HER2、G-17與胃蛋白酶原C在胃癌中的表達及臨床意義*

李 洪,馮雪晶,秦 維,莊恢勇

瓊海市人民醫院檢驗科，海南瓊海 222000

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，發病率高，早期臨床癥狀特異度不高，多數患者首次就診時，病情已發展至晚期，死亡風險大[1]。尋找胃癌早期診斷及有效治療的新方法，是目前研究的重點。隨著臨床對胃癌不斷深入的研究及生物科學技術的不斷發展，胃癌被證實是一種基因疾病，表皮生長因子受體2(HER2)、胃泌素-17(G-17)、胃蛋白酶原C等逐漸被應用于胃癌相關研究[2-3]。本研究旨在檢測胃癌組織內HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽性表達率，并分析其與患者臨床病理特征間的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取瓊海市人民醫院2018年1月31日至2019年12月31日收治的89例胃癌患者和同期選取30例經胃鏡活檢、病理檢查證實胃黏膜組織正常(正常胃黏膜組)患者作為研究對象，并將89例胃癌患者的胃癌組織作為胃癌組，其胃癌旁組織作為癌旁組。納入標準：(1)符合《胃癌規范化診療指南》[4]中對胃癌的診斷標準；(2)患者病歷資料、病理資料完整；(3)患者意識清楚，符合手術適應證。排除標準：(1)體質過敏或凝血功能障礙；(2)合并嚴重基礎疾病或惡液質；(3)合并全身嚴重感染；(4)既往上腹部手術及手術史行放療、化療及藥物治療、合并其他惡性腫瘤。

1.2儀器與試劑 石蠟自動連續切片機(德國生產)、臺式高速離心機(TGL-16型)、SZ-93自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮)、光學顯微鏡Olympus(日本)、西門子冰箱(德國)、電熱恒溫干燥箱(上海森信)。兔抗人HER2單克隆抗體(北京中杉生物技術有限公司)；胃泌素抗體(福州邁新公司)；兔抗人胃蛋白酶原C多克隆抗體(上?；顦飞锛夹g有限公司)；免疫組化SABC試劑盒(武漢博士德生物技術有限公司)；二氨基聯苯胺(DAB)顯色液、磷酸鹽緩沖液(PBS)、蘇木精等均購自北京中杉生物技術有限公司。

1.3方法 (1)石蠟切片：取存檔蠟片，4 μm連續切片后置于60 ℃恒溫箱中烤2 h，取出后室溫下冷卻。(2)采用免疫組織化學法檢測石蠟切片HR2、G-17及胃蛋白酶原C陽性表達率。使用PBS代替一抗，作為空白對照。具體步驟：先將石蠟切片脫蠟，PBS沖洗3次，用封閉液封閉后滴加一抗工作液 37 ℃孵育6 min，PBS沖洗，滴加試劑1、2，再次PBS液沖洗，加DAB顯色，再用蘇木素復染，最后用自來水充分沖洗，復染，梯度乙醇脫水，封片。

1.4結果判定 (1)染色強度根據5個觀察視野中陽性顆粒數量分為4個等級(Sulzers分級法)，無陽性顆粒記為0分，弱陽性顆粒記為1分，陽性顆粒記為2分，強陽性顆粒記為3分，最后求出染色強度評分平均值；(2)觀察5個高倍視野，計算100個細胞中陽性百分率，按照陽性細胞計數分為4級，分別為無陽性細胞記0分，陽性細胞數≤25%記1分，陽性細胞數>25%～50%記2分，陽性細胞數>50%記3分，最后求出陽性細胞計數評分平均值。免疫組織化學標本判定標準為染色強度×陽性細胞計數，乘積為0～<1分視為陰性，乘積≥1分視為陽性[5]。

1.5觀察指標 (1)觀察正常胃黏膜組、癌旁組及胃癌組HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽性表達率；(2)胃癌組不同臨床病理特征間HER2、G-17、胃蛋白酶原C表達率比較。

