高效液相色譜法測定查干湯中異土木香內酯的含量

張欣，李強 ，陳媛媛，那松巴乙拉，寶山

(1 包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內蒙古 包頭；2 內蒙古自治區國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特)

0 引言

查干湯是由土木香、苦參、接骨木、山柰（4 ∶4 ∶2 ∶1）四味藥組成的蒙藥制劑。臨床功效為促使熱病及疫熱成熟，平赫依、血相訌。主治未成熟熱，疫熱，空虛熱，寶日巴達干，赫依、血不調，血刺痛，感冒等,是蒙醫常用的藥品之一。本研究采用高效液相色譜法以異土木香內酯作為測定指標對藥品中的土木香建立了含量測定方法。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（日本島津），LC-10ATVP 泵，SPD-10AVP 檢測器，SCL-10AVP 色譜工作站，Sartorius ME5型電子天平，Mettler AE-100 電子分析天平，JD200-2 型電子天平,AS 5150A 超聲清洗儀。

甲醇為分析純和色譜純；其他試劑均為分析純。水為：離子交換高純水；對照品為中國藥品生物制品檢定所提供（批號：0761-9501）。

試藥查干湯（批 號：20200313、20200314、20200315）由內蒙古國際蒙醫醫院提供；陰性樣品為自制，土木香等蒙藥材由內蒙古國際蒙醫醫院提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性

采用DimonsiolC18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.04%的磷酸溶液（50 ∶50）為流動相進行流動相條件摸索，流速1.0 ml/min，柱溫30℃，進樣量10μl。異土木香內酯峰的理論塔板數均大于4000，與相鄰雜質峰的分離度均大于1.5[1]。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液的配制

對照品溶液的制備：取異土木香內酯對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml 含50μg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取分析樣品約（過4 號篩）0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理（功率500W，頻率 40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 采集波長的確定

二極管陣列檢測器顯示異土木香內酯對照品溶液在210 nm 的波長處有最大吸收，故選擇210 nm 作為其含量測定的檢測波長，后續方法學考察結果也表明在該波長下測定數據穩定、可靠，陰性對照無干擾[2,3]。典型色譜圖見圖1-圖3。

圖1 異土木香內酯對照品色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 陰性對照溶液色譜圖

2.4 標準曲線的繪制

取異土木香內酯對照品約3mg，精密稱定，定容在100ml 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5μl、10μl、15μl、20μl、25μl、30μl 進樣，按上述色譜條件分別測定，以峰面積為縱坐標，以濃度為橫坐標繪制標準曲線，得到線性回歸方程為：y=3.75687e-007x+0.0110287，R2=0.99998。結果表明，異土木香內酯在0.15365μg/ml-0.9219μg/ml 范圍內線性關系良好。

2.5 重復性試驗

稱取同一供試品(批號：20200313)6 份，按供試品溶液制備方法處理并測定異土木香內酯含量，6 份供試品異土木香內酯平均含量為4.892mg/g，RSD 為0.67%，表明方法重復性良好。

2.6 穩定性考察

取同一份供試品溶液(批號：20200313)，過濾后室溫放置，分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h 后進行色譜測定，記錄峰面積，不同時間測定的峰面積RSD 為0.54%（n=6），試驗結果表明供試品溶液中異土木香內酯含量在24h 內基本穩定不變[4]。

2.7 回收率實驗

分別取供試品（批號：20200313 含量：4.894mg/g）6份，每份約0.15g，精密稱定，分別置100ml 錐形瓶中，依次精密加入甲醇24ml；稱取異土木香內酯對照品8.15mg，置10ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻[5]。精密量取1ml對照品溶液，置同一錐形瓶中，搖勻，分別按上述供試液制備方法和色譜條件測定每份含量，結果見表1。平均回收率(n=6)為100.34%，RSD=0.80%，表明該方法準確可靠。

表1 加樣回收試驗結果

3 樣品含量測定

取3 批樣品，分別按上述方法制備供試品溶液，并測定異土木香內酯含量。結果見表2。

表2 樣品中異土木香內酯的含量測定結果

4 討論

4.1 流動相的選擇

根據文獻流動相為乙腈-水（50 ∶50）進行條件摸索，結果拖尾現象嚴重，所以參照文獻[6]報導，流動相為乙腈-0.04%的磷酸溶液（50 ∶50），樣品分離效果較好，無拖尾現象，且陰性對照無干擾。結果：選用流動相為乙腈-0.04%的磷酸溶液（50 ∶50）。

4.2 提取溶劑的選擇

文獻[7]記載異土木香內酯不溶于水，溶于甲醇、乙醇、乙醚、苯和氯仿，微溶于石油醚。為排除過多雜質的干擾，并參照文獻[8]烏努日圖-3 項下土木香的含量測定方法，選擇甲醇作為提取溶劑。