雄性APP/PS1/Tau 三轉基因小鼠阿爾茨海默病樣病理的年齡相關性變化

劉 碩， 朱 昆， 王國慶， 張瀟怡， 杜 娟， 曹云鵬

阿爾茨海默病(AD)是癡呆中最典型的疾病，占所有癡呆病例的50%至60%[1]。AD的典型病理標志是神經(jīng)元內的神經(jīng)原纖維纏結(NFT)和細胞外的淀粉樣斑塊(SP)沉積[2]，此外還包括神經(jīng)突觸營養(yǎng)不良、星形膠質細胞增生、小膠質細胞活化以成熟神經(jīng)元標記物改變等[3]。目前，越來越多種類的轉基因鼠模型在AD的研究中做出貢獻[4，5]，其中APP/PS1/Tau三轉基因小鼠(3xTg-AD)是最常用的AD轉基因模型之一。3xTg-AD小鼠同時表達3種罕見的家族突變基因：人PS1M146V、人APPswe和人tauP301L，在評估共同進化的淀粉樣蛋白和tau病理學方面具有重要參考價值[6]。本實驗主要探究2～15月齡雄性3xTg-AD小鼠每兩個月腦組織AD相關性病理形態(tài)學變化。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 我們采用3xTg-AD小鼠共21只，C5B7L/6J(野生型，WT) 共 21只，均為雄性，體重25～30 g，SPF級；3xTg-AD小鼠及C57BL/6J小鼠均由美國Jackson Laboratory公司提供。該實驗經(jīng)中國醫(yī)科大學倫理委員會批準同意。

1.2 藥物與主要試劑 封閉用山羊血清(Solarbio，SL038)、鼠SP法染色試劑盒(中杉金橋)、兔SP法染色試劑盒(中杉金橋)、DAB濃縮型試劑盒20X(Solarbio，DA1010)、Quick Block組化一抗稀釋液(Beyotime，P0262)、一抗：6E10(BioLegend)、Tau Monoclonal Antibody(HT7，Invitrogen)、Phospho-Tau Monoclonal Antibody(AT8，Invitrogen)、GFAP(Abcam)、NEUN(Abcam)，蔗糖(滬試)、乙二醇(恒興試劑)二水合磷酸二氫鈉(滬試)、十二水合磷酸氫二鈉(滬試)、檸檬酸鈉(Solarbio)、蘇木素(Solarbio)、酸性乙醇分化液(Solarbio)、免疫組化筆(邁新試劑)。

1.3 儀器 平推切片機(Leica)；正置倒置一體熒光顯微鏡(Echo Revolve)。

1.4 方法

1.4.1 動物分組 雄性3xTg-AD三轉基因小鼠按2、4、6、8、10、12、15月齡分為7組，每組各3只，作為實驗組；雄性C5B7L/6J小鼠(Wild Type，WT)按2、4、6、8、10、12、15月齡分為7組，每組各3只，作為對照組。

1.4.2 心臟灌流法獲取腦組織 按體重計算小鼠所需麻醉劑量；將小鼠固定于手術臺，用鑷子提起劍突處的皮膚，外科手術剪剪開皮膚及肋骨，暴露心臟及肝臟，分離小鼠心臟周圍系膜，剪開鼠右心耳，使血液流出，同時將抽取10 ml生理鹽水的注射器插入小鼠左心室，灌注生理鹽水，待肝臟顯白色后停止灌注；……