CD14 mRNA、SORL1 mRNA在AD病人中的表達及與認知功能的相關性

李漢穎，李漢宇，李增祥

阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)是一種神經系統退行性疾病，為全球范圍內繼心臟病、腫瘤、腦卒中后第4位死亡原因，輕度認知功能障礙(MCI)是介于正常老化和早期老年癡呆之間的一種臨床癥候群，調查顯示，每年10%～15%的MCI進展為AD[1-3]。因此，控制MCI轉化為AD，盡早檢出AD并給予早期干預成為臨床研究的重點。近年來研究發現，分揀蛋白受體1(SORL1)基因多態位點rs1133174與中國漢族遺忘型輕度認知損傷風險關系密切，而遺忘型輕度認知損傷被認為是AD的前期病變[4-5]。此外，AD病因復雜多樣，有研究指出CD14信號傳導通路及其基因多態性與AD的發生發展密切相關[6-7]。基于此，本研究綜合分析CD14mRNA、SORL1 mRNA在AD病人中的表達及與認知功能的關系，旨在為臨床診治AD提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取南陽市中醫院2017年8月—2019年8月AD病人62例作為AD組，MCI病人60例作為MCI組，所有入選病例均經我院倫理委員會審批通過。兩組合并癥、性別、文化程度、空腹血糖、年齡、總膽固醇、體重、吸煙史及飲酒史比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；AD組病人病程明顯長于MCI組，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 診斷標準 臨床前AD診斷標準：主要以生物標記物標準為框架分為3個階段，階段1為癥狀腦淀粉樣變性，階段2為淀粉樣蛋白陽性+突出功能失調和或早期神經變性的證據，階段3為淀粉樣蛋白陽性+神經元退化證據+輕微認知功能下降。AD所致輕度認知損害診斷標準：通過詢問病人病史及知情人確認，或醫生臨床觀察獲得認知功能下降信息；通過測評發現病人認知功能不在自身年齡及文化水平正常范圍內，但未達到癡呆水平；臨床醫生判定記憶功能或空間、語言等其他認知功能存在損害。AD所致癡呆診斷標準：主要通過醫生詢問病人病史及知情人確認，以及神經心理測驗判斷是否存在癡呆，同時配合淀粉樣蛋白等生物標志物進行診斷，但生物標志物并非必需[8]。MCI診斷標準：根據簡易智能精神狀態檢查量表(MMSE)評分，并結合病史及體格檢查由神經內科專業醫師進行診斷，MMSE評定包括定向力(10分)、即刻記憶力(3分)、注意力和計算力(5分)、短時回憶力(3分)、語言和視空間結構能力(9分)，總分0～30分，其中文盲者≤17分、小學文化者≤19分、初中以上者≤26分，即可診斷MCI，且MMSE總分越低認知功能越差[9-10]。

1.3 納入標準 ①AD組病人符合2011年美國國家衰老研究所和阿爾茨海默病協會(NIA-AA)提出的AD診斷標準，包括AD所致癡呆標準、AD所致輕度認知損害標準及臨床前AD標準；②MCI組符合MCI診斷標準；③無嚴重聽力、視力障礙；④影像學檢查無腦血管病變病灶；⑤病人及家屬知曉本研究并簽署知情同意書。

1.4 排除標準 ①合并血液系統疾病、惡性腫瘤、自身免疫性疾病、傳染性疾病、急慢性感染性疾病者；②長期服用抗精神病藥物者；③重要臟器功能嚴重障礙者；④血管性癡呆、帕金森、有腦外傷史、腦出血者等。

1.5 試驗方法及觀察指標

1.5.1 試驗方法 采集兩組病人入組當天外周血，由專業檢測師采用葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法分離外周靜脈血得到單個核細胞，應用RNA提取試劑盒(購自美國Applied Biosystem公司)提取單個核細胞RNA，采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應測定CD14mRNA、SORL1 mRNA表達量，均嚴格按照儀器說明書操作。采用公式2-△△ct計算CD14mRNA、SORL1 mRNA相對表達量。

1.5.2 觀察指標 ①兩組外周血單個核細胞內CD14mRNA、SORL1 mRNA表達量；②分析CD14mRNA、SORL1 mRNA鑒別診斷MCI與AD的價值；③分析CD14mRNA、SORL1 mRNA與認知功能的關系。

2 結 果

2.1 兩組CD14mRNA、SORL1 mRNA比較 AD組CD14mRNA表達量較MCI組高，SORL1 mRNA表達量較MCI組低，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組CD14 mRNA、SORL1 mRNA比較(±s)

2.2 AD和MCI鑒別診斷影響因素的Logistic回歸分析 以AD和MCI診斷為因變量，一般資料(病程、合并高血壓、合并糖尿病)及CD14mRNA、SORL1 mRNA為自變量進行Logistic逐步回歸分析，結果顯示，CD14mRNA、SORL1 mRNA是AD和MCI鑒別診斷的獨立影響因素。詳見表3。

