長鏈非編碼RNA ZEB2-AS1作為骨肉瘤預后標志物的臨床意義研究

彭陟燚，王勝濤，殷 勇

(成都市郫都區人民醫院 骨科,四川 成都611730)

長鏈非編碼RNA(lncRNA)在調控分化、增殖和轉移等多種生物學過程中發揮著重要作用，并參與了腫瘤的發生發展[1-2]。鋅指E盒結合同源盒2反義RNA1(ZEB2-AS1)是一種在肝癌中新發現的lncRNA，已有研究證實，ZEB2-AS1參與了肺癌、膀胱癌和肝癌的進展[3]。本研究探討了ZEB2-AS1在骨肉瘤組織和正常骨組織中的表達情況，并分析了ZEB2-AS1在評估骨肉瘤預后中的可能性。

1 資料與方法

1.1 病人及組織樣本選擇2013年至2017年在成都市郫都區人民醫院手術的患者中收集相應的腫瘤組織和正常骨組織樣本。納入標準：(1)術后骨肉瘤組織均經病理證實；(2)術前未進行放療、化療及其他全身或局部治療；(3)臨床資料完整，且能完成隨訪，共納入58例患者。本研究通過醫院倫理委員會批準，所有患者均知情同意。

1.2 主要試劑和設備TRIzol試劑購自美國Invitrogen公司；PrimeScript RT Reagent Kit 逆轉錄試劑盒和SYBR Green 熒光染料購自日本TaKaRa公司；Roche LightCycler 480實時PCR系統購自美國Applied Biosystems公司。

1.3 qRT-PCR法檢測骨組織中的RNA水平TRIzol法提取總RNA，根據試劑盒說明書指導逆轉錄RNA合成cDNAs后進行PCR擴增。以GAPDH作為參照基因標準化ZEB2-AS1的表達水平。引物序列如下：ZEB2-AS1 前引物5′-AGGCAGGACCGTTATTCCTG-3′，后引物5′-ACACACCCTAATACACATGCCC-3′；GAPDH前引物5’-CGCTCTCTGCTCCTCCTGTTC-3’，后引物5’-ATCCGTTGACT-CCGACCTTCAC-3’。ZEB2-AS1的相對表達量用2-ΔΔCt法計算。

1.4 統計學分析采用軟件SPSS 17.0對數據進行分析，以均數±標準差或(n,%)表示。使用t檢驗和χ2檢驗分析兩組間差異，采用Kaplan-Meier法進行生存分析，Cox比例風險回歸模型確定獨立預后因素。

2 結果

2.1 ZEB2-AS1在人骨肉瘤組織中表達如圖1所示，與臨近的正常骨組織相比，ZEB2-AS1在骨肉瘤組織中明顯上調(P<0.01)。

圖1 ZEB2-AS1在人骨肉瘤組織和正常骨組織中的表達比較

2.2 ZEB2-AS1表達與骨肉瘤臨床病理特征的相關性基于ZEB2-AS1表達的中位數，將患者分為ZEB2-AS1高表達組(n=29)和ZEB2-AS1低表達組(n=29)。如表1所示，ZEB2-AS1表達水平與臨床分期(P=0.005)和肺轉移(P<0.001)顯著相關。

表1 ZEB2-AS1表達與骨肉瘤患者臨床資料比較

2.3 ZEB2-AS1高表達與骨肉瘤預后不良有關見表2、3。與ZEB2-AS1低表達組相比，ZEB2-AS1高表達的骨肉瘤患者無瘤生存時間(DFS)(表2)和總體生存時間(OS)較短(表3)。多因素分析表明ZEB2-AS1表達是骨肉瘤患者DFS(表2)和OS的獨立危險因素(表3)。

表2 影響骨肉瘤患者DFS的因素

表3 影響骨肉瘤患者OS的因素

3 討論

由于疾病進展迅速，骨肉瘤患者特別是中晚期的預后往往很差[4-5]。越來越多證據表明一些lncRNA有望在骨肉瘤的診斷和預后中發揮重要作用[6]。此外,一些lncRNA，如lncRNA MALAT1、lncRNA TUG1和lncRNA UCA1已被確定為骨肉瘤的獨立預后因素[7-9]。然而，大多數lncRNA在骨肉瘤中的作用仍不清楚。

ZEB2-AS1作為一種新發現的lncRNA，Gao和Zhang等人分別在胰腺癌和乳腺癌細胞中證實了ZEB2-AS1的促增殖、轉移、侵襲作用[10-11]；在急性髓系白血病中ZEB2-AS1 lncRNA的過表達與不良臨床預后相關，而且可引起化療抵抗[12]。本研究發現ZEB2-AS1在骨肉瘤組織中表達明顯高于正常的非骨肉瘤組織,統計分析結果表明，ZEB2-AS1表達水平與臨床分期及遠處轉移有顯著相關性。生存分析顯示，ZEB2-AS1高表達患者的OS和DFS較短。進一步的多因素分析證實ZEB2-AS1可能作為骨肉瘤患者的一個獨立預后生物標志物。