Lnc RNA HNF1A-AS1靶向miR-32-5p調控肺癌對順鉑的耐藥性

張艷麗 唐文慧 蘇軍 馬紅霞

肺癌(lung cancer)是世界上發病率、死亡率最高的惡性腫瘤，威脅著世界人類的生命健康[1]。由于80%以上為非小細胞肺癌，其確診時大多已至晚期，失去最佳手術時機，放化療成為肺癌治療的首選[2]。順鉑是癌癥化療最主要的藥物，可抑制腫瘤細胞的DNA 合成，誘導癌細胞凋亡，達到抑制腫瘤細胞生長的作用[3]。其在肺癌早期和晚期均具有良好的抗癌作用，患者一旦產生耐藥性極易死亡。因此，耐藥成為克服肺癌治療的一大難題。非編碼RNA在各種人類疾病中的關鍵作用，其可分為短鏈RNA(18～23個核苷酸)和長鏈非編碼RNA(lncRNAs；>200 個核苷酸)[4]，其中lncRNA已經成為癌癥生物學研究中最主要的一類非編碼RNA，據報道lncRNA可通過靶向miRNA進而調控相關基因表達、蛋白質合成、RNA轉運等[5]。 研究發現lncRNAs也調節藥物轉運并最終調節抗性[6,7]。長鏈非編碼RNA HNF1A-AS1(Lnc RNA)在肺癌中發揮促進癌癥進一步惡化作用[8]，其對肺癌化療的敏感性是否也具有調控作用，尚且未知。本研究擬檢測順鉑耐藥肺癌細胞H520/DDP中HNF1A-AS1及miR-32-5p的表達，觀察其對H520/DDP順鉑敏感性、凋亡的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 肺鱗狀細胞癌細胞H520購自ATCC；DMEM培養基、MTT均購自美國Sellect公司；逆轉錄試劑盒、LipofectamineTM2000購自大連寶生物工程公司；BCA蛋白定量試劑盒購自美國Pierce公司；PVDF膜購自德國Roche Diagnostics公司；ECL發光液購自Thermo Fisher Scientific公司；SDS-PAGE 試劑盒、RIPA蛋白裂解液均購自Beyotime Biotechnology；Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒購自北京Solarbio公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養:在37℃、5% CO2的恒溫培養箱中，肺鱗狀細胞癌細胞H520與含10%胎牛血清的DMEM培養基一起孵育，待H520細胞融合至約75%，胰蛋白酶消化(1 min左右)后以1∶3的比例替換DMEM培養基，每隔1 d傳代1次。