深圳地區妊娠期子癇前期孕婦血清中IL-22，IL-17，IL-10，TGF-β水平表達及IL-22基因rs2227485 T/C位點多態性分析

崔普芳，龔 源，劉愛勝，李 喆，張 燕，季新梅，劉國棟

（深圳市龍華區人民醫院 a.婦產科；b.檢驗科，廣東深圳 518109）

子癇前期（preeclampsia，PE）是指妊娠20 周后出現以高血壓、蛋白尿為主要臨床特征的一種妊娠特異性綜合征[1-2]。PE 發生發展過程十分復雜，目前認為PE 可能與遺傳、氧化應激、免疫失衡、炎癥及胎盤功能異常等多種因素有關。有研究表明，輔助性T 細胞（T helper cells，Th）及其分泌的白細胞介素（interleukin，IL）家族成員水平及基因多態性突變在PE 發病和進展中發揮了重要的作用，其中由Th17 分泌的IL-22 是一種促炎細胞因子，其基因多個位點存在多態性，且多態性分布存在地域性差異[3-6]，目前國內少數地區已有相關研究報道，但深圳地區未見相關報道。為了探討IL-22水平及其基因多態性與PE 發病之間的相關性，本研究對深圳地區PE 和健康孕婦IL-22，IL-17，IL-10，TGF-β 水平及IL-22 基因rs2227485 T/C 多態性進行了對比研究分析，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2019年3月～2020年12月深圳市龍華區人民醫院婦產中心確診的PE 孕婦87例為PE 組，年齡23～49 歲，平均年齡32.56±8.91歲；孕周20～29 周，平均25.02±3.18 周。納入標準：①符合《妊娠期高血壓疾病診治指南（2015）》中PE 診斷標準[7]，其中輕度PE 孕婦48 例，重度PE 孕婦39 例；②孕周≥20 周；③有規律產檢和資料完整者；④單胎孕婦者；⑤自愿并積極配合者；⑥患者及家屬知情同意者；⑦經醫院倫理委員會同意批準。排除標準：①伴有實質器官性、免疫性及血液性等基礎疾病孕婦者；②伴有慢性高血壓、心臟病、肝病、腎病及糖尿病者；③多胎孕婦者；④甲狀腺功能異常者；⑤有免疫治療史者。另選取同期健康孕婦120 例為對照組，年齡22～50 歲，平均年齡33.07±9.78 歲；孕周21 ～30 周，平均25.73±3.65 周。確保兩組的年齡、孕周等一般性資料差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 AE275 全自動酶免分析儀由深圳愛康科技有限公司提供；IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 酶聯免疫試劑盒由江蘇江萊生物科技有限公司提供；脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）提取試劑盒由深圳亞能生物技術有限公司提供；ABI7500 PCR 基因擴增儀由美國ABI 公司提供。

1.3 方法

1.3.1 收集標本： 均于清晨采集空腹外周靜脈血2份，其中1 份為EDTA-K2抗凝血，用于IL-22 基因rs2227485 T/C 位點單核苷酸多態性分析，另外1 份為無抗凝血，用于IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β水平檢測。

1.3.2 IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平檢測: 采用AE275 全自動酶免分析儀對IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平進行檢測，操作按儀器和試劑盒說明書進行。

1.3.3 DNA 提取: 采用DNA 提取試劑盒提取外周全血DNA，操作按儀器和試劑盒說明書進行。

1.3.4 多態性分析: 采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（polymerase chain reaction - restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）法對IL-22 基因rs2227485 T/C 位點多態性進行分析，具體操作參照文獻[5]。

1.4 統計學分析 采用SPSS22.0 統計軟件。計量資料服從正態或偏正態性分布以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料以百分率（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗；相關性采用Spearman 分析。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平比較 見表1。PE 組IL-22，IL-17 及TGF-β 水平比對照組明顯升高，而IL-10 水平比對照組明顯降低，差異均有統計學意義（均P<0.05）。

表1 兩組IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β水平比較（±s）

表1 兩組IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β水平比較（±s）

項目 PE 組（n=87）對照組（n=120） t P IL-22（ng/L） 54.47±16.29 25.95±6.87 6.064 5 0.031 6 IL-17（ng/L） 51.86±15.35 28.43±6.18 4.851 3 0.037 2 IL-10（ng/L） 22.48±9.01 48.57±15.62 9.106 2 0.026 5 TGF-β（ng/ml） 19.62±2.51 8.36±1.73 8.395 1 0.029 4

2.2 不 同 程 度PE 孕 婦IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平比較 見表2。重度PE 孕婦血清中IL-22，IL-17 及TGF-β 水平明顯高于輕度PE 孕婦，而IL-10 水平明顯低于輕度PE 孕婦，差異均有統計學意義（均P<0.05）。

表2 不同程度PE 孕婦IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平比較（±s）

表2 不同程度PE 孕婦IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平比較（±s）

項目 輕度PE 孕婦（n=48）重度PE 孕婦（n=39） t P IL-22（ng/L） 38.72±11.63 73.86±18.50 7.0145 0.0309 IL-17（ng/L） 43.86±13.74 61.70±17.28 3.4290 0.0371 IL-10（ng/L） 27.31±10.53 16.54±8.65 4.5822 0.0356 TGF-β（ng/ml） 13.57±2.12 27.06±3.24 8.1647 0.0287

2.3 Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗結果 兩組孕婦IL-22 基因rs2227485 T/C 位點多態性均檢出TT，TC 和CC 三種基因型。經χ2檢驗，差異無統計學意義（χ2=0.907 1，1.203 4；P=0.120 7，0.092 3），表明IL-22 基因rs2227485 T/C 位點基因型和等位基因頻率分布符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律，具有樣本代表性。

