市售復(fù)方甘草含片與復(fù)方甘草片組分穩(wěn)定性比較研究

薄雙琴，劉雪楓，景明，朱英布，李宗民，王靜

1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅祁連山藥業(yè)股份有限公司，甘肅 酒泉 735000

復(fù)方甘草片收載于《中國藥典》，復(fù)方甘草含片為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，處方由甘草浸膏粉、阿片粉、樟腦、八角茴香油和苯甲酸鈉組成，各成分共同發(fā)揮了祛痰、鎮(zhèn)咳、消炎的作用［1］。復(fù)方甘草片的用法為吞服，這樣阿片粉中原本含量甚微的嗎啡經(jīng)胃腸吸收、肝臟代謝到達(dá)氣管、支氣管時(shí)所剩無幾，其他成分在咽部、喉部及氣管的濃度也相應(yīng)降低，藥效作用無法充分體現(xiàn)，導(dǎo)致臨床療效不理想［2］。而八角茴香油和樟腦易揮發(fā)，在制備、貯存過程中會造成損失，影響藥物的療效。復(fù)方甘草含片是將八角茴香油和樟腦制備成β-環(huán)糊精包合物，可減少其揮發(fā)損失，提高藥物穩(wěn)定性［3］。同時(shí)復(fù)方甘草含片通過薄膜包衣，既解決儲存過程中八角茴香油和樟腦的散失，又掩蓋了阿片等成分的不良?xì)馕?，改善了口感，提高了患者用藥的順?yīng)性，也克服了藥片吸潮變色等問題。筆者通過對復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片生產(chǎn)銷售和臨床應(yīng)用的調(diào)查，將市售的復(fù)方甘草含片與復(fù)方甘草片組分穩(wěn)定性進(jìn)行了比較研究，期望為復(fù)方甘草含片的臨床應(yīng)用和推廣提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

安捷倫1260 型高效液相色譜儀，Agilent Chem Station for LC Systems 色譜工作站（DAD 檢測器）；色譜柱CAPCELL PAK C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；BT25S 型電子天平；Secura125-1CN 電子天平。

甘草酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110731-201619，純度：93.0%）；嗎啡對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：171201-201324，純度：99.1%）；八角茴香油（江西百草藥業(yè)有限公司，批號：20180501，純度：90%）；樟腦（廣西梧州黃埔化工藥業(yè)有限公司，批號：YZ1806015，純度：97%）。

復(fù)方甘草含片（甘肅祁連山藥業(yè)股份有限公司，批號：1811068、1811069、1811070）；復(fù)方甘草片（甘肅莫高實(shí)業(yè)發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號：1903181、1903191、1903201）。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘草酸和嗎啡含量測定

2.1.1 復(fù)方甘草含片含量測定［4］藥品規(guī)格：每片含甘草浸膏粉112.5 mg、阿片粉4 mg、樟腦2 mg、八角茴香油2 mg、苯甲酸鈉2 mg，12 片×2 板/盒。含量：批號1811068、1811069、1811070 樣品甘草酸含量分別為6.81 mg/片、6.92 mg/片、6.86 mg/片，嗎啡含量分別為0.38 mg/片、0.39 mg/片、0.38 mg/片。

2.1.2 復(fù)方甘草片含量測定［5］藥品規(guī)格：每片含甘草浸膏粉112.5 mg、阿片粉4 mg、樟腦2 mg、八角茴香油2 mg、苯甲酸鈉2 mg，100 片/瓶。含量：批號1903181、1903191、1903201 樣品甘草酸含量分別為7.03 mg/片、6.97 mg/片、7.00 mg/片，嗎啡含量分別為0.39 mg/片、0.38 mg/片、0.38 mg/片。

2.2 八角茴香油含量測定［6］

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取八角茴香油適量，置10 mL 量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別稱取復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草含片各25 片的粉末，置于25 mL 具塞試管中，用20 mL95%乙醇作為溶劑，超聲處理（240 W，40 kHz）30 min，用95%乙醇定容至25 mL，放置過夜。次日離心10 min（3 000 r/min），精密吸取上層清液5 mL，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL 量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片的處方組分及輔料，分別按其樣品制備工藝制成八角茴香油陰性對照樣品，再按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液，在307 nm 波長處測定吸光度，陰性樣品無干擾，方法專屬性良好。

