血小板內(nèi)皮聚集受體1影響血小板功能和血栓形成的研究進(jìn)展

李占軍，冬 穎，周 佳，孫建軍

（1.內(nèi)蒙古化工職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010057；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 藥劑科）

血小板是巨核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)脫落而形成的無(wú)核血細(xì)胞，它在正常止血過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，同時(shí)也是促成血栓相關(guān)疾病的重要因素。隨著人們生活水平的不斷提高，動(dòng)脈粥樣硬化的臨床發(fā)病率逐年上升，患有這些疾病的患者表現(xiàn)出較強(qiáng)的血小板活性，導(dǎo)致脈管系統(tǒng)的血栓前狀態(tài)，增加心腦血管事件的復(fù)發(fā)率[1]。然而，血小板活性不僅僅能夠影響正常的血栓形成和止血，而且還能產(chǎn)生相應(yīng)的炎癥反應(yīng)，是動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)因素之一[2]，血小板通過(guò)活化、粘附、聚集、血小板相關(guān)因子釋放和凝血系統(tǒng)的激活等方式在動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成和發(fā)展的過(guò)程中起著重要作用[3]。

1 抗血小板藥物療效差異引發(fā)血小板基因多態(tài)性研究

目前，阿司匹林和氯吡格雷雙聯(lián)抗血小板治療方案已廣泛應(yīng)用于心、腦血管疾病的一級(jí)和二級(jí)預(yù)防，已被國(guó)內(nèi)外指南所推薦[4～6]。一項(xiàng)納入了13.5萬(wàn)患者，275項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)的大型薈萃分析顯示[7]，抗血小板藥物能顯著降低不良心血管事件的發(fā)生率。然而，在抗血小板藥物治療期間血小板聚集性顯示出較大的個(gè)體差異。部分患者不能從抗血小板藥物如阿司匹林和（或）氯吡格雷中獲得足夠的血小板抑制，出現(xiàn)治療中血小板高反應(yīng)性（high ontreatment platelet reactivity，HTPR），導(dǎo)致不良臨床缺血事件的發(fā)生，而另一部分患者對(duì)抗血小板藥物表現(xiàn)出過(guò)度響應(yīng)，出現(xiàn)治療中血小板低反應(yīng)性（low on-treatment platelet reactivity，LTPR），導(dǎo)致出血事件的發(fā)生[8]。基因組相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)血小板多個(gè)基因位點(diǎn)與心血管疾病易感性和血小板功能相關(guān)，血小板相關(guān)基因多態(tài)性與抗血小板藥物的療效有著密切的聯(lián)系，研究和發(fā)現(xiàn)其作用和機(jī)制可用于指導(dǎo)新的治療和診斷分析的發(fā)展。

2 PEAR1影響血小板功能的表達(dá)方式

血小板內(nèi)皮聚集受體1（platelet endothelial aggregation receptor-1，PEAR1）基因是近期發(fā)現(xiàn)的調(diào)控血小板功能的重要基因，PEAR1相關(guān)的基因多態(tài)性在多個(gè)獨(dú)立的研究中經(jīng)證實(shí)與血小板激動(dòng)劑的響應(yīng)有關(guān)[9]，與血小板功能及血栓性疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切的聯(lián)系。它在2005年被發(fā)現(xiàn)，是一種含有1034個(gè)氨基酸的跨膜蛋白，主要在巨核細(xì)胞、血小板和內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)。PEAR1包含胞外EMI結(jié)構(gòu)域（蛋白-蛋白相互作用區(qū)域），15個(gè)類(lèi)似表皮生長(zhǎng)因子的重復(fù)序列及胞質(zhì)內(nèi)多個(gè)酪氨酸和脯氨酸殘基組成[10]。在血小板聚集期間，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的酪氨酸磷酸化使PEAR1活化，來(lái)自相鄰血小板的免疫球蛋白E受體的α亞基（FcεR1α）蔟集PEAR1，也是一個(gè)啟動(dòng)PEAR1磷酸化的過(guò)程[11]。目前，PEAR1存在兩種活化方式，一種通過(guò)血小板-血小板相互接觸活化PEAR1，另一種則是PEAR1誘導(dǎo)Src依賴(lài)的受體磷酸化，磷酸二酰肌醇3-激酶（phosphatydilinositol 3-kinase，PI3K）p85亞基的活化及隨后的蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）的磷酸化，進(jìn)而加強(qiáng)纖維蛋白原受體（αIIbβ3）的活化，形成了穩(wěn)定的血小板聚集體[12]。PEAR1通過(guò)PI3K/PTEN通路負(fù)調(diào)控巨核細(xì)胞的增殖[13]，減弱PEAR1表達(dá)能增加內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和新生血管的生成[14]。

