prospero同源框 1下調對人膠質瘤細胞增殖、侵襲的影響

張興業，田博，郭少春，賀延莉

空軍軍醫大學唐都醫院1神經外科，2放射科，西安 710038

prospero同源框1（prospero homeobox 1，PROX1）是Prospero基因相關的轉錄因子，屬于同源盒轉錄因子中的一員，在哺乳動物各器官包括中樞神經系統的發展中起著至關重要的作用。它通過不同的轉錄調控方式控制細胞的增殖和分化，具有致癌或抑癌功能。研究發現，PROX1可調控食管癌、口腔癌、小細胞肺癌和肝癌等多種腫瘤的發展。早期研究顯示，PROX1在膠質瘤細胞株中表達，且其表達與膠質瘤病理分級呈正相關。然而PROX1在膠質瘤細胞中的作用尚不清楚。本研究旨在探討PROX1對膠質瘤細胞生物學功能的影響，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 細胞與材料

正常人膠質細胞系HEB購自中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院；人膠質細胞瘤細胞（glioblastoma，GBM）系 A172（GBM，Ⅳ級）、U87MG（GBM，Ⅳ級）、U-118MG（GBM，Ⅳ級）、SHG-44（GBM，Ⅳ級）和U251（GBM，Ⅳ級）均購自中科院細胞庫。DMEM培養基購自美國Hyclone公司；胎牛血清購自美國Gibco公司；Trizol試劑盒和Lipofectamine?2000轉染試劑均購自美國Invitrogen公司；噻唑藍（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）購自美國Sigma公司；Transwell小室購自美國R&D公司；聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒購自日本TaKaRa公司。PROX1引物、GAPDH引物均由中國上海生工生物工程有限公司合成；兔抗人E-鈣黏蛋白（E-cadherin）抗體、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）抗體、波形蛋白（Vimentin）抗體、β-肌動蛋白（β-actin）抗體和辣根過氧化物酶標記的羊抗兔二抗均購自美國Abcam公司；PROX1 siRNA、scramble siRNA均購自美國Santa Cruz公司。

1.2 細胞培養

細胞于含10%胎牛血清的DMEM培養基中，置于37℃、5% CO細胞培養箱中培養，待細胞生長至80%融合時進行傳代。

1.3 轉染及分組

將細胞接種于6孔板，待融合率達80%，將細胞分為對照組、scrambled siRNA組和PROX1 siRNA組。PROX1 siRNA組用Lipofectamine?2000將PROX1 siRNA轉染細胞，scrambled siRNA組轉染scrambled siRNA，作為陰性對照。……