2015～2019年北京市海淀區(qū)食源性腹瀉患者致瀉大腸埃希氏菌型別分布和耐藥性分析

劉 偉，白 婧，尹可欣，韓喜榮，施麗飛（北京市海淀區(qū)疾病預防控制中心，北京 100094）

致瀉大腸埃希氏菌（diarrheagenic Escherichia coli, DEC）是一類能引起人體以腹瀉癥狀為主的大腸埃希氏菌，可經(jīng)過污染食物引起人類發(fā)病。常見的DEC主要包括腸道致病性大腸埃希氏菌（EPEC）、腸道侵襲性大腸埃希氏菌（EIEC）、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌（ETEC）、產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌（STEC）[包括腸道出血性大腸埃希氏菌（EHEC）]和腸道集聚性大腸埃希氏菌（EAEC）[1]，為了解海淀區(qū)DEC 的型別分布特點和耐藥性情況，為食源性疾病的防控和治療提供參考，我們將2015～2019年海淀區(qū)開展食源性疾病監(jiān)測的2 家哨點醫(yī)院送檢的1 810 份腹瀉病人糞便標本進行了DEC 的分離培養(yǎng)、生化鑒定、多重實時熒光PCR 毒力基因測定和藥敏檢測，檢測結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2015～2019年海淀區(qū)開展食源性疾病監(jiān)測的2 家哨點醫(yī)院送檢的1 810 份腹瀉病人糞便標本，病例定義為由食品或懷疑由食品引起的，以腹瀉為主要癥狀的病例，每日腹瀉≥3 次且糞便性狀異常的就診患者。

1.2 試劑和儀器

1.2.1 試劑：麥康凱、三糖鐵、營養(yǎng)瓊脂購自北京陸橋技術有限責任公司，GN 細菌生化鑒定卡購自美國生物梅里埃公司，五種致瀉大腸埃希氏菌核酸多重實時熒光PCR 檢測試劑盒購自北京卓成惠生生物科技股份有限公司；革蘭陰性需氧菌藥敏檢測板購自上海星佰生物技術有限公司，所有試劑均在有效期內使用。

1.2.2 儀器：VITEK 2 compact 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)由美國生物梅里埃公司生產(chǎn)，7500fast 實時熒光定量PCR 儀器由美國AB 公司生產(chǎn)。

1.3 試驗方法

1.3.1 DEC 檢測方法：將糞便直接劃線接種在麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng),挑選5 個以上可疑菌落進行生化鑒定，然后用五種致瀉大腸埃希氏菌核酸多重實時熒光PCR 檢測試劑盒對菌株進行特征性基因檢測。

1.3.2 藥敏試驗方法：對確認為DEC 的菌株用微量肉湯稀釋法測定其藥物敏感性，用商品化藥敏板進行檢測，肉眼對藥敏板進行判讀，得到最低抑菌濃度（minimum inbibitory concentration, MIC）值。對照美國臨床實驗室標準化委員會（CLSI）的相應標準獲得相應敏感(S)、中度敏感(I)和耐藥(R)的結果。選擇大腸埃希氏菌ATCC 25922 作為藥敏試驗質控菌株。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 16.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 1 810 份腹瀉病人糞便標本DEC 檢出情況 見表1。1 810 份糞便標本檢出DEC 214 株，檢出率為11.8%，各年度檢出率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=10.858，P=0.028）。檢出DEC 共有四種型別，分別為EAEC 96 株（44.9%），ETEC 89 株（41.6%）EPEC 24 株（11.2%），EIEC 5 株（2.3%）。

表1 2015～2019年各種DEC 分布情況[株（%）]

2.2 藥敏試驗結果 見表2。藥敏檢測結果顯示214 株菌除對亞胺培南無耐藥外，對其余11 種抗生素均有不同程度的耐藥。

表2 214 株DEC 對12 種藥物敏感檢測結果[株（%）]

2.3 214 株DEC 各年度耐藥率 見表3。結果顯示頭孢西丁、頭孢他啶和氯霉素呈現(xiàn)較低的耐藥性，而氨芐西林、復方磺胺、頭孢噻肟和四環(huán)素均呈現(xiàn)較嚴重的耐藥性。