3 PEAR1影響血小板功能的研究進(jìn)展

3.1 PEAR1表達(dá)程度對(duì)血小板生成具密切影響的相關(guān)研究

Alexandre Kauskot等研究[12]探索健康人群血小板PEAR1的功能。研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)多種激動(dòng)劑誘導(dǎo)血小板聚集期間，PEAR1在細(xì)胞膜上表達(dá)和酪氨酸磷酸化增加。靜息態(tài)的血小板中，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)PEAR1尾部發(fā)現(xiàn)c-Src和Fyn復(fù)合物，當(dāng)它磷酸化時(shí)，磷酸化的PEAR1導(dǎo)致漸進(jìn)的PI3K和Akt持續(xù)的磷酸化，與p85 PI3K偶聯(lián)并逐漸位移到血小板細(xì)胞骨架上，整合素活化信號(hào)被放大，進(jìn)而形成穩(wěn)定的血小板聚集體，全部信號(hào)瀑布能被SFK抑制劑PP1和PI3K抑制劑LY294002所阻斷。同時(shí)，該團(tuán)隊(duì)[13]還研究了PEAR1在血小板形成過(guò)程中的作用。他們監(jiān)測(cè)和操控體外分化的人CD34+造血干細(xì)胞和在斑馬魚(yú)體內(nèi)PEAR1的表達(dá)情況。PEAR1基因低表達(dá)導(dǎo)致PTEN表達(dá)降低2倍，同時(shí)調(diào)控PI3K-Akt通路相關(guān)基因的表達(dá)。斑馬魚(yú)蛋白印跡結(jié)果揭示PEAR1的低表達(dá)提升了Akt的磷酸化水平，同時(shí)使PTEN的轉(zhuǎn)錄下調(diào)。研究提示在巨核細(xì)胞中減弱PEAR1的表達(dá)會(huì)促進(jìn)巨核細(xì)胞的增殖，間接增強(qiáng)了巨核細(xì)胞和血小板的生成。

3.2 影響PEAR1表達(dá)的信號(hào)通路研究

此外，Christophe等[15]發(fā)現(xiàn)硫酸葡聚糖能直接活化PEAR1引起濃度依賴(lài)的血小板聚集。阻斷PEAR1受體，選擇性Syk抑制劑能完全消除硫酸葡聚糖誘導(dǎo)的血小板聚集，并且用Pear1小鼠模型驗(yàn)證。結(jié)果表明硫酸葡聚糖誘導(dǎo)的血小板聚集通過(guò)Pear1/c-Src/PI3K/Akt和CLEC-2/Syk信 號(hào) 通 路 獨(dú) 立完成的。

同時(shí)，PEAR1基因在內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)。Christophe等研究[14]發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞中慢病毒敲弱PEAR1可增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，顯著刺激內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，反過(guò)來(lái)通過(guò)Akt/PTEN依賴(lài)的p21/CDC2信號(hào)通路增強(qiáng)體外基質(zhì)膠上管腔的形成，此實(shí)驗(yàn)用Pear1敲除小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ万?yàn)證。結(jié)果證實(shí)PEAR1基因在內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)對(duì)體內(nèi)、體外的血管生成有著負(fù)調(diào)控的關(guān)系。這些發(fā)現(xiàn)也說(shuō)明PEAR1是一種新型的血管生成的調(diào)節(jié)器。

信號(hào)酪氨酸激酶受體通過(guò)活性的促細(xì)胞分裂蛋白激酶（MAPKs）和PI3K/Akt這2個(gè)通路完成內(nèi)皮細(xì)胞增殖。Christophe等[14]發(fā)現(xiàn)PEAR1低表達(dá)不影響Erk1/2的磷酸化。同時(shí)Pear1敲除小鼠的肉芽腫組織的蛋白印跡分析結(jié)果表明Pear1正調(diào)控mCD31、mAkt-P和mCdc2，PEAR1主要通路（見(jiàn)圖1）。

