熒光染色（一步法）在皮膚性病常見疾病直接鏡檢中的應用效果分析

馬元龍，陳 旭，張金鎖，李 浩，高 娃，于希軍

（1.內蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院皮膚性病科，內蒙古 呼和浩特 010050；2.內蒙古醫(yī)科大學中醫(yī)學院）

我科真菌室常規(guī)的檢測疾病有手、足、體、股癬，甲真菌病，花斑癬，馬拉色菌毛囊炎，傳染性軟疣，痤瘡，疥瘡，念珠菌性龜頭炎，念珠菌性陰道炎，口腔念珠菌病。臨床醫(yī)生需要一種準確率高而且快速有效的檢驗手段來幫助臨床診療。20%KOH濕片法存在主觀性強、干擾因素比較多、容易漏檢、誤檢的情況；熒光染色法背景清晰，菌絲、孢子、毛囊螨（卵、幼蟲、若蟲、成蟲）、軟疣小體、疥螨（成蟲、幼蟲、若蟲、卵、卵殼、疥糞）藍白色熒光，并對兩種檢驗方法進行比較，現(xiàn)將結果總結報告如下：

1 資料及方法

1.1 一般資料

研究資料均來自皮膚性病科門診，收集時間為2018-06~2020-07。高度疑似真菌感染的患者有手癬316例，足癬366例，甲真菌病288例，體癬216例，頭癬166例，股癬184例，花斑癬124例，馬拉色菌毛囊炎164例，念珠菌性龜頭炎126例，念珠菌性陰道炎166例，口腔念珠菌病118例，痤瘡292例，傳染性軟疣120例，疥瘡156例，所有疾病患者取材同樣皮損的標本均一式兩份。

1.2 方法

（1）取材：用75%的酒精常規(guī)消毒需要取材的部位，手、足、體、股、花斑癬用鈍刀刮取或用無齒鑷子夾取邊緣新鮮的皮屑，頭癬用無齒鑷子夾取帶菌鞘的斷發(fā)及鱗屑；甲真菌病用鈍刀刮取或者用無齒鑷子夾取甲床下的碎屑；馬拉色菌毛囊炎用無齒鑷子夾取前胸及后背部毛囊性丘疹、膿丘皰疹種的一種皮損，痤瘡用無齒鑷子夾取丘疹、膿皰、白頭、黑頭粉刺中的一種皮損；疥瘡如發(fā)現(xiàn)隧道夾取或刮取隧道，無隧道刮取手縫處水皰，夾取身體部位的丘疹；傳染性軟疣夾取半球形丘疹。念珠菌性龜頭炎刮取龜頭及冠狀溝處的分泌物及紅色丘疹；口腔及陰道念珠菌用棉簽取其分泌物做檢查。所有同樣皮損的標本一式兩份；（2）染色：20%KOH濕片法：一份標本滴加一滴KOH溶液，蓋上蓋玻片，在酒精燈上稍微加熱一下，然后在普通光學顯微鏡下鏡檢，記錄鏡檢結果；熒光染色法：一份標本滴加一滴熒光染色液（江蘇萊芙時代生物科技有限公司生產）。染色5min，蓋上蓋玻片，吸取多余的染液置于熒光顯微鏡下觀察，以發(fā)現(xiàn)菌絲、孢子、毛囊螨（卵、幼蟲、若蟲、成蟲的其中之一）、疥螨（卵、幼蟲、若蟲、成蟲、卵殼、疥糞的其中之一）、軟疣小體為陽性。

1.3 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 26.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，兩種方法數(shù)據(jù)均采用χ2檢驗分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

11種真菌感染性疾病以及痤瘡、傳染性軟疣、疥瘡用熒光染色法于KOH濕片法檢出真菌毛囊螨、疥螨、軟疣小體陽性率的比較（見表1、2）。

表1 11種真菌感染性疾病在兩種檢測方法中真菌陽性率的比較

11種真菌感染性疾病在熒光染色法及KOH濕片法中真菌檢出陽性率進行比較，每一種病熒光染色法真菌檢出陽性率明顯高于KOH濕片法，特別是甲真菌病、馬拉色菌毛囊炎用熒光染色法檢出的陽性率明顯高于KOH濕片法（χ2=18.205，P＜0.05；χ2=112.021，P＜0.05）有顯著性差異（見表1）。

毛囊螨、馬拉色菌、疥螨用熒光染色法及KOH濕片法檢出陽性率比較。熒光染色法明顯高于KOH濕 片 法（χ2=19.360，P＜0.05；χ2=38.835，P＜0.05；χ2=10.386，P＜0.05）；只有軟疣小體用熒光染色法及KOH濕片法檢出陽性率無明顯的差異（χ2=0.091，P＞0.05），痤瘡檢出的馬拉色菌包括線狀菌絲團及群集性孢子（見表2）。

表2 痤瘡、傳染性軟疣、疥瘡患者中兩種檢測方法中陽性率的比較

3 討論

KOH濕片法是皮膚科真菌檢查使用的一種最古老、最初始的直接鏡檢法，操作容易、方法簡單，只需要一臺普通顯微鏡即可。這種檢測方法缺點明顯，如背景較為混亂，陽性率低，特別在真菌檢驗的標本上[1～6]，而且孢子類結構容易和脂滴、氣泡混淆，導致誤診[6]。熒光染色法中具有特殊的熒光素，可以特異性結合真菌細胞壁上的幾丁質，且具有較高的親和力，只要十幾秒的時間可完成反應，因此檢測靈敏度高，反應也較快[7]。從我們對2228例高度疑似淺部真菌病用熒光染色法及KOH濕片法結果的比較看，熒光染色法真菌檢出的陽性率明顯高于KOH濕片法，特別是熒光染色法更易辨認孢子，在疑難標本中提高了馬拉色菌毛囊炎、痤瘡內的馬拉色菌、念珠菌性甲真菌病的檢測。從我們用熒光染色法對164例馬拉色菌毛囊炎及292例痤瘡內馬拉色菌檢出的陽性率看，熒光染色法檢出的陽性例數(shù)分別為145例占88.41%；156例占53.42%，而KOH濕片法檢出的陽性例數(shù)為51例占31.09%；82例占28.08，二者有顯著性差異。288例甲真菌病熒光染色法檢出真菌的陽性例數(shù)為200例，占75.71%；KOH濕片法檢出的陽性例數(shù)為138例占47.91%，兩種檢測方法檢出真菌的陽性率有顯著性差異，我們還對292例痤瘡，156例疥瘡用熒光染色法及KOH濕片法檢出毛囊螨、疥螨的陽性率看，熒光染色法明顯高于KOH濕片法。熒光染色法更易發(fā)現(xiàn)毛囊螨的卵及疥螨的卵殼、疥糞等。毛囊螨的卵在熒光染色法下可見呈蘑菇狀，自前端向后逐漸增寬至卵體中部最寬，呈現(xiàn)亮藍白色熒光，疥糞在熒光染色法下發(fā)藍綠色熒光，呈長圓形而稍扁。疥螨的卵殼在寄生蟲雜志已有報告，發(fā)現(xiàn)4種卵殼，其中有一種卵殼形態(tài)特殊，如同沿卵的長軸2/3處用刀子切開一樣可見卵殼的裂縫，裂縫出形成“V”字開口[8]。用熒光染色法檢出的卵殼更清晰、更明亮、更能觀察卵殼的形態(tài)。所以，熒光染色法與KOH法比較，初學者易于掌握，能快速出報告，準確率高，值得皮膚科直接鏡檢檢查中推廣使用。