lncRNA MALAT1在正常妊娠和子癇前期患者中的表達差異及臨床意義

張冬梅，楊麗麗，李 錚，張會敏

(河北省唐山市婦幼保健院產科，河北 唐山 063000)

子癇前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特有的并且較常見的多系統受累疾病，主要癥狀為妊娠中后期高血壓(≥140/90mmHg)、蛋白尿以及各系統功能紊亂，是導致孕產婦及胎兒死亡的誘因之一[1]。盡早發現PE高危的孕婦并給予有效監護后，對于改善妊娠結局有重要意義[2]。有研究表明孕婦血清中促血管生成因子血小板衍生生長因子-B(platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB)、胎盤生長因子(placental growth factor，PLGF)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和人可溶性FMS樣酪氨酸激酶1(soluble fms-like tyrosine kinase 1，sFlt-1)與PE有一定的相關性[3-4]，但PE診斷尚缺乏有效的預測標志物。近年來有研究表明長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)肺腺癌轉移相關轉錄產物-1(metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1)與腫瘤血管生成以及各炎癥反應相關[5]。因此，本研究探究lncRNA MALAT1在正常妊娠和子癇前期患者血清和胎盤組織中的表達差異，以及lncRNA MALAT1與血清學指標以及臨床治療的相關性，為后期臨床子癇前期高危患者提供新的預測指標。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2018年1月至2020年12月于河北省唐山市婦幼保健院建檔并分娩的87例子癇前期患者為實驗組，另選取本院同期分娩的48例健康孕婦為對照組。納入標準：①PE患者均符合《婦產科學》第9版中子癇前期的診斷標準；②單胎妊娠；③年齡20～40周歲，初產或經產婦；④在本院建檔，臨床產檢資料完整。排除標準：①有心臟病、糖尿病或妊娠期糖尿病、腎病病史患者；②合并精神疾病患者；③自身免疫性疾病患者；④有結核或肝炎傳染性疾病患者。本次實驗所有受試者均簽署知情同意書，并通過本院倫理委員會批準。根據實驗組患者PE的嚴重程度，將所有患者分為輕度組(n=47)和重度組(n=40)。

1.2研究方法

收集所有受試者年齡、孕周、體質量指數(body mass index，BMI)、血壓、24h尿蛋白、新生兒體重等臨床資料。

1.2.1 ELISA法檢測PDGF-BB、PLGF、sFlt-1、VEGF表達

所有受試者孕24周時空腹12h后清晨采取靜脈血10mL，3 000rpm離心15min后留取血清。采用ELISA法檢測血清PDGF-BB、PLGF、sFlt-1、VEGF表達情況，嚴格按照試劑盒步驟操作。PDGF-BB試劑盒購自上海臻科生物科技有限公司，PLGF試劑盒購自上海研生實業有限公司，VEGF、sFlt-1試劑盒購自泉州九邦生物科技有限公司。

1.2.2 RT-PCR檢測血清和胎盤組織lncRNA MALAT1表達

采用TRIzol法(Invitrogen，美國)提取產婦胎盤組織和血清總RNA，通過瓊脂糖凝膠及分光光度計鑒定總RNA的濃度和純度，A260/A280位于1.7～2.1時可進行RNA反轉錄；采用Promega反轉錄試劑盒取1μg將總RNA反轉錄為cDNA；RT-PCR檢測lncRNA MALAT1表達，嚴格按照SYBR Green PCR試劑盒(天根生物科技有限公司)操作。lncRNA MALAT1上游引物：5′-GGGTGTTTACGTAGACCAGAACC-3′，下游引物：5′-CTTCCAAAAGCCTTCTGCCTTAG-3′；內參為GAPDH，上游引物：5′-AACTTGGTATCGTGGAAGG-3′，下游引物：5′-GCCATCACGCCACAGTTTC-3′；擴增程序：95℃預變性5min，95℃變性15s，60℃退火35s，72℃延伸20s，進行40個循環，每個實驗設置3個復孔，反應結束后計算lncRNA MALAT1的相對表達量。

1.3統計學方法

2結果

2.1不同組孕婦臨床資料及妊娠結局比較

不同組孕婦年齡、孕次、產次以及孕前BMI比較差異無統計學意義(P>0.05)；PE患者收縮壓、舒張壓、24h蛋白尿顯著高于對照組，且重度PE患者顯著高于輕度PE患者，差異有統計學意義(F值分別為162.300、198.490、43.380，P<0.05)；PE患者生產孕周、新生兒體重均顯著低于對照組，差異有統計學意義(F值分別為12.283、43.389，P<0.05)，見表1。

表1 不同組孕婦臨床資料及妊娠結局比較Table 1 Comparison of clinical data and pregnancy outcomes of the pregnant women among different groups

2.2各組血清PDGF-BB、PLGF、sFlt-1、VEGF表達差異性

PE組PDGF-BB、sFlt-1水平顯著高于對照組，且重度PE患者顯著高于輕度PE患者，差異有統計學意義(F值分別為56.483、67.485，P<0.05)；PE組PLGF、VEGF水平顯著低于對照組，且重度PE患者顯著低于輕度PE患者，差異有統計學意義(F值分別為102.384、19.382，P<0.05)，見表2。

表2 不同組血清PDGF-BB、PLGF、sFlt-1、VEGF水平差異Table 2 Differences in serum levels of PDGF-BB,PLGF,sFlt-1 and VEGF ofthe pregnant women among different