2.4 兩組IL-22 基因rs2227485 T/C 位點基因型及等位基因頻率比較 見表3。PE 組IL-22 基因rs2227485 T/C 位點CC 基因型及C 等位基因頻率明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。

表3 兩組IL-22 基因rs2227485 T/C 位點基因型及等位基因頻率比較[n（%）]

2.5 不同程度PE 孕婦IL-22 基因rs2227485 T/C 位點基因型及等位基因頻率比較 見表4。重度PE孕婦IL-22 基因rs2227485 T/C 位點CC 基因型及C等位基因頻率明顯高于輕度PE 孕婦，差異有統計學意義（P<0.05）。

表4 不同程度PE 孕婦IL-22 基因rs2227485 T/C位點基因型及等位基因頻率比較[n（%）]

2.6 PE 組不同基因型孕婦IL-22 水平比較 CC 基因型孕婦血清中IL-22 水平（71.05±18.62ng/L）明顯高于CT 和TT 基因型（46.25±11.57ng/L 和41.83±10.28ng/L），差異有統計學意義（t=3.506 4，3.723 6；P=0.031 2，0.029 5），但CT 和TT 基因型之間差異無統計學意義（t=1.325 1，P=0.067 6）。

2.7 相關性分析 經Spearman 相關性分析，PE 組孕婦血清中IL-22 與IL-17，TGF-β 水平呈正相關（r=0.790 3，0.695 8；P=0.025 1，0.293 2），而與IL-10 水平呈負相關（r=-0.617 2，P=0.031 6）。

3 討論

PE 是妊娠期常見的一種并發癥，常累及多個器官功能，出現一系列嚴重的母嬰并發癥，并易導致不良妊娠結局。PE 好發于孕中晚期，其發病率約為5%～14%，致死率約為10%～15%，且隨著我國“二孩政策”的全面開放呈明顯上升趨勢，嚴重威脅孕產婦及胎兒健康，是導致孕產婦及胎兒死亡的主要原因之一[8-10]。但PE 早期癥狀不明顯或較為輕微，易被漏診。因此，加強妊娠期PE 監測和評估對早期診斷、治療、干預及預防PE 具有重要的臨床意義。

有研究表明，免疫耐受失衡特別是母胎界面的免疫耐受失衡所引起的激活免疫細胞比例發生改變，從而導致滋養細胞發生炎癥反應，是導致PE發病的重要因素之一，其中Th1/Th2 和/或Th1/Th17 比例失衡可能與PE 的發病有關[11]。有研究表明，PE 發生和進展與多種細胞因子互相作用有密切關系[12-13]，其中Th17 是新發現的分泌IL-17 和IL-22 促炎細胞因子的一種CD4+T 淋巴細胞亞群，與多種自身免疫性和炎癥反應性疾病有密切關系。轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）是反映胎盤功能狀態的一個指標，正常狀態下呈低水平表達，當胎盤功能異常時TGF-β 水平大幅增加。IL-10 是由Treg 細胞通過活化的初始CD4+T 細胞并在TGF-β 介導作用下所分泌的一種具有免疫抑制作用的細胞因子，其不僅可以抑制多種促炎細胞因子的產生，還可抑制一氧化氮（nitric oxide，NO）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）介導的免疫反應發生，是維持妊娠必不可少的細胞因子之一。本研究結果顯示，PE 組IL-22，IL-17 及TGF-β 水平明顯升高，而IL-10 水平明顯降低，且與病情分級有關，與有關文獻報道的結論基本一致[11-13]，這表明促炎細胞因子在PE 孕婦體內可能占主導地位，促使PE 發生和發展。此外，結果還顯示，PE 組IL-22 與IL-17，TGF-β 及IL-10 水平存在一定相關性，這可能與PE 孕婦Th17 細胞數明顯增加而Treg 細胞數減少有關，同時也表明Th17 可能是通過TGF-β 介導發揮作用的。

PE 病因和發病機制十分復雜，目前尚未明確，多數認為PE 與免疫耐受失衡、氧化應激、炎癥反應及遺傳等多種因素有關，其中遺傳在PE 發生和發展過程中發揮了重要的作用[14-15]。IL-22 是一種主要由Th17 細胞分泌的在炎癥反應中發揮重要作用的促炎細胞因子，其基因多個位點存在單核苷酸多態性。有研究表明，IL-22 基因多態性與PE 的易感性有關，但基因多態性分布因不同地區人群的遺傳背景、免疫及環境等因素的不同而可能存在一定差異[5]。本研究結果顯示，深圳地區PE 組IL-22基因rs2227485 T/C 位點CC 基因型頻率明顯高于對照組，且與病情分級有關，這表明深圳地區PE發病可能與IL-22 基因rs2227485 T/C 位點多態性突變有關，其中CC 基因型可能是該地區PE 發病的易感基因之一。另外，結果還顯示，CC 基因型PE孕婦IL-22 水平明顯高于其它基因型，這說明IL-22基因rs2227485 T/C 位點多態性在PE 發病中的作用機制可能是其基因突變通過影響IL-22 水平表達或改變其結構來實現的，具體作用機制有待深入研究。

綜上所述，PE 孕婦血清中IL-22，IL-17 及TGF-β 明顯升高，而IL-10 水平明顯降低，且與PE 病情分級有關。同時IL-22 基因rs2227485 T/C位點多態性與深圳地區PE 發病有一定相關性。因此，加強孕婦細胞因子水平及基因多態性分析，對早期診斷、干預性治療及預防具有重要的意義。