圖1 PEAR1基因主要的信號(hào)通路Fig.1 The main signal pathway of PEAR1

3.3 PEAR1表達(dá)對(duì)血小板功能的影響存在爭(zhēng)議

多個(gè)全基因組關(guān)聯(lián)研究（Genome-Wide-Association-Studies，GWAS）發(fā)現(xiàn)在健康人群和心血管疾病患者人群PEAR1單核苷酸多態(tài)性（SNPs）能改變血小板聚集能力，這種變化與PEAR1表達(dá)有關(guān)[16～21]。這些研究結(jié)果表明PEAR1參與了血栓形成和血小板功能。但是，有些研究表明PEAR1基因多態(tài)性沒(méi)有影響血小板聚集性和臨床結(jié)局[23]。

阿司匹林被國(guó)內(nèi)外指南所推薦廣泛應(yīng)用于心肌梗死和卒中的一級(jí)和二級(jí)預(yù)防[4，5]，能有效的降低15%～20%的心血管事件的發(fā)生率[5]，同時(shí)，阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷的治療方案已經(jīng)成為急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）行經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入（percutaneous coronary intervention，PCI）抗血小板藥物治療的基石[4]。但在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)服用阿司匹林和氯吡格雷的患者仍出現(xiàn)復(fù)發(fā)的缺血事件，這主要由于藥物對(duì)血小板聚集的抑制不足所導(dǎo)致[8]，而這種對(duì)藥物的響應(yīng)多取決于基因的多態(tài)性。

一些研究報(bào)道了人群PEAR1基因與血栓栓塞性疾病存在一定的聯(lián)系。Juraj Sokol等研究[25]納入23例有流產(chǎn)史的粘性血小板綜合征的女性患者，42例健康女性作為對(duì)照組，評(píng)估PEAR1基因2個(gè)SNP（rs12041331，rs12566888）和GAS6基因4個(gè)SNPs（rs7400002，rs1803628，rs8191974，rs9550270）與粘性血小板綜合征的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)PEAR1基因2個(gè)SNPs（rs12041331，rs12566888）和GAS6基因1個(gè)SNP（rs9550270）在有流產(chǎn)史的粘性血小板綜合征的患者中有較高的發(fā)病率。而且發(fā)現(xiàn)PEAR1 c.-9-4663G＞T基因多態(tài)性的T等位基因?qū)μ河幸欢ǖ谋Ｗo(hù)作用。研究提示GAS6和PEAR1基因多態(tài)性可能與患有粘性血小板綜合征孕婦的流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。Yingyun Fu等的研究納入101例肺栓塞患者和匹配的132例健康人群，對(duì)其進(jìn)行PEAR1基因型檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PEAR1基因rs778026543突變組與健康對(duì)照組之間出現(xiàn)差異（P＜0.001），但在rs1952294和rs822442中沒(méi)有差異。

J.Enrique等[17]最早發(fā)現(xiàn)PEAR1基因在激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板聚集中起著重要的作用，PEAR1基因多態(tài)性與阿司匹林的抗血小板活性相關(guān)。隨后，多個(gè)研究表明PEAR1基因多態(tài)性與阿司匹林治療的療效相關(guān)[19]。JD Backman等[20]近期的研究發(fā)現(xiàn)PEAR1在血小板聚集性的影響可以通過(guò)治療劑量的阿司匹林改變，但不是劑量依賴(lài)性的。同時(shí)，還有研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷在冠心病患者行PCI術(shù)后的血小板功能與PEAR1基因多態(tài)性密切相關(guān)[16，21]。但是也有研究表明在冠心病和缺血性卒中患者服用阿司匹林期間，PEAR1基因多態(tài)性與阿司匹林抗血小板的療效不相關(guān)。

4 總結(jié)與思考

從PEAR1被發(fā)現(xiàn)為調(diào)控血小板功能的重要基因已十五年，全球?qū)W者對(duì)PEAR1表達(dá)與血小板功能的影響做了大量的驗(yàn)證性試驗(yàn)，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為減弱PEAR1的表達(dá)會(huì)使血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖等使得血栓形成的可能性增加。但也有部分學(xué)者的研究結(jié)果認(rèn)為PEAR1的表達(dá)沒(méi)有影響血小板的聚集，對(duì)抗血小板的治療結(jié)果沒(méi)有影響。因此仍然需要對(duì)PEAR1基因多態(tài)性與血小板功能的關(guān)系做更深入的研究，這類(lèi)結(jié)果對(duì)血栓性疾病的藥物治療將產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。