TNIP1基因多態(tài)性rs17728338及負(fù)性情緒與尋常型銀屑病相關(guān)性研究

張 強(qiáng),陳彩霞,崔梓榆,韓建文,張 琰,黃永清

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)生工作部，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科；3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院康復(fù)科；4.內(nèi)蒙古精神衛(wèi)生中心）

銀屑病是一種慢性炎癥性復(fù)發(fā)性系統(tǒng)性疾病。近年來的多項(xiàng)研究表明，銀屑病的發(fā)生、復(fù)發(fā)和焦慮、抑郁等負(fù)性情緒相關(guān)，尤其是尋常型銀屑病[1，2]。許多報(bào)道稱，銀屑病的發(fā)生、復(fù)發(fā)和相關(guān)遺傳因子有關(guān)。NF-κB（nuclear factor-κB）是一種重要的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，連接著活化的T細(xì)胞和銀屑病相關(guān)分子的轉(zhuǎn)錄。目前已經(jīng)有研究報(bào)道，TNIP1基因在調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)方面發(fā)揮重要作用[3~5]。本研究就負(fù)性情緒（焦慮、抑郁）和遺傳因子（TNIP1基因多態(tài)性rs17728338）與尋常型銀屑病的相關(guān)性進(jìn)行探討。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

經(jīng)過臨床和病理確診的尋常型銀屑病患者345例，年齡39～76歲，平均年齡（58.12±9.57）歲，男性183例，女性162例，正常對(duì)照組341例，男性181例，女性160例，年齡和患者想當(dāng)，所選疾病均無系統(tǒng)性疾病。所有患者2周內(nèi)沒有使用過任何外用藥物，2個(gè)月內(nèi)未使用過維A酸、糖皮質(zhì)激素等藥物。

1.2 負(fù)性情緒評(píng)定

應(yīng)用焦慮自評(píng)量表（SAS），抑郁自評(píng)量表（SDS）對(duì)345例尋常型銀屑病患者和341例正常對(duì)照進(jìn)行評(píng)定，標(biāo)準(zhǔn)總分≥50分即認(rèn)定為患者具有負(fù)性情緒的癥狀。

1.3 主要試劑及設(shè)備

10%SDS（十二烷基磺酸鈉），0.5M EDTA（pH8.0），10mg/mL蛋白酶K（Merk公司），紅細(xì)胞裂解液，白細(xì)胞裂解液，瓊脂糖凝膠加樣緩沖液（6x），PCR儀Gene Amp PCR system 9600（Norwalk，CT.06859 USA），TU-1810型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）。

1.4 基因組DNA提取

采用鹽析法進(jìn)行人外周血基因組DNA提取。空腹抽取受試者靜脈血3mL，置于K2EDTA抗凝真空采血管，提取基因組DNA，并檢測(cè)純度和濃度。

1.5 引物及探針的合成

設(shè)計(jì)引物和LDR探針，應(yīng)用Primer3online（Version0.4.0，http://frodo.wi.mit.edu/）軟 件 和Oligo（Version 6.31，Molecular Biology Insights Inc.，USA），PCR引物序列（見表1、2）。

表1 PCR引物序列

表2 LDR探針序列

1.6 多重PCR擴(kuò)增

10mM Tris-HCl（pH7.4），2.0mM MgCl2，50mM KCl，0.5μM Primers，200mM dNTPs，1U polymerase。再加入2μL基因組DNA。

1.7 多重連接酶檢測(cè)反應(yīng)（LDR）

20mM Tris-HCl（pH 8.5），100mM KCl，5mM Mg-Cl2，0.2μM Probes，1mM NAD+，10mM DTT。加入2μL多重PCR的產(chǎn)物。

1.8 ABI3730測(cè)序儀檢測(cè)

分析判讀每個(gè)位點(diǎn)上，每個(gè)樣本的基因分型。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，等位基因及基因型頻率用卡方檢驗(yàn)（χ2），基因型分布用擬合優(yōu)度卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，所有檢驗(yàn)用SPSS 13.0和PLINK1.07[6]處理。

2 結(jié)果

2.1 尋常型銀屑病與對(duì)照組焦慮、抑郁的比較

尋常型銀屑病組焦慮發(fā)生率（44.9%）明顯高于對(duì)照組（7.3%），差異有顯著性（P=0.000），而且在尋常型銀屑病組的焦慮評(píng)分（SAS）分值（41.33±8.00）高于對(duì)照組（36.57±7.66），差異有顯著性（P=0.000）。尋常型銀屑病組抑郁的發(fā)生率（55.1%）明顯高于對(duì)照組（11.7%），差異有顯著性（P=0.000），尋常型銀屑病組的抑郁自評(píng)（SDS）分值（45.21±9.06）高于正常對(duì)照組（29.08±10.36）（見表3、4）。

