川芎嗪對(duì)人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞的影響及作用機(jī)制研究

王會(huì)含，王永堂，苗建華，李鳳新

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院，河南 鄭州 450007)

骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis，OA)多發(fā)于老年人，臨床主要病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨退變和關(guān)節(jié)邊緣骨質(zhì)增生[1-2]。隨著人們預(yù)期壽命的延長(zhǎng)，OA的發(fā)病率逐年上升，而其發(fā)病機(jī)制目前尚未明確。研究發(fā)現(xiàn)，軟骨細(xì)胞凋亡在OA的發(fā)生過程中起重要作用，阻止或減緩軟骨細(xì)胞凋亡是防治OA的關(guān)鍵[3-4]。近年來，臨床多采用以活血和補(bǔ)肝益腎為主的中藥防治OA，川芎是常用藥物之一[5-6]。川芎嗪是從川芎中分離的一種生物堿，朱海泉等[7]研究表明其能夠有效預(yù)防OA。為了探索川芎嗪對(duì)OA軟骨細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制，我們開展了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料膝關(guān)節(jié)軟骨組織來自在鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院接受膝關(guān)節(jié)置換的患者。試驗(yàn)方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑Hank’s平衡鹽溶液(Hank’s balanced salt solution，HBSS)購自武漢益普生物科技有限公司，Ⅱ型膠原酶、多聚甲醛溶液、二甲亞砜(美國(guó)Sigma公司)，DMEM培養(yǎng)基(美國(guó)HyClone公司)，10%的胎牛血清、苯基甲磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF)購自北京孚博生物科技有限公司，甲苯胺藍(lán)(北京索萊寶科技有限公司)，鼠抗人Ⅱ型膠原蛋白一抗(美國(guó)Santa Cruz公司)，生物素標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)G二抗(美國(guó)Biotium公司)，腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)，川芎嗪(純度≥98%，成都德思特生物技術(shù)有限公司)，異硫氰酸熒光素標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V(annexin V-fluorescein isothiocyanate，Annexin V-FIIC)/碘化丙啶(propidium iodide，PI)雙染色試劑盒、Promega逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公……