表3 AD和MCI鑒別診斷影響因素的Logistic回歸分析

2.3 CD14mRNA、SORL1 mRNA對MCI與AD的鑒別診斷價值 ROC曲線分析顯示，SORL1 mRNA鑒別診斷MCI與AD的ROC曲線下面積(AUC)為0.807，大于CD14mRNA，當截斷值為0.30時，敏感度為87.10%，特異度為60.00%。二者聯合鑒別診斷的AUC為0.889，敏感度為75.81%，特異度為90.00%。詳見表4、圖1、圖2。

圖1 CD14 mRNA、SORL1 mRNA鑒別診斷價值的ROC曲線

圖2 CD14 mRNA聯合SORL1 mRNA鑒別診斷價值的ROC曲線

表4 CD14 mRNA、SORL1 mRNA對MCI與AD的鑒別診斷價值

2.4 兩組MMSE評分比較 AD組定向力、即刻記憶力、注意力和計算力、短時回憶力、語言和視空間結構能力評分及MMSE總分較MCI組低，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表5。

表5 兩組MMSE評分比較(±s) 單位：分

2.5 CD14mRNA與MMSE評分的相關性分析 Pearson相關性分析顯示，CD14mRNA與定向力、即刻記憶力、注意力和計算力、短時回憶能力評分及MMSE總分呈負相關(P<0.05)。詳見表6。

表6 CD14 mRNA與MMSE評分的相關性分析

2.6 SORL1 mRNA與MMSE評分的相關性分析 Pearson相關性分析，SORL1 mRNA與即刻記憶力、注意力和計算力、短時回憶能力、定向力評分及MMSE總分呈正相關(P<0.05)。詳見表7。

表7 SORL1 mRNA與認知功能的相關性分析

3 討 論

AD為常見癡呆類型，發病率占全部癡呆病人的60%～80%，且隨世界人口老齡化趨勢加快逐漸增加，嚴重影響老年人身心健康和生活質量[11-12]。AD具有發病隱匿的特點，早期診斷缺乏特異性指標[13-14]。若能找到一種診斷效能較高的指標，對病人的早期治療及預后改善具有重要意義。

AD的病因和發病機制復雜，目前尚未明確。近年來，CD14信號傳導通路及其基因多態性成為AD研究熱點之一[15-16]。病理研究表明，CD14的表達局限于大腦皮質的老年斑周圍，老年斑附近總是有CD14陽性小膠質細胞存在，且疏水區域CD14陽性細胞比致密核心斑塊周圍數量更多[17-18]。王玲玲[19]針對帕金森病人開展的一項研究指出，帕金森病病人外周血單核細胞CD14mRNA的表達顯著增加，且與反映帕金森疾病嚴重程度的H-Y分期呈正相關，可能參與帕金森病非運動癥狀的發生發展過程。本研究結果發現，AD組CD14mRNA表達量顯著高于MCI組，與銀建軍等[20]研究結果一致，且發現其是AD和MCI鑒別診斷的獨立影響因素，進一步證實CD14的基因表達參與AD的發生發展，其機制可能為AD病人激活小膠質細胞表面的CD14可促進細胞對β淀粉樣蛋白的攝取，同時能通過調節免疫應答改變腦內炎癥環境，從而增加AD發生風險，促進AD病理進程。SORL1為低密度脂蛋白家族成員，基因表達產物可與淀粉樣前體蛋白(APP)互相作用，參與APP裂解的關鍵環節，有報道顯示，SORL1基因突變是AD發生的危險因素，且能調節病人腦脊液中β淀粉樣蛋白42的水平變化，從而調節其誘導的神經炎癥，影響病人神經功能[21]。本研究發現，AD病人SORL1 mRNA表達明顯低于MCI病人，SORL1 mRNA是對AD和MCI病人進行鑒別診斷的獨立影響因素，表明其表達參與AD的發生發展。SORL1基因表達降低，可導致APP降解和β淀粉樣蛋白的產生增加，β淀粉樣蛋白為AD主要致病因素，從而提高AD發生風險，促進AD病情進展[22-23]。

本研究進一步采用ROC曲線分析CD14mRNA、SORL1 mRNA鑒別診斷MCI與AD的價值，發現二者聯合的AUC高達0.889，高于二者單獨鑒別診斷，敏感度為75.81%，特異度為90.00%，有助于提高AD的早期診斷效能。基于上述結論，認為通過抑制CD14mRNA表達、促進SORL1 mRNA表達，可能有助于預防老年MCI病人轉化為AD，或延緩AD病人病情進展。此外，本研究通過相關性分析發現，AD病人定向力、即刻記憶力、注意力和計算力、短時回憶能力、MMSE總分與CD14mRNA呈負相關，與SORL1 mRNA呈正相關，通過檢測CD14及SORL1基因表達情況，有助于臨床評估AD病人病情程度，指導治療方案的制定。

綜上所述，CD14及SORL1基因表達異常參與AD的發生發展，可作為鑒別診斷MCI與AD的重要標志物，同時與病人認知功能關系密切，有助于評估病人病情，指導針對性治療方案的制定，利于改善病人預后。