多發性骨髓瘤患者EB病毒檢測及其臨床意義

晏建國，羅 萍，胡 飛，歐陽賢鳳，李金鳳，朱文鳳，郭 瑛

（九江市第一人民醫院血液內科，江西 九江 332000）

多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一種以漿細胞克隆性增殖為特征的血液系統惡性腫瘤，占血液系統惡性腫瘤第2 位，其病因及機制尚不清楚[1]。EB 病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）屬于人皰疹病毒γ 亞科，是一種嗜人類淋巴細胞的雙鏈線性DNA 病毒，也是第一個被證實與人類腫瘤相關的病毒，全世界約有90%以上的成年人曾感染過EBV，但絕大多數僅表現為自限性潛伏性感染[2，3]。我國感染EBV 的患者年齡比西方國家年輕[4]。因此，在我國研究EBV 感染與腫瘤的關系顯得尤為重要。研究表明EBV 和其他皰疹病毒一樣，Burkitt 淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和彌漫性大B 細胞淋巴瘤等不同類型的B細胞源性淋巴惡性腫瘤密切相關[5]。B 淋巴細胞惡性腫瘤可由EBV 感染的B 細胞克隆引起，有證據表明持續的EBV 感染可導致疾病進展[6]。但EBV 感染與MM 之間的關系仍有爭議[7]，需要進一步的研究。本研究通過檢測MM 患者外周血中EBV-DNA 拷貝數，探討EBV 感染與MM 的潛在關系及其對MM 患者臨床特征、分期、預后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012 年5 月～2020 年2 月在九江市第一人民醫院初診的MM 患者110 例被納入MM 組，其中男性患者53 例，女性患者57 例，年齡38～85 歲，所有患者診斷均符合《血液病診斷及療效標準》多發性骨髓瘤診斷標準[8]。依照異常增殖的免疫球蛋白類型分為IgG 型45 例（40.04%），IgA 型42 例（37.50%），IgD 型6 例（5.77%），κ 輕鏈型7 例（6.73%），入輕鏈型7 例（6.73%），不分泌型3 例（2.88%）。按照國際分期體系（ISS）臨床分期，I 期18例（16.36%），Ⅱ期22 例（20.00%），Ⅲ期70 例（63.64%）。按照梅奧骨髓瘤分層（mSMART）為基礎國際危險度分層，低危32 例（29.09%），中危43 例（39.09%），高危35 例（31.82%）。另選取同一時間段在九江市第一人民醫院就診的110 例沒有任何類型的血液系統疾病和其他癌癥且骨髓象大致正常患者作為正常對照組，其中男性患者55 例，女性患者55 例。

1.2 方法 通過實時熒光定量PCR 檢測所有受試者外周血EBV-DNA 拷貝數。按EBV-DNA 拷貝數分為EBV-DNA 陽性（≥500 IU/ml）和EBV-DNA 陰性（＜500 IU/ml）。取2～4 mlEDTA 抗凝外周血進行檢驗，加入淋巴細胞分離液進行分離，將白細胞層吸出，使用0.9%的氯化鈉溶液洗滌白細胞層，再加入50 μl DNA 提取液，充分混勻后在100 ℃的恒溫環境內反應10 min，再經過5 min 離心處理后，取上清液用于PCR 檢測。通過實時熒光定量PCR 試劑盒（中山大學達安基因股份有限公司生產）檢測，基因拷使用IU/ml 表示，按EBV-DNA 拷貝數分為EBV-DNA 陽性（≥500 IU/ml）和EBV-DNA 陰性（＜500 IU/ml）。

1.3 觀察指標 觀察所有受試者EBV-DNA 表達情況，分析外周血EBV-DNA 在不同分型、不同分期、不同危險度分層MM 患者中的表達情況。

1.4 統計學分析 采用SPSS 19.0 進行統計學分析，正態分布計量資料以（）表示，兩組之間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析。計數資料以（%）表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MM 組與對照組EBV-DNA 陽性表達率比較MM 組的EBV 感染率高于對照組，差異有統計學意義（χ2=83.887，P＜0.05），見表1。

