prospero同源框 1下調(diào)對人膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲的影響

張興業(yè)，田博，郭少春，賀延莉

空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院1神經(jīng)外科，2放射科，西安 710038

prospero同源框1（prospero homeobox 1，PROX1）是Prospero基因相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，屬于同源盒轉(zhuǎn)錄因子中的一員，在哺乳動物各器官包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。它通過不同的轉(zhuǎn)錄調(diào)控方式控制細(xì)胞的增殖和分化，具有致癌或抑癌功能。研究發(fā)現(xiàn)，PROX1可調(diào)控食管癌、口腔癌、小細(xì)胞肺癌和肝癌等多種腫瘤的發(fā)展。早期研究顯示，PROX1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中表達(dá)，且其表達(dá)與膠質(zhì)瘤病理分級呈正相關(guān)。然而PROX1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的作用尚不清楚。本研究旨在探討PROX1對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞與材料

正常人膠質(zhì)細(xì)胞系HEB購自中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院；人膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞（glioblastoma，GBM）系 A172（GBM，Ⅳ級）、U87MG（GBM，Ⅳ級）、U-118MG（GBM，Ⅳ級）、SHG-44（GBM，Ⅳ級）和U251（GBM，Ⅳ級）均購自中科院細(xì)胞庫。DMEM培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司；胎牛血清購自美國Gibco公司；Trizol試劑盒和Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染試劑均購自美國Invitrogen公司；噻唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）購自美國Sigma公司；Transwell小室購自美國R&D公司；聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒購自日本TaKaRa公司。PROX1引物、GAPDH引物均由中國上海生工生物工程有限公司合成；兔抗人E-鈣黏蛋白（E-cadherin）抗體、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）抗體、波形蛋白（Vimentin）抗體、β-肌動蛋白（β-actin）抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗均購自美國Abcam公司；PROX1 siRNA、scramble siRNA均購自美國Santa Cruz公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞生長至80%融合時進(jìn)行傳代。

1.3 轉(zhuǎn)染及分組

將細(xì)胞接種于6孔板，待融合率達(dá)80%，將細(xì)胞分為對照組、scrambled siRNA組和PROX1 siRNA組。PROX1 siRNA組用Lipofectamine?2000將PROX1 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，scrambled siRNA組轉(zhuǎn)染scrambled siRNA，作為陰性對照。……