2.2.4 最大吸收波長的選擇 稱取八角茴香油對照品適量，用25 mL95%乙醇溶解，于紫外可見分光光度計(jì)200～800 nm 范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在307 nm 波長處有最大吸收。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取八角茴香油對照品溶液，在307 nm 連續(xù)測定6 次，記錄吸光度，RSD=1.12 %，方法精密度良好。

由3位MRI診斷醫(yī)師分析所有MRI圖像，結(jié)果不一致時(shí)經(jīng)討論達(dá)成一致，觀察患者增強(qiáng)MRI圖像特征，計(jì)算增強(qiáng)MRI在結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移診斷準(zhǔn)確率。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批的復(fù)方甘草含片樣品（批號1811068）及復(fù)方甘草片樣品（批號1903181）制備供試品溶液，分別于0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 測定，記錄吸光度，RSD 分別為1.54 %、1.38%，供試品溶液在5 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取同一批復(fù)方甘草含片（批號1811068）及復(fù)方甘草片（批號1903181）各6 份，分別制備供試品溶液，測定含量，RSD 分別為0.89%、0.93%，方法的重現(xiàn)性良好。

2.2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的復(fù)方甘草含片樣品（批號1811068）及復(fù)方甘草片樣品（批號1903181）各6 份，分別加入一定量的八角茴香油對照品，分別測定吸光度，計(jì)算回收率，平均回收率分別為97.08%、96.66%，RSD 分別為1.15%、1.09%。

2.2.9 樣品含量測定 依法制備復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片各三批樣品的供試品溶液，分別測定吸光度，計(jì)算八角茴香油含量，結(jié)果復(fù)方甘草含片三批樣品的含量分別為0.83 mg/片、0.91 mg/片、0.87 mg/片，復(fù)方甘草片三批樣品的含量分別為0.65 mg/片、0.63 mg/片、0.60 mg/片。

2.3 樟腦含量測定［7］

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 選擇CAPCELL PAK C18色譜柱（250 mm×4.60 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-乙腈∶水（15∶45∶40）；檢測彼長289 nm；流速1 mL/min；柱溫35 ℃。理論板數(shù)按樟腦峰計(jì)算應(yīng)不得低于3 000。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取樟腦對照品適量，置容量瓶中加甲醇制成每1 mL含200 μg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 分別稱取約為復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片各25 片的粉末，精密稱定，加入甲醇20 mL，超聲處理（240 W，40 kHz）10 min，放冷，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，將濾液移至50 mL 量瓶中，加甲醇定容，搖勻，依法測定。

2.3.4 陰性樣品溶液的制備 取復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片的處方組分及輔料，分別按其樣品制備工藝制成樟腦陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性樣品液，按上述色譜條件測定，陰性樣品沒有干擾，方法專屬性良好。

2.3.5 線性關(guān)系的考察 精密稱取樟腦對照品10 mg，置25 mL 容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL，按上述色譜條件測定，記錄色譜峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪標(biāo)準(zhǔn)曲線，障腦在40～400 μg/mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取樟腦對照品溶液10 μL，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜峰面積，RSD=1.06 %，方法精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批的復(fù)方甘草含片樣品（批號：1811068）及復(fù)方甘草片樣品（批號：1903181）制備供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h 進(jìn)樣測定，記錄色譜峰面積，RSD 分別為0.93 %、0.97%，供試品溶液在8 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 稱取同一批復(fù)方甘草含片樣品（批號1811068）及復(fù)方甘草片樣品（批號1903181）各6 份，分別制備供試品溶液，測定含量，RSD 分別為0.97%、1.01%，方法的重現(xiàn)性良好。