表3 214 株DEC 各年度耐藥率[n（%）]

2.4 多重耐藥性結果 214株DEC中，70株（32.7%）全部敏感，有144 株（67.3%）耐藥。在耐藥株中，28 株（19.4%）單耐藥，17 株（11.8%）雙耐藥，3種到9 種抗生素多重耐藥株有99 株（68.8%）。有63 種耐藥譜，單耐藥譜AMP 有15 株（10.4%），然后依次是AMP-CXT-CFZ 耐藥譜11 株（7.6%）、TET-SXT 耐 藥 譜8 株（5.6%），TE，AMP-TETSXT，AMP-AMS-TET-SXT，AMP-TET-GEN-SXT這4 種耐藥譜各5 株菌（3.5%），其它耐藥譜的菌株數(shù)在1～4 株不等。AMP，TET，AMS 等抗生素在三種及三種以上的多重耐藥譜中出現(xiàn)的次數(shù)最多。

3 討論

本研究結果顯示5年來北京市海淀區(qū)DEC 的總檢出率同北京市懷柔區(qū)[2]2014～2018年檢出率（11.6%）相近，與北京市豐臺區(qū)[3]2017年（12.43%）、北京市順義區(qū)[4]2013～2015年（8.55%）檢出率相比略有差異。同其他省份地區(qū)相比高于淮安市[5]2014～2015年（7.10%）和沈陽地區(qū)[6]2012～2014年（6.65%）的檢出率，低于濟南市[7]2014～2018年（28.55%）和貴陽市[8]2010年（34.65%）的檢出率。海淀區(qū)檢出的DEC 以EAEC 和ETEC 為優(yōu)勢型別，其次是EPEC，與濟南市[7]檢出的各型別DEC 排序完全一致，優(yōu)勢型別方面與淮安市[5]、沈陽地區(qū)[6]、貴陽市[8]一致，與北京市其它區(qū)[2-4]和上海市寶山區(qū)[9]存在差異。說明不同地區(qū)DEC 檢出率以及優(yōu)勢型別分布各不相同，出現(xiàn)這種情況的原因可能與各地區(qū)所處的環(huán)境條件、衛(wèi)生狀況、居民衛(wèi)生安全意識有關，農(nóng)村和城鄉(xiāng)結合部地區(qū)的檢出率可能就會高于城市，同時各個實驗室的檢測能力和檢測手段也可能導致檢測結果出現(xiàn)差異。另外有資料[10]顯示DEC 可疑暴露食物種類陽性檢出率最高的飲料冷凍飲品、肉類制品和水果類制品與DEC 常污染的食物相一致。

藥敏結果顯示，檢出的DEC 除有2 株中介外，其余212 株均對亞胺培南（IMP）敏感，與北京市豐臺區(qū)[3]報道的全部敏感基本一致，說明IMP 對治療本地區(qū)DEC 感染非常有效。頭孢他啶、氯霉素和頭孢西丁的藥敏結果提示在臨床治療時可以在這幾種抗生素做適當?shù)倪x擇。在耐藥性方面，不同菌株的耐藥情況差別很大，種類繁多的耐藥譜為臨床醫(yī)生的治療選擇帶來壓力。在各種多重耐藥譜中AMP-CXT-CFZ 耐藥譜所占的比例最大。所有耐藥株中對氨芐西林耐藥性最高，其次是四環(huán)素和復方磺胺，對3 種及以上抗生素產(chǎn)生多重耐藥的菌株達68.8%，最嚴重的耐藥株對9 種抗生素產(chǎn)生多重耐藥。檢測數(shù)據(jù)提示海淀區(qū)DEC 耐藥情況不容樂觀,而且多重耐藥譜廣，給臨床合理選擇抗生素以及合理聯(lián)合用藥帶來了挑戰(zhàn)。

本研究通過對DEC 毒力基因測定來確定各種DEC 型別的分布以及對菌株的耐藥性檢測，為DEC 的流行、溯源和臨床治療參考提供了可靠的數(shù)據(jù)，同時也提示要加強對抗生素的合理使用及管理，延緩耐藥株的產(chǎn)生和傳播。