低聚原花青素對糖尿病腎病大鼠足細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的抑制作用

呂曉楠，宗春輝，董 錚

糖尿病腎病(diabetic kidney disease,DKD)是常見的糖尿病微血管并發(fā)癥，也是導(dǎo)致終末期腎病(end-stage renal disease,ESRD)的主要病因之一，嚴重危害人類健康[1]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，到2040年糖尿病患者將增至6億，其中約1/3將發(fā)展至DKD[2]。足細胞是腎小球內(nèi)臟上皮細胞，是構(gòu)成腎小球濾過屏障的重要部分。DKD與糖尿病早期腎小球足細胞受損密切相關(guān)，其中足突的形態(tài)、數(shù)量、相關(guān)蛋白的表達等方面的改變與DKD的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)系[3]。研究發(fā)現(xiàn)，在一定刺激作用下，足細胞會出現(xiàn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)的表型變化[4]，而EMT是DKD中發(fā)生纖維化的重要機制[5]。

中醫(yī)中藥在治療腎臟疾病中具有一定優(yōu)勢，近年來發(fā)現(xiàn)低聚原花青素(Oligoprocyanidins，OPC)具有抗氧化、清除自由基、抗衰老作用。越來越多的證據(jù)表明，OPC可能對預(yù)防糖尿病并發(fā)癥具有一定作用[6,7]。本課題組前期證實了OPC可減少大鼠的氧化應(yīng)激、抑制炎性反應(yīng)[8]。本研究在前期研究基礎(chǔ)上探索OPC對DKD大鼠的腎臟病理改變和EMT作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 OPC提取物購自天津尖峰藥業(yè)有限公司；鏈脲佐菌素 (Streptozotocin,STZ)(美國Sigma公司)；代謝籠(韓國JeungdoBio&Plant公司)；RIPA裂解緩沖液(P0013B)，蛋白酶抑制劑混合物(P1005)購自上海碧云天公司；一抗抗體TWIST1(CST，1∶1000)、E-cadherin(CST，1∶1000)、Vimentin(CST，1∶1000)蛋白均購自Cell signaling公司。葡萄糖、血尿素氮和肌酐試劑盒均購自美國Abcam公司；尿白蛋白試劑盒購自美國Bethyl公司。光學(xué)顯微鏡購自日本Olympus；超薄切片機(德國萊卡)，透射電子顯微鏡(H-7700，日本日立)，環(huán)氧樹脂Araldite M購自美國Sigma公司。

1.2 實驗動物 選取5周齡雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只，體重(180±20)g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供。在22～24 ℃的光/暗循環(huán)中飼養(yǎng)12 h。……