2.3.9 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的復(fù)方甘草含片樣品（批號1811068）及復(fù)方甘草片樣品（批號1903181）各6 份，分別加入一定量的樟腦對照品，依法測定，計(jì)算回收率，平均回收率分別為96.26%、97.07%，RSD 分別為1.03%、0.96%。

2.3.10 樣品含量測定 依法制備復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片各三批樣品的供試品溶液，測定樟腦含量，復(fù)方甘草含片三批樣品的含量分別為0.98 mg/片、1.02 mg/片、0.96 mg/片，復(fù)方甘草片三批樣品的含量分別為0.72 mg/片、0.78 mg/片、0.69 mg/片。

2.4 穩(wěn)定性考察［8］

2.4.1 影響因素試驗(yàn) 按照2020 版《中國藥典》9001原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則的要求，將復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片分別在高溫、高濕與強(qiáng)光照射條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，考察八角茴香油、樟腦、甘草酸、嗎啡各組分的含量變化，分析比較影響因素對各組分穩(wěn)定性的影響。

高溫試驗(yàn)：將復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片置于40 ℃溫度條件下進(jìn)行高溫試驗(yàn)，分別在第5 天和第10 天取樣檢測，同時(shí)將室溫條件下第0 天的檢測結(jié)果作為對照。結(jié)果見表1。

表1 高溫試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

高濕試驗(yàn)：將復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片置于溫度25 ℃±2℃、相對濕度75%±5%條件下進(jìn)行高濕試驗(yàn)，分別在第5 天和第10 天取樣檢測，同時(shí)將室溫條件下第0 天的檢測結(jié)果作為對照。結(jié)果見表2。

表2 高濕試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

強(qiáng)光照射試驗(yàn)：將復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片置于光照強(qiáng)度4 500 Lx±500 Lx 條件下進(jìn)行強(qiáng)光照射試驗(yàn)，分別在第5 天和第10 天取樣品檢測，同時(shí)將室溫條件下第0 天的檢測結(jié)果作為對照。結(jié)果見表3。

表3 光照分解實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=3）

2.4.2 加速試驗(yàn) 將復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片的鋁塑包裝樣品，置于40 ℃±2 ℃、相對濕度75%±5%條件下放置6 個(gè)月，分別在第0 月、1 月、3 月、6 月末時(shí)取樣檢測，同時(shí)將室溫條件下第0天的檢測結(jié)果作為對照。結(jié)果見表4。

表4 加速試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

3 結(jié)論

3.1 制備工藝方法

3.1.1 復(fù)方甘草含片的制備［4］取甘草浸膏粉，加水適量，加熱攪拌使溶解，冷卻，攪拌下緩緩加入適量稀鹽酸溶液，繼續(xù)攪拌30 min，靜置2 h，濾過，于濾渣中加入稀氨水，加熱攪拌使溶解，濃縮成稠膏狀，干燥，粉碎成細(xì)粉；取處方量的樟腦和八角茴香油，混合，用等量無水乙醇稀釋，攪拌下緩慢加入到β-環(huán)糊精的飽和水溶液中，40 ℃下攪拌3 h，冷藏24 h，濾過，濾渣低溫干燥；取處方量的阿片粉、苯甲酸鈉、甘草浸膏純化粉、β-環(huán)糊精包合物及適量輔料，充分混勻，制粒，干燥，壓片；將素片置包衣鍋中，噴施薄膜包衣液，干燥。

3.1.2 復(fù)方甘草片的制備［5］取甘草浸膏烘干，研碎，加苯甲酸鈉、阿片粉混合均勻，噴入用乙醇溶解的樟腦和八角茴香油的混合物，壓制成片，即得。

3.2 復(fù)方甘草含片制備工藝特點(diǎn)

3.2.1 揮發(fā)性組分包合 復(fù)方甘草含片的制備是將揮發(fā)性組分八角茴香油和樟腦采用β-環(huán)糊精包合后以固體粉末形式再與其他組分混合［9］，而復(fù)方甘草片的制備是將揮發(fā)性組分八角茴香油和樟腦用乙醇稀釋后直接噴散在組分總混合物表面。揮發(fā)性組分包合特點(diǎn)：（1）避免揮散損失，增加藥物的穩(wěn)定性［10］；（2）掩蓋不良?xì)馕?，增加患者用藥的順?yīng)性。