表3 尋常型銀屑病與對(duì)照組焦慮、抑郁的比較

表4 尋常型銀屑病組和對(duì)照組SAS、SDS評(píng)分的比較

2.2 尋常型銀屑病組和對(duì)照組中TNIP1基因多態(tài)位點(diǎn)rs17728338：G>A基因型分布情況

TNIP1基因多態(tài)位點(diǎn)rs17728338在尋常型銀屑病組和對(duì)照組之間的基因型分布差異有顯著性（P<0.01），尋常型銀屑病組A等位基因頻率（15.22%）顯著高于對(duì)照組（8.06%）（P=0.000）（見表5）。

表5 尋常型銀屑病組和對(duì)照組中TNIP1基因多態(tài)位點(diǎn)rs17728338：G>A基因型分布情況

2.3 焦慮、抑郁、TNIP1基因交互作用和尋常型銀屑病相關(guān)性

2.3.1TNIP1基因多態(tài)位點(diǎn)rs17728338基因型及等位基因頻率在銀屑病伴/不伴焦慮癥狀組患者的分布 基因型AG和A等位基因頻率在尋常型銀屑病伴焦慮組和不伴焦慮組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。基因型AG和A等位基因頻率在尋常型銀屑病伴焦慮組高于不伴焦慮組（見表6）。

表6 TNIP1基因多態(tài)位點(diǎn)rs17728338基因型及等位基因頻率在銀屑病伴/不伴焦慮癥狀組患者的分布

2.3.2TNIP1基因多態(tài)位點(diǎn)rs17728338基因型及等位基因頻率在銀屑病伴/不伴抑郁癥狀組患者的分布 基因型AG和A等位基因頻率在尋常型銀屑病伴抑郁組和不伴抑郁組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。基因型AG和A等位基因頻率在尋常型銀屑病伴抑郁組高于不伴抑郁組（見表7）。

表7 TNIP1基因多態(tài)位點(diǎn)rs17728338基因型及等位基因頻率在銀屑病伴/不伴抑郁癥狀組患者的分布

3 討論

既往研究顯示焦慮、抑郁等負(fù)性情緒參與多種慢性病的發(fā)生發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)在尋常型銀屑病患者中的負(fù)性情緒（焦慮、抑郁）的發(fā)生率，以及SAS和SDS評(píng)分顯著高于健康對(duì)照組，與既往相關(guān)研究結(jié)果一致。可能是由于緊張、焦慮、抑郁等心理因素可促進(jìn)P物質(zhì)釋放，從而剌激細(xì)胞增殖和角質(zhì)形成，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)異常，加重和誘發(fā)銀屑病[7，8]。TNIP1基因多態(tài)性與尋常型銀屑病的相關(guān)性在中國人群和歐洲人群均有報(bào)道[9~11]。本研究在進(jìn)一步的基因分型實(shí)驗(yàn)中結(jié)果示TNIP1基因多態(tài)位點(diǎn)rs17728338在尋常型銀屑病組和對(duì)照組之間的基因型分布差異有顯著性，尋常型銀屑病組A等位基因頻率顯著高于對(duì)照組，與Nair和Sun等人的研究結(jié)果一致[9~11]提示TNIP1基因多態(tài)性與尋常型銀屑病具有相關(guān)性。在進(jìn)一步的分層分析發(fā)現(xiàn)rs17728338的基因型AG和A等位基因頻率和尋常型銀屑病伴焦慮呈正相關(guān)，基因型AG和A等位基因頻率和尋常型銀屑病伴抑郁呈正相關(guān)，這和聶鑫等人的研究相一致[12]。總之，本研究通過流行病學(xué)、基因分型研究，發(fā)現(xiàn)尋常型銀屑病患者中負(fù)性情緒（焦慮、抑郁）的發(fā)生率及評(píng)分均明顯增高；TNIP1基因多態(tài)性rs17728338與焦慮、抑郁可能存在交互作用進(jìn)而影響銀屑病的易感性，但關(guān)于基因多態(tài)性如何與負(fù)性情緒相互影響，如何影響基因功能和免疫系統(tǒng)，仍有待于進(jìn)一步研究。