CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及其診斷價值*

唐 娟，俸瑞發,伍金鳳

(桂林醫學院第二附屬醫院 a.病理科；b. 乳腺甲狀腺外科，廣西 桂林 541199)

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是內分泌系統常見惡性腫瘤，也是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的一種類型，占所有甲狀腺惡性腫瘤的80%～90%，發病率逐年升高，該類腫瘤在中青年女性中的發生率較高[1]。大部分甲狀腺乳頭狀癌的生物學行為相對惰性，患者10年生存率超過90%[2]，國內研究揭示，患者術后10年生存率可高達96%[3-4]，早期明確診斷對甲狀腺乳頭狀癌患者有重要意義。甲狀腺乳頭狀癌患者臨床通常表現為無癥狀的頸部腫塊或甲狀腺結節，與甲狀腺良性病變不能區分。近年隨著影像技術的發展，雖然超聲檢查能在一定程度上區分良惡性甲狀腺病變，但仍需病理組織學金標準確診。在病理診斷中，甲狀腺良性增生性病變與一些不典型的甲狀腺乳頭狀癌在組織結構及細胞形態方面具有相似性，單純依據形態學診斷有困難。近年隨著分子生物學研究的深入，發現一些有助于鑒別甲狀腺良惡性病變的生物分子標志物。本研究探討生物分子標志物CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌病理診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2020年12月本院收治的甲狀腺乳頭狀癌患者202例與甲狀腺良性病變患者51例，所有患者臨床病理資料完整，均經手術獲取了病灶組織，術前均未行放化療治療。202例甲狀腺乳頭狀癌患者，男24例，女178例；年齡16～86歲，平均(45.2±12.0)歲。51例甲狀腺良性病變患者，男10例，女41例；年齡19～75歲，平均(52.3±13.1)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經過桂林醫學院第二附屬醫院醫學倫理委員會批準；患者知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 患者均經手術切除病灶，標本用10%中性福爾馬林固定24 h后，取病灶組織塊，采用全自動組織脫水機進行常規脫水、透明、浸蠟，石蠟包埋備用。

1.2.2 免疫組化 均采用EnVision兩步法染色，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO一抗均購自福州邁新生物技術開發有限公司。石蠟標本連續切片約4 μm厚，60 ℃烤片1 h以防脫片，切片置入二甲苯脫蠟15 min，重復2次，再依次置入無水酒精、95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各10 min，清水沖洗5 min，利用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復3 min，3%過氧化氫液浸泡封閉10 min，滴加一抗37 ℃ 孵育60 min，采用PBS緩沖液沖洗3次，5 min/次，滴加二抗37 ℃孵育30 min，PBS緩沖液沖洗3次，5 min/次，DAB顯色，蘇木素復染，封片。

1.2.3 結果判讀 由兩位高年資病理診斷醫師利用光學顯微鏡獨立閱片，觀察切片內病變細胞著色情況，進行免疫組化結果評估。CK19、TPO陽性染色位于細胞質，HBME-1陽性染色位于細胞質/膜，Galectin-3陽性染色位于細胞核/質/膜，陽性細胞>10%為陽性，陽性細胞≤10%為陰性。

1.3 統計學方法

采用SPSS 26.0統計學軟件分析數據，計數資料以n，%表示，采用χ2檢驗；應用ROC曲線分析CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表達模式

CK19、HBME-1和Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中呈陽性表達，且CK19表現為細胞質著色，HBME-1表現為細胞膜及細胞質著色，Galectin-3表現為細胞膜、質、核均著色，三者在甲狀腺良性病變中多為陰性；TPO的表達情況則相反，在甲狀腺良性病變中呈陽性，表現為細胞質著色，而在甲狀腺乳頭狀癌中出現失表達。詳見圖1。

圖1 免疫組織化學檢測CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表達(200×)

2.2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的表達情況

CK19、HBME-1和Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中的表達陽性率分別為99.01%、92.57%、98.02%，高于在甲狀腺良性病變中的表達54.90%、21.57%、31.37%，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)；TPO在甲狀腺乳頭狀癌中的表達陽性率為8.42%低于甲狀腺良性病變中的表達90.20%，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺良性病變組織中的表達(n，%)

2.3 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表達與甲狀腺乳頭狀癌轉移的相關性分析

CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移與無轉移患者中的表達差異無統計學意義(P>0.05)，他們的表達與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移無相關性。詳見表2。

表2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表達與甲狀腺乳頭狀癌轉移的相關性分析(n，%)

2.4 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表達與甲狀腺乳頭狀癌被膜侵犯的相關性分析

CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌被膜侵犯與無侵犯患者中的表達差異無統計學意義(P>0.05)，他們的表達與甲狀腺乳頭狀癌被膜侵犯無相關性。詳見表3。

表3 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO表達與甲狀腺乳頭狀癌被膜侵犯的相關性分析(n，%)