2.3各組血清和胎盤組織lncRNA MALAT1表達差異性

與對照組相比，PE患者血清及胎盤組織中lncRNA MALAT1表達顯著降低(血清：F值分別為5.663、12.845，P<0.05；胎盤組織：F值分別為9.758、23.365，P<0.05；)，且重度PE患者顯著低于輕度PE患者，差異有統計學意義(F值分別為6.586、11.347，P<0.05)，見圖1。

2.4血清lncRNA MALAT1與血清學檢測指標的相關性

血清lncRNA MALAT1與血清PDGF-BB、sFlt-1呈負相關，與血清PLGF、VEGF水平呈正相關(r值分別為-0.789,-0.674、0.567、0.785，P<0.05)，見表3。

表3 血清lncRNA MALAT1與血清學檢測指標的相關性Table 3 Correlations of serum lncRNA MALAT1with serological indicators

注：A為血清；B為胎盤組織；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

2.5 ROC曲線評估血清lncRNA MALAT1對PE的診斷價值

lncRNA MALAT1診斷PE的ROC曲線下面積為0.829，95%CI為0.755～0.903；敏感度、特異度分別為80.5%、79.2%，Youden指數為0.596，見圖2。

圖2 lncRNA MALAT1診斷PE的ROC曲線Fig.2 ROC curve of lncRNA MALAT1 for diagnosis of PE

3討論

子癇前期是妊娠期較為常見的血管性疾病，其發病率約為4%～8%，可導致胎兒發生宮內窒息以及宮內生長受限，對孕產婦和胎兒健康產生嚴重影響[6]。與正常妊娠者相比，PE患者通常存在高血壓、蛋白尿等，該結果在本次研究中也得以體現。另外，PE患者的不良妊娠結局發生率較高，本研究中發現PE患者更容易早產，且新生兒體重顯著降低，因此子癇前期的治療仍是臨床醫學亟需解決的問題。

3.1子癇前期患者PLGF、VEGF水平較低，PDGF-BB、sFlt-1水平較高

PE的發生機制尚未完全明確，但胎盤功能不全在先兆子癇的病理生理中起著重要作用。妊娠早期異常胎盤形成導致子宮血管重構缺陷，胎盤灌注不足以及滋養層功能障礙，進而在母體循環中釋放滋養層因子，導致過度炎癥反應、內皮功能障礙和腎小球損傷[7]。VEGF參與血管形成過程，并對于維持內皮功能有重要作用，Zhou等[8]人發現①VEGF在胎盤組織的滋養細胞、血管內皮細胞和毛細血管中均有表達；②子癇前期患者血清VEGF水平較正常孕婦明顯降低，但胎盤組織VEGF mRNA表達較高；③VEGF缺乏可導致內皮功能紊亂，可能促使子癇前期的發生和發展。在本次研究中我們同樣發現與正常妊娠孕婦相比，PE患者血清VEGF表達較低，且重度PE顯著低于輕度PE患者。PLGF是VEGF家族成員之一，在誘導血管內皮細胞增殖、遷移以及促進血管新生中發揮重要作用，與滋養細胞增殖和侵襲也密切相關[9]。sFlt-1競爭性結合VEGF，促使血管生成障礙，并使血管壁的通透性和完整性受到影響。既往的研究報道稱血清sFlt-1水平與VEGF、PLGF呈負相關，并且PE患者sFlt-1水平顯著升高[10]，與本研究結果具有一致性。PDGF-BB在組織損傷早期從血小板中釋放出來，引起血管收縮，其與血管功能以及炎癥反應也有一定的相關性。研究表明PE患者胎盤蛻膜血管中PDGF-BB mRNA表達上調，阻礙胎盤重構，造成局部缺血[11]。有學者通過實驗證實PE患者血清PDGF-BB水平高于正常妊娠孕婦[3]，本次研究中同樣發現重度PE患者PDGF-BB顯著高于輕度PE患者，輕度PE患者顯著高于正常孕婦。

3.2子癇前期患者血清和胎盤組織中lncRNA MALAT1均表達下調

在本研究中發現血清和胎盤組織中lncRNA MALAT1均表達下調，并且與血清PDGF-BB、sFlt-1水平呈負相關，與PLGF、VEGF水平呈正相關。進一步通過ROC曲線評估血清lncRNA MALAT1對于PE的診斷價值，結果發現ROC曲線下面積為0.829，敏感度、特異度分別為80.5%、79.2%，該結果提示lncRNA MALAT1對PE具有一定診斷價值。其作用機制較為復雜，Zhou等[12]人發現lncRNA MALAT1可以通過抑制miR-590功能促進STAT3介導的內皮炎癥；Wei等[13]人實驗表明沉默lncRNA MALAT1通過p30下調IL-8預防肺移植缺血再灌注后的炎癥性損傷；Tang等[14]人發現lncRNA MALAT1通過上調miR-22-3p靶基因CXCR2和AKT的表達，保護內皮免受氧化低密度脂蛋白誘導的功能障礙；另有研究表明lncRNA MALAT1在PE患者胎盤組織中低表達，且lncRNA MALAT1水平降低時，能誘導上皮-間葉細胞轉化發生，引起滋養細胞侵襲能力減弱，血管生成減少，進一步導致紫紅螺旋動脈重構損傷加重[15-16]。

綜上，子癇前期患者PDGF-BB、sFlt-1水平較高，PLGF、VEGF水平較低，其血清和胎盤組織中lncRNA MALAT1均表達下調。后期我們將進一步通過細胞實驗探究lncRNA MALAT1與miRNA對PE診斷的聯合分析，以及lncRNA MALAT1對滋養細胞增殖、遷移以及侵襲能力的影響，探究其參與子癇前期的發病機制。