c-MYC蛋白及S100A6在多發性骨髓瘤中的表達及意義

崔文婷，胡蘇，黃燕，歐陽鵬，馮波

（九江市第一人民醫院血液科，江西 九江332000）

多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一種臨床中常見的漿細胞惡性疾病，發病機制較為復雜，目前尚未明確，分析可能與輻射、環境及年齡等因素密切相關[1]。若治療不及時，極有可能導致患者的骨骼和腎功能出現損傷，并出現高鈣血癥現象，嚴重影響患者的身心健康。通常情況下，臨床多使用靶向分子藥物治療該病，雖能取得一定效果，但不能完全治愈，還需進一步研究，以探尋更為合適的靶點進行治療，從而達到治愈的目的[2]。鈣周期蛋白S100A6是細胞外功能-手形結構的信號分子之一，在胃癌、肝癌、乳腺癌及多發性骨髓瘤中均呈高表達。c-MYC基因是一種擁有永生能力的基因，臨床研究[3]顯示，MM的發病原因和疾病進展與c-MYC基因重排和突變密切相關，人體內的大多數基因均能經過c-MYC途徑對MM細胞造成影響，從而導致MM細胞凋零?；诖耍狙芯恐荚谔骄縞-MYC蛋白及S100A6在多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）中的表達及意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2018年1月至2020年1月本院收治的60例MM患者作為研究對象，其中男32例，女28例；年齡45～80歲，平均（65.14±3.21）歲；分型：IgG型31例，IgA型18例，輕鏈型8例，不分泌型3例；D-S分期：Ⅰ期2例，Ⅱ期35例，Ⅲ期23例；髓外移者21例，無髓外移者39例。所有患者均對本研究知情同意并自愿簽署知情同意書。本研究已通過本院倫理委員會審核批準。

1.2 方法采集標本：于患者化療前及化療4～6個療程后取患者3 mL的骨髓（肝素抗凝），并以1∶1的比例添加至淋巴細胞分離液中，隨后采取離心的方式收集中間層細胞，800 r/min離心30 min，離心后使用RPMI 1640培養液進行清洗，以分離單核細胞。

熒光定量PCR法檢測MM的c-myc蛋白及S100A6表達：采用TRIzol試劑提取分離獲得的化療前后患者的單核細胞總RNA，并使用蛋白核酸分析儀測量RNA的濃度和純度。使用cDNA第一鏈合成試劑盒將RNA反轉錄成cDNA，以cDNA作為模板，使 用Real time PCR Master Mix（SYBR Green）試劑盒擴增PCR后檢測c-myc蛋白及S100A6的表達。

細胞及細胞培養：血液科實驗室將MM U266細胞置于37℃的培養箱中進行培養并保存，取對數生長期的U266細胞進行后續實驗。

實時熒光定量PCR法檢測S100A6 siRNA轉染后U266細胞中c-MYC、S100A6的表達：收集S100A6 siRNA轉染后的各組U266細胞，并嚴格按照實時熒光定量PCR法檢測各組骨髓單個核細胞的c-MYC、S100A6表達水平。連續進行6次實驗。

1.3 統計學方法采用SPSS 22.0統計學軟件分析數據，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗，計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同分期MM患者骨髓單個核細胞c-myc、S100A6表達水平c-MYC、S100A6表達與MM臨床分期均存在相關性（P＜0.05），見表1。

表1 不同分期MM患者骨髓單個核細胞c-MYC、S100A6表達水平[n（%）]

2.2 患者化療前后骨髓c-MYC和S100A6表達水平比較化療后，MM患者骨髓c-MYC、S100A6表達水平均明顯低于化療前，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 患者化療前后骨髓c-MYC和S100A6表達水平比較（±s）

表2 患者化療前后骨髓c-MYC和S100A6表達水平比較（±s）

注：c-MYC，c-MYC基因；S100A6，S100鈣結合蛋白A6

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2.3 髓外轉移MM患者c-MYC和S100A6的表達水平比較髓外轉移MM患者的單個核細胞S100A6、c-MYC表達水平均均明顯低于無髓外轉移MM患者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 髓外轉移MM患者c-MYC和S100A6的表達水平比較（±s）

表3 髓外轉移MM患者c-MYC和S100A6的表達水平比較（±s）

注：c-MYC，c-MYC基因；S100A6，S100鈣結合蛋白A6

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3 討論

MM屬于血液系統疾病，在我國的發病率較高，較難治愈，且該病的病程較長，危害性較大。近年來，我國的檢測技術水平不斷提升，臨床也逐漸提高了對分子生物學研究的重視程度。腫瘤的發生及發展過程較為復雜，主要由多因素、多基因及多階段共同組成，其中還有大量的信號分子在該過程中發揮重要作用，但具體哪種作用尚無研究證實[4]。

