某豬場沙門氏菌和豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染病例的診斷

楊志剛 湯德元 張森 韓超逸 晏仁潭 陳閶崢 羅柳

摘 要：2020年8月貴州省某豬場出現了大量仔豬發病死亡的現象，為查出該豬場仔豬發病及死亡原因，本研究采用臨床癥狀觀察、病理解剖診斷、細菌分離培養、病毒分子生物學檢測等檢測方法進行病原學檢測。試驗結果顯示：發病仔豬為沙門氏菌和豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）混合感染，并根據診斷結果和豬場實際情況給出了相應的防控建議。

關鍵詞：沙門氏菌;豬繁殖與呼吸綜合征;混合感染;診斷

中圖分類號：S858.9

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0457（2021）03-0079-04

國際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2021.03.013

Diagnosis of a Case of Mixed Infection of Salmonella and Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus on a Pig Farm

YANG Zhigang，TANG Deyuan*，ZHANG Sen，HAN Chaoyi，YAN Rentan，CHEN Changzheng，LUO Liu

（College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China）

Abstract：

A large number of piglets morbidity and death occurred in a pig farm in Guizhou Province in August 2020. In order to find out the causes of morbidity and death of piglets in this pig farm，etiological testing was carried out in this study by clinical symptom observation，pathological anatomy diagnosis，bacterial isolation and culture，virus molecular biological detection and other detection methods. The results showed that the dieseaed piglets were infected with mixture of salmonella and porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV），and the corresponding prevention and control suggestions were given bsaed on the diagnosis results and the actual situation of the pig farm.

Keywords：

salmonella;porcine reproductive and respiratory syndrome;mixed infection;diagnosis

豬沙門氏菌病（swine salmonellosis） 又稱豬副傷寒（paratyphus suum） ，是由沙門氏菌屬細菌引起的仔豬的一種傳染病，致病菌主要是豬霍亂沙門氏菌、豬傷寒沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌等，常發于6月齡以下的仔豬，多發于1～4月齡，臨床上可分為急性、亞急性和慢性3種類型，急性病死率高達90%，慢性型病死率達25%～50% [1-2]。急性型呈敗血癥經過而亡，剖檢見脾臟腫大硬化，腸系膜淋巴結腫大;亞急性和慢性病例多發壞死性腸炎，死亡動物尸體消瘦，剖檢見腸黏膜附有糜爛壞死物，脾臟稍有腫大，肺部常伴有卡他性肺炎病灶[3]。對該病的控制大部分通過抗菌藥物，因此豬群沙門氏菌產生耐藥性也屢見報道[4]。豬殖繁與呼吸綜合征（ porcine repro-ductive and respiratory syndrome，PRRS） 又稱豬“藍耳病”，病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV），以種豬群繁殖障礙和仔豬、生長育肥豬群呼吸道問題為特點，嚴重危害養豬業的發展，給全世界的養豬業造成了巨大的經濟損失[5]，哺乳仔豬主要有腹瀉、呼吸困難等癥狀，個別仔豬還會出現精神癥狀，如震顫、后肢癱瘓等[6]。近年來，國內廣泛流行的PRRSV變異毒株引起的豬殖繁與呼吸綜合征，發病和死亡率均比較高[7]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

貴州省某規?；B豬場800多頭仔豬有400多頭出現腹瀉，糞便惡臭，耳部發紫，一個月內30多頭小豬出現死亡，于是該豬場將2只瀕死仔豬送檢。使用高壓滅菌的器械剖檢對仔豬進行解剖，無菌采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟等，并記錄病理變化。

1.1.2 主要試劑和培養基

LB培養基和SS培養基培購自生工生物工程（上海）股份有限公司;藥敏紙片購自杭州微生物試劑有限公司;DL2000 DNA Maker購自索萊寶（北京）生物有限公司。

1.1.3 主要儀器

梯度PCR 擴增儀和Gel DOC XR凝膠成像系統購自美國BIO-RAD有限公司;恒溫培養箱購自寧波江南儀器廠;電泳儀購自北京君意東方電泳設備有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細菌分離與純培養

在無菌環境下使用接種環，無菌采集心臟、肝臟、脾臟、腸容物分別進行LB培養基和SS培養基培養1～2 d。然后觀察菌落，根據其顏色、形態和數目，記錄并選取各個不同類型菌落進行純化和革蘭氏染色鏡檢。

