張興業(yè),田博,郭少春,賀延莉
空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院1神經(jīng)外科,2放射科,西安 710038
prospero同源框1(prospero homeobox 1,PROX1)是Prospero基因相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,屬于同源盒轉(zhuǎn)錄因子中的一員,在哺乳動物各器官包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。它通過不同的轉(zhuǎn)錄調(diào)控方式控制細(xì)胞的增殖和分化,具有致癌或抑癌功能。研究發(fā)現(xiàn),PROX1可調(diào)控食管癌、口腔癌、小細(xì)胞肺癌和肝癌等多種腫瘤的發(fā)展。早期研究顯示,PROX1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中表達(dá),且其表達(dá)與膠質(zhì)瘤病理分級呈正相關(guān)。然而PROX1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的作用尚不清楚。本研究旨在探討PROX1對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,現(xiàn)報道如下。
正常人膠質(zhì)細(xì)胞系HEB購自中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院;人膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞(glioblastoma,GBM)系 A172(GBM,Ⅳ級)、U87MG(GBM,Ⅳ級)、U-118MG(GBM,Ⅳ級)、SHG-44(GBM,Ⅳ級)和U251(GBM,Ⅳ級)均購自中科院細(xì)胞庫。DMEM培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司;胎牛血清購自美國Gibco公司;Trizol試劑盒和Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染試劑均購自美國Invitrogen公司;噻唑藍(lán)(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)購自美國Sigma公司;Transwell小室購自美國R&D公司;聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)試劑盒購自日本TaKaRa公司。PROX1引物、GAPDH引物均由中國上海生工生物工程有限公司合成;兔抗人E-鈣黏蛋白(E-cadherin)抗體、N-鈣黏蛋白(N-cadherin)抗體、波形蛋白(Vimentin)抗體、β-肌動蛋白(β-actin)抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗均購自美國Abcam公司;PROX1 siRNA、scramble siRNA均購自美國Santa Cruz公司。
細(xì)胞于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,置于37℃、5% CO細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待細(xì)胞生長至80%融合時進(jìn)行傳代。
將細(xì)胞接種于6孔板,待融合率達(dá)80%,將細(xì)胞分為對照組、scrambled siRNA組和PROX1 siRNA組。PROX1 siRNA組用Lipofectamine?2000將PROX1 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞,scrambled siRNA組轉(zhuǎn)染scrambled siRNA,作為陰性對照。……