S100蛋白家族是指存在EF-手形結構的鈣結合蛋白信號分子，家族成員眾多，個別成員在腫瘤的發生與發展進程均具有異常的表達，且該類信號分子還能在腫瘤細胞增生、凋零及遷移過程中發揮作用[5]。此外，S100蛋白家族還能通過不同成員配形的方式與RAGE、EGFR和TLR4等部分受體相互結合，從而起到介導腫瘤發展的作用，其中，RAGE是一種免疫球蛋白超家族的多配體信號受體，能在炎癥和腫瘤的發病過程中產生作用，而RAGE在激活后，轉錄因子NFKB、MAP及粘附分子在內的各種細胞內信號分子均能發生活化，該類分子會隨著RAGE配體的改變而改變。此外，S100蛋白家族中的部分成員還能通過自分泌及旁分泌的方式在細胞外釋放，釋放后可與S100A12、S100B等分子有機結合，從而發揮出更大的作用[6]。S100A6是S100蛋白家族中的一員，是一種位于細胞內部的蛋白，其蛋白分子接近10 235分子量，其活性形式均為二聚體，在充分與鈣離子相互結合后，可完全暴露EF-手型經典區，該區能充分與多樣性的靶蛋白有機結合，但主要作用尚無權威證實，還需進一步研究證實。據相關研究[7]顯示，S100A6能在肝細胞中提高表達，在促進肝細胞腫瘤增生中發揮重要的作用。此外，還有研究[8]表明，與良性細胞相比，S100A6的表達水平在胰腺惡性細胞中較高，可見S100A6能對胰腺癌患者的預后因素產生影響。c-MYC屬于可易位基因，能調節多種物質，在骨髓瘤發生及疾病進展的過程中均能起促進作用，因此，臨床可將該基因作為治療骨髓瘤的靶點。S100A6與Annexin 2一致，均屬于鈣調節相關的蛋白，這兩種蛋白在腫瘤中共同表達，能在一定程度上加快腫瘤的生長。臨床研究[9]顯示，S100A6與Annexin 2在胰腺癌共同表達，能加快胰腺癌細胞的運動，而在口腔鱗狀細胞癌中共同表達，能加快腫瘤細胞的增生和遷移。此外，Annexin 2還能經c-MYC通路作用于惡性腫瘤中，但主要作用尚未明確。近年的研究結果[10]表明，c-MYC基因重排、突變及mRNA水平升高與MM發生和發展密切相關，人體內的大多基因均通過c-MYC途徑對MM細胞造成侵蝕，而S100A6與腫瘤增殖、浸潤及凋零中的關聯較為密切，因此，在各種實體腫瘤中均存在較為異常的表達，可見c-MYC與S100A6在MM患者中呈高表達。在使用熒光定量PCR法對患者進行檢測后發現，c-MYC、S100A6表達與MM臨床分期均存在相關性。由此可見，MM患者的c-MYC、S100A6表達水平較高。c-MYC基因是骨髓瘤和淋巴瘤研究領域的重點內容，在骨髓瘤中，大部分與腫瘤相關的基因均能相互結合，使其作用獲得進一步增強，有利于加快腫瘤的生長與轉移，而S100A6與c-MYC的表達呈正相關。本研究結果顯示，化療后，MM患者骨髓單個核細胞c-MYC、S100A6表達水平均明顯低于化療前（P＜0.05）。表明c-MYC、S100A6在化療前的表達水平較高。c-MYC屬于原癌基因，其功能較為多樣，主要位于染色體8q24上，該基因不僅含有轉錄因子的功能，還能抑制細胞的分化、進展及凋零。小鼠漿細胞瘤實驗[11]證實，人類多發性骨髓瘤中存在c-MYC的重排和過度表達，是影響預后的不良因素之一。有報道[12]顯示，S100A6在骨髓瘤髓外轉移的患者中表達增高，且極有可能直接在骨髓遷移中發揮作用，可見S100A6可能參與骨髓瘤發生發展的過程，但具體作用還需進一步研究證實。本研究結果還顯示，存在髓外轉移MM患者單個核細胞c-MYC、S100A6表達水平明顯高于無髓外轉移MM患者（P＜0.05）。表明存在髓外轉移的MM患者，c-MYC、S100A6表達水平較高。

綜上所述，使用熒光定量PCR法檢測MM患者骨髓單個核細胞c-MYC、S100A6表達水平后發現，c-MYC、S100A6在化療前及存在骨髓外轉移MM患者中的表達水平均較高，但c-MYC、S100A6在MM中的主要作用機制還需進一步的研究證實。