張興業,田博,郭少春,賀延莉
空軍軍醫大學唐都醫院1神經外科,2放射科,西安 710038
prospero同源框1(prospero homeobox 1,PROX1)是Prospero基因相關的轉錄因子,屬于同源盒轉錄因子中的一員,在哺乳動物各器官包括中樞神經系統的發展中起著至關重要的作用。它通過不同的轉錄調控方式控制細胞的增殖和分化,具有致癌或抑癌功能。研究發現,PROX1可調控食管癌、口腔癌、小細胞肺癌和肝癌等多種腫瘤的發展。早期研究顯示,PROX1在膠質瘤細胞株中表達,且其表達與膠質瘤病理分級呈正相關。然而PROX1在膠質瘤細胞中的作用尚不清楚。本研究旨在探討PROX1對膠質瘤細胞生物學功能的影響,現報道如下。
正常人膠質細胞系HEB購自中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院;人膠質細胞瘤細胞(glioblastoma,GBM)系 A172(GBM,Ⅳ級)、U87MG(GBM,Ⅳ級)、U-118MG(GBM,Ⅳ級)、SHG-44(GBM,Ⅳ級)和U251(GBM,Ⅳ級)均購自中科院細胞庫。DMEM培養基購自美國Hyclone公司;胎牛血清購自美國Gibco公司;Trizol試劑盒和Lipofectamine?2000轉染試劑均購自美國Invitrogen公司;噻唑藍(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)購自美國Sigma公司;Transwell小室購自美國R&D公司;聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)試劑盒購自日本TaKaRa公司。PROX1引物、GAPDH引物均由中國上海生工生物工程有限公司合成;兔抗人E-鈣黏蛋白(E-cadherin)抗體、N-鈣黏蛋白(N-cadherin)抗體、波形蛋白(Vimentin)抗體、β-肌動蛋白(β-actin)抗體和辣根過氧化物酶標記的羊抗兔二抗均購自美國Abcam公司;PROX1 siRNA、scramble siRNA均購自美國Santa Cruz公司。
細胞于含10%胎牛血清的DMEM培養基中,置于37℃、5% CO細胞培養箱中培養,待細胞生長至80%融合時進行傳代。
將細胞接種于6孔板,待融合率達80%,將細胞分為對照組、scrambled siRNA組和PROX1 siRNA組。PROX1 siRNA組用Lipofectamine?2000將PROX1 siRNA轉染細胞,scrambled siRNA組轉染scrambled siRNA,作為陰性對照。……