膿毒癥并發(fā)急性腎損傷患兒血清miR-452-3p的水平表達(dá)及其臨床意義

洪 莉，鄭 青，陳永香，吳 春，陳綿平（海口市婦幼保健院檢驗科，海口 570100）

急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)是在兒童膿毒癥中常見且嚴(yán)重的并發(fā)癥，可延長患兒的住院時間及增加死亡率。中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（neutrophil gelatinaseassociated lipocalin, NGAL）及腎損傷分子-1（kidney injury molecule-1, KIM-1）是反映腎功能損傷的常用指標(biāo)， 與AKI 發(fā)生有關(guān)，在AKI 的早期診斷中具有一定的價值[1]。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一類長約22 nt 的小RNA 分子，其通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、缺血再灌注損傷等過程，參與AKI 的發(fā)生發(fā)展[2-3]。近期的研究發(fā)現(xiàn)，miR-452-3p 在膿毒癥并發(fā)AKI 患者中明顯高于無AKI 患者，可能是膿毒癥患者早期發(fā)現(xiàn)AKI 的有效生物標(biāo)志物[4]。本研究對膿毒癥并發(fā)AKI 患兒血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1水平進(jìn)行檢測，探討三項聯(lián)合預(yù)測AKI 患兒預(yù)后的價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取海口市婦幼保健院2018年1月～2020年12月收治的膿毒癥并發(fā)AKI 患兒106例，其中男性65 例，女性41 例，年齡12 個月～14歲（6.73±1.65）歲。根據(jù)106 例患兒住院后28 天的預(yù)后情況，分為生存組71 例和死亡組35 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①膿毒癥診斷參考《兒童膿毒性休克診治專家共識(2015 版)》[5]；②AKI 診斷參考2012《KDIGO 急性腎損傷臨床實踐指南》[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已存在慢性腎臟病史、免疫系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤；②不能配合簽署知情同意書。死亡組和生存組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 儀器和試劑 ABI 7500 型熒光定量PCR 儀，PCR 試劑盒，RNeasy 試劑盒，miRNA Easy 試劑盒和TRIzol 試劑盒均購自美國Qiagen 公司；離心機(jī)為北京醫(yī)用離心機(jī)廠產(chǎn)品。NGAL 及KIM-1 試劑購自美國R&D 公司。

1.3 方法 采集靜脈血5 ml，離心分離血清，在PCR 儀上檢測miR-452-3p 水平。反應(yīng)體系為20μl：TaqMan MicroRNA Assay 1.00μl，cDNA 1.33μl，TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00μl，ddH2O 7.67 μl；擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性10 min，95℃變性15 s，60℃復(fù)性60 s 進(jìn)行45 個循環(huán)。另采用酶聯(lián)免疫法檢測NGAL 及KIM-1 水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗。應(yīng)用多因素Logistic 回歸分析膿毒癥并發(fā)AKI 患兒發(fā)生死亡的危險因素。繪制受試者工作特征（ROC）曲線分析miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 對AKI 患兒預(yù)后預(yù)測的價值。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平比較 見表1。死亡組血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平明顯高于生存組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。

表1 兩組血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平比較（±s）

表1 兩組血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平比較（±s）

項目 生存組（n=71）死亡組（n=35） t 值 P 值miR-452-3p 2.17±0.95 3.92±1.61 18.245 ＜0.001 NGAL（mg/ L） 287.46±31.70 562.38±53.62 15.117 ＜0.001 KIM-1（μg/ L） 15.96±3.20 29.15±6.28 11.613 ＜0.001

2.2 多因素Logistic 回歸分析AKI 患兒發(fā)生死亡的危險因素 見表2。對miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 進(jìn)行多因素Logistic 回歸分析，顯示血清miR-452-3p（OR=2.583, 95%CI: 1.690～5.374），NGAL（OR=2.792, 95%CI: 1.835～6.153）及KIM-1（OR=1.950, 95%CI: 1.274～3.902）水平升高是AKI患兒發(fā)生死亡的獨(dú)立危險因素（P＜0.001）。