2.5 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷價值分析

ROC曲線分析表明，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO聯合檢測與任意單一檢測在甲狀腺乳頭狀癌患者中的診斷靈敏度及特異性均較高。詳見表4和圖2。

表4 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能

圖2 CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌中的診斷ROC曲線

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌的診斷主要依據其典型、明確的核特征，如核拉長重疊、核溝、核內假包涵體等，然而，在某些病例中，典型核特征不明確時，準確的診斷變得困難。同時，一些甲狀腺良性病變也可出現乳頭狀結構和核的形態變化，形態學與甲狀腺乳頭狀癌高度相似，這使兩者的鑒別極具挑戰。因此，運用有效的分子生物學方法輔助診斷是十分必要的。

CK19是一種低分子量細胞角蛋白，由KRT19基因編碼，在各種上皮組織和腫瘤中表達。研究結果顯示，CK19在甲狀腺乳頭狀癌中通常呈現彌漫的強表達，而在甲狀腺良性病變中也可有一定程度表達[5]。HBME-1即人骨髓內皮細胞標記物，是間皮細胞表面微絨毛表面特異性標記物，在腫瘤血管的形成、腫瘤的生長及轉移中發揮重要作用[6]。近年來，HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌的研究逐漸增多，有研究顯示，HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌中陽性率較高，在良性病變中僅少數表達[7-8]。Galectin-3即半乳糖凝集素-3，是β-半乳糖苷結合蛋白動物凝集素家族成員之一，其編碼基因位于1p13。目前研究發現，Galectin-3在多種癌組織中的表達顯著高于正常組織，如甲狀腺乳頭狀癌、喉癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、子宮內膜癌[9]等。研究證實Galectin-3在甲狀腺惡性腫瘤的診斷中有較高的價值，特別是在甲狀腺乳頭狀癌有較高表達[10-11]。TPO是一種合成甲狀腺激素所必需的膜結合蛋白，它催化酪氨酸殘基的碘化和偶聯于甲狀腺球蛋白，形成甲狀腺激素T3和T4，被認為是甲狀腺分化標記物，在甲狀腺癌中表達降低[12]。CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的研究均顯示此4項生物分子標記物在甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變中的表達存在顯著差異，提示他們可能成為診斷甲狀腺乳頭狀癌的有效參考標記物，但對其診斷敏感度和特異性的報道不一，仍存在爭議。本研究結果顯示，甲狀腺乳頭狀癌中CK19、HBME-1、Galectin-3的陽性率分別為99.01%、92.57%、98.02%，明顯高于甲狀腺良性病變組的54.90%、21.57%、31.37%，而TPO的陽性率8.42%則明顯低于甲狀腺良性病變組的90.20%，與Sanuvada等[11]和Huang等[13]的研究結果相似，表明以上4項指標對甲狀腺乳頭狀癌均具有良好的提示作用，在鑒別甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變中具有較高的應用價值。本研究ROC曲線分析顯示CK19、HBME1、Galectin3和TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷靈敏度分別為0.990、0.926、0.980、0.916，特異性分別為0.451、0.784、0.686、0.902，與多項研究結果顯示的 CK19具有高靈敏度低特異性，HBME-1、Galectin-3靈敏度和特異性居中一致[10-11，13-14]。本研究結果顯示，TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷特異性最高，4項指標聯合檢測靈敏度為0.990、特異性為0.902。雖然聯合檢測的靈敏度和特異性沒有明顯優于任何單一指標檢測，差異不具有統計學意義(P>0.05)，但在實際工作中聯合檢測仍能避免因實驗誤差造成的風險，為甲狀腺病變的準確診斷提供更多保障。

盡管甲狀腺乳頭狀癌通常分化良好，生長緩慢，并且局限在原發部位，但長期得不到處理的甲狀腺乳頭狀癌也可以發生淋巴結轉移和被膜侵犯，淋巴結轉移和被膜侵犯與腫瘤遠處轉移和局部復發關系密切，且對甲狀腺乳頭狀癌分期及手術范圍也有影響[15]。近期一項針對55歲以下甲狀腺乳頭狀癌患者的研究顯示，復發率與診斷時的年齡、腫瘤大小、甲狀腺被膜侵犯、多灶和淋巴結轉移有關，且淋巴結轉移是較高復發率的獨立危險因素，年齡越小，復發率越高[16]，故淋巴結轉移和被膜侵犯均是甲狀腺乳頭狀癌預后不良的影響因素。本研究結果顯示，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO的陽性率與淋巴結轉移和被膜侵犯沒有相關性，即以上4項指標不能作為甲狀腺乳頭狀癌預后評估指標。

綜上所述，CK19、HBME-1、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變中的表達均具有顯著差異，CK19、HBME-1、Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中高表達，TPO在甲狀腺乳頭狀癌中低表達或不表達，且該4項指標對甲狀腺乳頭狀癌均具有較高的診斷價值，可作為病理診斷的有效輔助方法。