP對腦膠質瘤SHG44細胞惡性程度的影響及其可能機制

裴美娟，孫中磊，黃生炫，劉英富，李學文

腦膠質瘤是一種高侵襲性的中樞神經系統惡性腫瘤，與其他神經系統腫瘤相比，腦膠質瘤有更高的轉移趨勢，整體預后較差及生存率較低[1,2]。目前，腦膠質瘤缺乏合適的治療靶點，因此，臨床迫切需要發現腦膠質瘤的致癌機制和新型靶向療法。近年來，越來越多的證據表明，Hippo/YAP信號通路在中樞神經系統發育和腦腫瘤中有重要作用[3]，耗竭YAP或藥物抑制YAP可能導致細胞死亡和細胞生長抑制[4]。有研究表明，RNF181可以穩定YAP蛋白并抑制K48連接的多聚泛素化，從而導致乳腺癌的進展[5]。RNF181作為E3泛素連接酶可以抑制抗原受體信號轉導到CARD11下游NF-κB信號通路負調控淋巴瘤細胞生存[6]，但關于RNF181在腦膠質瘤中的功能報道較少。本研究通過探究RNF181與Hippo/YAP對膠質瘤細胞惡性度的影響及其可能機制，旨在為臨床診治提供幫助。

1 材料與方法

1.1 材料 人膠質瘤細胞系SHG-44(上海中科院細胞庫)，DMEM培養液、胎牛血清、胰酶(美國Gibco公司)，過表達RNF181mRNA腺病毒表達載體AAVrh.10 RNF181與無表達基因腺病毒衣殼AAVrh.10 Negative(濟南思科生物科技有限公司)，RNF181、YAP(美國abcam公司)，MTT、Trizol及去RNA酶試劑(美國Cayman Chemical公司)，RT-PCR引物(賽默飛世爾科技中國有限公司)。Tranwell小室、細胞培養板及計數板(美國康寧公司)。

1.2 方法

1.2.1 細胞與分組 SHG-44細胞在DMEM培養液常規培養，分為3組：對照組(Control組)、陰性對照組(Negative組)和RNF181過表達組(RNF181組)。Negative組和RNF181組SHG-44細胞分別加入等滴度純化的腺病毒表達載體AAVrh.10 Negative、AAVrh.10 RNF181，Control組加入等體積PBS，共培養12 h。根據細胞的密度進行換液或者傳代。每次傳代時，加入2.5 μg/ml嘌呤霉素繼續篩選穩定的細胞株，每隔1 d于熒光顯微鏡觀察細胞GFP熒光強度，直至熒光強度無明顯變化，無死亡漂浮的細胞。……