3.2.2 純化制粒包衣 復(fù)方甘草含片的制備是將甘草浸膏進(jìn)行純化后再與其他組分混合制成顆粒后壓片，再對素片進(jìn)行薄膜包衣。而復(fù)方甘草片的制備是將甘草浸膏研碎，與其他組分混合不經(jīng)制粒直接壓片，對素片不進(jìn)行包衣。復(fù)方甘草含片制備工藝特點(diǎn)：（1）甘草浸膏純度提高，減少服用劑量；（2）制成顆粒增加藥物流動(dòng)性，避免壓片過程中粉末分層和細(xì)粉飛揚(yáng)［11］；（3）薄膜包衣可掩蓋阿片粉的特殊惡臭味，增加了片劑的外在美觀［12］。

3.3 用法影響療效

曾玲珠［13］通過臨床療效分析得出，復(fù)方甘草片含服治療的臨床效果優(yōu)于吞服，并且能明顯減少患者的藥物不良反應(yīng)。因阿片粉的特殊惡臭味及其他組分的不良?xì)馕对斐苫颊吆?fù)方甘草片的順應(yīng)性差，故將其改變工藝制成的復(fù)方甘草含片的順應(yīng)性明顯提高。

3.4 組分的穩(wěn)定性

在高溫條件下復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片甘草酸、嗎啡含量基本沒有損失，但八角茴香油和樟腦都有損失，而且復(fù)方甘草片的損失更嚴(yán)重。（1）八角茴香油含量損失率：復(fù)方甘草含片33.7%、復(fù)方甘草片44.3%；（2）樟腦含量損失率：復(fù)方甘草含片32.3%、復(fù)方甘草片42.6%。

在高濕條件下復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片甘草酸、嗎啡含量基本沒有變化，但八角茴香油和樟腦都有損失，而復(fù)方甘草片損失更大。（1）八角茴香油含量損失率：復(fù)方甘草含片21.9%、復(fù)方甘草片30.7%；（2）樟腦含量損失率：復(fù)方甘草含片20.8%、復(fù)方甘草片29.6%。

在強(qiáng)光照射條件下復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片甘草酸、嗎啡、八角茴香油和樟腦含量均有損失，而且復(fù)方甘草片損失更嚴(yán)重。（1）八角茴香油含量損失率：復(fù)方甘草含片49.1%、復(fù)方甘草片69.6%；（2）樟腦含量損失率：復(fù)方甘草含片48.4%、復(fù)方甘草片67.5%；（3）復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片甘草酸、嗎啡含量損失均小于10%。

復(fù)方甘草含片和復(fù)方甘草片在市售包裝條件下，通過溫度40 ℃、濕度75%、4 500 Lx±500 Lx 光照的影響因素實(shí)驗(yàn)和溫度40 ℃、濕度75%加速試驗(yàn)，結(jié)果顯示兩種制劑甘草酸、嗎啡、八角茴香油和樟腦含量都有損失，復(fù)方甘草含片的抗光解性、熱穩(wěn)定性和濕穩(wěn)定性明顯優(yōu)于復(fù)方甘草片，應(yīng)避光保存。

4 討論

復(fù)方甘草片在市售的鎮(zhèn)咳祛痰藥物中占據(jù)較大的市場份額，是大多數(shù)家庭的常備藥物。復(fù)方甘草片同時(shí)含有西藥和中藥成分，其中中藥原料PLE（甘草粉提取物）的含量達(dá)80%以上，使其在具有了溫和的鎮(zhèn)咳祛痰作用的同時(shí)，又能夠減少其他化學(xué)成分對肝臟的損害。復(fù)方甘草含片是在保持成分含量不變的條件下，改進(jìn)制備工藝而得到的新型劑型。復(fù)方甘草含片質(zhì)量更加穩(wěn)定，改善了患者的順應(yīng)性，適合工業(yè)生產(chǎn),具有廣闊的市場前景。