1.6統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件處理數據。計數資料用例數表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率檢驗，對1<理論頻數<5的4個表計數資料進行連續矯正χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1各組HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽性表達率比較 正常胃黏膜組、癌旁組及胃癌組HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)；正常胃黏膜組及癌旁組HER2陽性表達率均顯著低于胃癌組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽性表達率比較[n(%)]

2.2胃癌組不同臨床病理特征間HER2、G-17、胃蛋白酶原C表達率比較 胃癌組不同Lauren分型、分化程度、淋巴轉移患者間HER2陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。胃癌組不同分化程度、淋巴轉移、TNM分期患者間G-17陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。胃癌組不同分化程度、淋巴轉移、TNM分期患者間胃蛋白酶原C陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌組不同臨床病理特征間HER2、G-17、胃蛋白酶原C表達率比較[n(%)]

3 討 論

HER2是表皮生長因子受體家族中的一員，具有促進細胞分化、抑制細胞凋亡的功效[6]。通常情況下，HER2主要表達于胚胎時期，成年后HER2一般不表達，但在某些不良因素的刺激下，HER2構象及表達失控，處于激活狀態，并具備惡性轉化活性，可通過某些特殊通路，誘導鏈式反應，促進腫瘤細胞的生長、增殖、黏附及轉移，參與惡性腫瘤的發生與發展[7]。黎美仁等[8]研究發現，膀胱尿路上皮癌組織內HER2陽性表達量明顯高于膀胱炎及低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤組織，且HER2陽性表達量還與上皮癌患者腫瘤直徑、基層浸潤、復發等臨床因素相關，提示HER2參與上皮癌的發生與發展。梁宇等[9]研究提示HER2基因突變可能與肺癌患病年輕化有關。劉雅坤等[10]研究發現，HER2在上皮性卵巢癌中呈高度表達，且其表達量與腫瘤分期、細胞分化程度、淋巴結轉移狀況等病理特征相關。

本研究結果顯示，正常胃黏膜組及癌旁組HER2陽性表達率均顯著低于胃癌組，差異有統計學意義(P<0.05)；胃癌組不同Lauren分型、分化程度、淋巴轉移患者間HER2陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)，提示胃癌組患者胃癌組織中HER2陽性表達率異常升高。姜雷等[11]研究報道與本文研究結果相似。

G-17是一種重要的胃腸道肽類激素，主要生理功能是促進黏膜上皮細胞生長，幫助受損胃黏膜修復并參與胃黏膜炎性反應[12]。有研究明確指出，胃泌素可通過加速細胞增殖與分化、抑制腫瘤細胞凋亡、協同環氧化酶-2促癌等形式參與胃黏膜癌變[13]。本文研究發現，胃癌組不同分化程度、淋巴轉移、TNM分期患者間G-17陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。

胃蛋白酶原C是具有消化功能的內切酶，是胃蛋白酶的前體，胃蛋白酶原C廣泛分布于胃及近端十二指腸，是胃黏膜細胞分化的終末產物，胃蛋白酶原C變化能反映胃分泌功能及分化程度[14]。本研究結果顯示，正常胃黏膜組胃蛋白酶原C陽性表達率為100.0%，癌旁組胃蛋白酶原C陽性表達率為44.9%，而胃癌組胃蛋白酶原C陽性表達率為18.0%。這與胃癌組織內多半有黏膜萎縮，大量細胞的功能被破壞，胃黏膜分泌功能下降，且組織內惡性轉化的細胞存在分化障礙，致使胚胎細胞內的胃蛋白酶原C基因突變，最終導致胃黏膜細胞終末分化產物胃蛋白酶原C陽性表達率降低有關[15]。此外，本研究還發現，胃癌組不同分化程度、淋巴轉移、TNM分期患者間胃蛋白酶原C陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。

綜上所述，胃癌患者HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽性表達率可作為胃癌篩查指標，為胃癌的早診斷、早治療提供可靠的臨床依據。