表2 多因素Logistic 回歸分析AKI 患兒發(fā)生 死亡的危險因素

2.3 血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平預(yù)測AKI 患兒死亡的價值 見表3 和圖1。血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平預(yù)測AKI 患兒死亡的最佳截值分別為3.12，450.16 mg/L 和24.20 μg/L，三項聯(lián)合預(yù)測AKI 患兒死亡的曲線下面積（0.947，95%CI: 0.886～0.991）明顯高于單項miR-452-3p（0.851，95%CI: 0.796～0.910），NGAL（0.834，95%CI: 0.776～0.895） 及KIM-1（0.802，95%CI: 0.745～0.861），其敏感度和特異度分別為96.2%，89.5%。

圖1 血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平預(yù)測AKI患兒死亡的ROC 曲線

表3 血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平預(yù)測AKI 患兒死亡的價值

3 討論

兒童膿毒癥中AKI 的發(fā)病率及死亡率較高，如何早期評估AKI 的預(yù)后情況對其救治幫助重大。NGAL 是在激活中性粒細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)的一種小分子量分泌性蛋白，早期腎損傷中NGAL 升高顯著，與AKI 的發(fā)生密切相關(guān)[7]。KIM-1 作為跨膜蛋白,極低表達(dá)于正常腎臟中,在腎損傷中表達(dá)增高，是判斷早期腎損傷的有用指標(biāo)[8]。有研究表明，miRNA的異常表達(dá)與AKI 發(fā)生有關(guān)，其可能是AKI 診斷和預(yù)后判斷的潛在指標(biāo)，應(yīng)用前景較好[9]。

本研究顯示，死亡組血清miR-452-3p，NGAL及KIM-1 水平明顯高于生存組，提示miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 升高與AKI 患兒的死亡有關(guān)，可能參與AKI 的病情進(jìn)展。徐佳音等[10]研究發(fā)現(xiàn)，NGAL 及KIM-1 在兒童膿毒癥AKI 中顯著升高，兩項聯(lián)合檢測對AKI 診斷具有較高的靈敏度。另有研究指出，血清miRNA 高表達(dá)的AKI 患者病情嚴(yán)重，死亡風(fēng)險較大，在預(yù)測AKI 的病情進(jìn)展程度及預(yù)后中的靈敏度和特異度均較高[11]。本研究多因素Logistic 回歸分析顯示，miR-452-3p，NGAL及KIM-1 水平升高是AKI 患兒發(fā)生死亡的獨(dú)立危險因素。LIN 等[12]研究也認(rèn)為，膿毒癥患者存在miRNA 高表達(dá)，其發(fā)生AKI 的風(fēng)險大大增加，miRNA 可能是AKI 早期診斷及預(yù)后預(yù)測的無創(chuàng)性生物學(xué)指標(biāo)。另有研究表明，NGAL 是一種很有前途的膿毒性AKI 生物標(biāo)志物，對判斷AKI 的嚴(yán)重程度和預(yù)后情況具有較高的價值[13]。本研究ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)， miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 三項聯(lián)合對AKI 患兒死亡預(yù)測的價值最大，其效能較高。YANG 等[14]研究指出，miRNA 與AKI 的嚴(yán)重程度有關(guān)，其水平越高患者死亡率越高，未來可能是AKI 診斷及預(yù)后評估的可靠指標(biāo)。另有研究證實，NGAL 及KIM-1 在評估膿毒癥并發(fā)AKI 患者死亡中的價值均較好，聯(lián)合檢測有利于評估AKI 患者的預(yù)后情況，對指導(dǎo)臨床治療AKI具有較好的幫助[15]。

綜上所述，膿毒癥并發(fā)AKI 患兒miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平均明顯升高，是AKI 患兒發(fā)生死亡的危險因素，三項聯(lián)合檢測能更好地預(yù)測AKI 患兒的死亡情況。