表1 MM 患者與對照組外周血EBV-DNA 的陽性表達率[n（%）]

2.2 患者外周血EBV-DNA 的陽性表達比較 不分泌型多發性骨髓瘤EBV-DNA 陽性表達率高于其他類型多發性骨髓瘤，差異有統計學意義（P＜0.05）；ISS 分期Ⅰ期EBV-DNA 陽性表達率高于正常對照組（χ2=6.098，P＜0.05），低于Ⅱ期（χ2=3.922，P＜0.05）和Ⅲ期（χ2=19.799，P＜0.00），Ⅱ期EBV-DNA 陽性表達率低于Ⅲ期（χ2=4.591，P＜0.05）；mSMART 危險度分層低位組EBV-DNA 陽性表達率高于正常對照組（χ2=23.104，P＜0.00），但低于中危組（χ2=5.121，P＜0.05）和高危組（χ2=15.228，P＜0.00），中危組EBVDNA 陽性表達率低于高危組（χ2=4.003，P＜0.05），見表2。

表2 MM 患者外周血EBV-DNA 的陽性表達比較（n，%）

3 討論

多發性骨髓瘤是一種病因不明的血液系統腫瘤，常有低水平的多克隆免疫球蛋白，并表現出中至重度的體液免疫缺陷[9]。此外，治療期間使用免疫抑制藥物是導致免疫低下和誘發感染的另一個重要因素[10]。因此，確定與MM 進展相關的各種感染因素，對于確定疾病預后和選擇個體化治療方案至關重要。

研究表明[11]，多發性骨髓瘤的發生與EBV 感染存在一定關系，且EBV-DNA 的陽性率在50.0%～83.3%[12]，本研究檢測的MM 患者EBV 的感染率為59.09%。其可能機制為：①EBV 誘導免疫功能低下者發生MM[13]；②EBV 感染B 淋巴細胞引起永生化，促進其分泌IL-6，并可能在癌基因的參與下引起細胞惡性變[14]；③EBV 可能通過上調Bel-2 及其他抑制凋亡的蛋白，激活NF-KB 信號傳導通路導致IL-10 表達增多，使細胞間的增殖與凋亡失衡，引起腫瘤的發生[3，15]；④EBV 干擾細胞DNA 修復機制，并可能導致感染細胞的遺傳變化[16，17]。

本研究結果顯示，EBV-DNA 陽性表達率在不同分型多發性骨髓瘤患者中存在差異，尤其是不分泌型多發性骨髓瘤EBV-DNA 陽性表達率明顯高于其他類型多發性骨髓瘤，可能是因為不分泌型多發性骨髓瘤惡性程度較高，其發生可能與EBV 感染更加密切相關，但由于樣本量少，缺乏統計價值。在不同分期比較中，Ⅰ期EBV-DNA 陽性表達率低于Ⅱ期和Ⅲ期（P＜0.05），Ⅱ期EBV-DNA 陽性表達率低于Ⅲ期（P＜0.05），提示臨床分期越晚的患者EBV 陽性表達率越高，提示病情較嚴重。在不同危險度分層比較中，低位組EBV-DNA 陽性表達率低于中位組和高位組（P＜0.05），中位組EBV-DNA 陽性表達率低于高位組（P＜0.05），提示危險程度越高的患者EBV 陽性表達率越高，提示預后較差。因此表明，EBV 在不同分型、不同分期、不同危險度分層多發性骨髓瘤患者中存在一定差異，這與Xia B 等[18]研究結果相似。

綜上所述，EBV 感染與多發性骨髓瘤的發生密切相關，EBV 感染與多發性骨髓瘤的發生密切相關，外周血EBV-DNA 表達在多發性骨髓瘤患者臨床分型、分期、危險度分層的存在差異，通過檢測外周血EBV-DNA 對多發性骨髓瘤診斷、預后判斷具有一定應用價值，且檢測手段方便、快捷。