1.2.2 細菌的生化特性鑒定

將分離純化的細菌在無菌的條件下分別進行半固體培瓊脂、鳥氨酸脫羧酶肉湯、賴氨酸脫羧酶肉湯、西蒙氏枸櫞酸鹽、硫化氫、尿素酶、色氨酸肉湯、MR-VP、苯丙氨酸、甘露醇、肌醇、山梨醇、蜜二糖、核糖醇、棉子糖試驗。37℃培養1 d后觀察結果。

1.2.3 藥敏試驗

無菌操作將純化培養的菌落接種于培養基中并涂勻，選用頭孢曲松、環丙沙星、氧氟沙星、紅霉素、氨芐西林、阿莫西林、慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、多西環素、磺胺噁唑、林可霉素和青霉素共13種常用藥敏片貼在培養基中，于37℃下厭氧培養1～2 d后觀察結果，并測定抑菌圈直徑，判斷其藥敏性。

1.2.4 相關病毒分子生物學檢測

無菌采集送檢豬的血液、心臟、淋巴結、肺臟、肝臟和脾臟混合研磨，反復凍融3次，使用TaKaRa Min BEST Viral DNA＼RNA Extraction Kit Ver.5.0 試劑盒提取總的DNA/RNA，進行豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病（PRV）、豬圓環病毒2型（PCV2）和日本乙型腦炎病毒（JEV）的PCR擴增。反應結束后取6 μL PCR產物于1.5%的1×TAE瓊脂糖凝膠中電泳檢測（90 V，35 min），用凝膠成像系統拍照記錄。

2 結果與分析

2.1 臨床癥狀及病理變化

發病豬精神沉郁，體溫升高，寒戰，喜鉆墊草，堆疊在一起，食欲減退，拉水樣黃黑色糞便，糞便惡臭，脫水消瘦，耳部發紫及軀體末端皮膚發紺，四肢無力呈俯臥姿勢或犬坐姿勢，肛門周圍被毛被糞便污染。經過剖檢可見病豬腸系膜淋巴結腫大，大理石樣，其他淋巴結也腫大，肺臟質地變軟（圖1）;胃脹氣、腸壁變?。▓D2）;心臟變軟（圖3）;脾腫大，堅實似橡皮;全身各個粘膜和漿膜均有不同程度的出血斑點，胃腸粘膜常見急性卡他性炎癥;其中糞便呈黃色。

2.2 細菌分離培養及染色

接種小腸內容物的SS培養基上有大量黑色菌落生長（圖4），然后挑取單菌落進行純培養并對其革蘭氏染色鏡檢，油鏡視野下可見大量革蘭氏陰性菌（圖 5），初步鑒定為沙門氏菌。

2.3 細菌的生化特性鑒定

細菌的生化特性鑒定結果與沙門氏菌生化特征吻合度較高，具體結果如下：

2.4 藥敏試驗

藥敏試驗結果顯示該菌對頭孢曲松、環丙沙星、氧氟沙星敏感性較高，對紅霉素、氨芐西林、阿莫西林、慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、多西環素、磺胺噁唑、林可霉素、青霉素耐藥。

2.5 相關病毒分子生物學檢測

相關病毒分子生物學檢測結果顯示，病料中檢測出PRRSVORF6 224 bp特異性條帶，測序結果與預期相符。未見CSFV、PRV、PCV2、JEV特異性條帶檢出（圖6）。

3 結論與討論

隨著集約化和規模化養殖的發展，豬的疫病混合感染感染現象增多。豬沙門氏菌與其他豬疫病混合感染的病例經常被報道[9-10]。因此應根據臨床癥狀以及實驗室診斷結果及時進行確診，避免誤診而延誤治療時機并影響治療效果，給生產者造成不必要的經濟損失 [11]。

綜合分析該豬場出現的疫病，提出以下建議：首先對病死豬及污染物進行無害化處理，隔離病豬，對飼養用具、豬舍、飼養用水進行嚴格消毒;病豬治療時選擇使用經過藥敏試驗確定的有效抗生素，比如頭孢曲松、環丙沙星、氧氟沙星，當發生嚴重脫水時，還要采取對癥治療，即使用止瀉劑和補液等;對其健康豬進行疫苗接種，做好防疫工作。

參 考 文 獻：

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