腦梗死患者血清miR-181d和miR-210水平表達(dá)與頸動(dòng)脈狹窄程度及預(yù)后的相關(guān)性研究

王國玲，張博剛，郭 娟，馬 萌，王榮輝，閆喜格（邢臺(tái)市第三醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科五病區(qū),河北邢臺(tái) 054000）

腦梗死是腦組織區(qū)域血液供應(yīng)障礙，導(dǎo)致腦組織缺血缺氧性病變壞死，進(jìn)而產(chǎn)生神經(jīng)功能缺失為表現(xiàn)的一種心血管疾病。動(dòng)脈粥樣硬化是腦梗死常見病因，會(huì)導(dǎo)致腦動(dòng)脈狹窄或閉塞病變，導(dǎo)致腦血栓形成,導(dǎo)致病情進(jìn)展，而頸動(dòng)脈是腦區(qū)供血重要血管，其狹窄程度與腦梗死病變程度密切相關(guān)[1]。頸動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致血流灌注下降，血流速度減緩，導(dǎo)致腦區(qū)供血減少，進(jìn)而導(dǎo)致腦梗死發(fā)生[2-3]。雖然臨床對(duì)癥治療可有效緩解其癥狀，但復(fù)發(fā)率仍較高，早期診斷對(duì)于提高患者生活質(zhì)量具有重要意義。因此，明確腦梗死發(fā)展的影響因子，對(duì)于治療及改善預(yù)后有積極意義[4]。據(jù)相關(guān)研究表明[5]，血清微小RNA-181d（microRNA-181d，miR-181d）和微小RNA-210（microRNA-210，miR-210）是微小RNA的主要亞型，在心血管疾病、代謝性疾病中具有重要意義，可通過介導(dǎo)血管生成、凋亡及氧化應(yīng)激，在缺血性卒中病理生理中發(fā)揮關(guān)鍵作用?；诖耍晕以?80 例腦梗死患者作為研究對(duì)象，檢測其血清miR-181d 和miR-210 表達(dá)量水平，進(jìn)一步分析其在頸動(dòng)脈狹窄和預(yù)后不良中的影響意義，旨在為指導(dǎo)治療及改善預(yù)后提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取邢臺(tái)市第三醫(yī)院2017年10月～2019年10月收治的480 例腦梗死患者，根據(jù)頸部超聲結(jié)果將其分為頸動(dòng)脈狹窄組278 例和無頸動(dòng)脈狹窄組202 例。然后隨訪患者半年內(nèi)預(yù)后情況，根據(jù)患者預(yù)后情況將患者分為預(yù)后良好組192 例和預(yù)后不良組288 例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)CT 及頭顱MRI 檢查確診為腦梗死者，年齡＞18 歲；②均為首次發(fā)病，且發(fā)病后于1 周內(nèi)就診；③臨床資料完整；④患者知情且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入院前服用過他汀類、葉酸藥物者；②并發(fā)心、肝、腎等重要器官功能障礙或嚴(yán)重疾病者；③并發(fā)嚴(yán)重感染性疾病者；④溝通困難或精神障礙、認(rèn)知障礙者；⑤拒絕或不配合研究者。研究獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 儀器與試劑 飛利浦IU22 彩色多普勒超聲儀；上海屹譜儀器制造有限公司紫外分光光度計(jì)；賽默飛世爾中國公司試劑盒。

1.3 方法 入院后所有患者均采用彩色多普勒超聲儀進(jìn)行頸動(dòng)脈超聲檢查，動(dòng)脈管腔狹窄率＞50%為頸動(dòng)脈狹窄，根據(jù)是否存在頸動(dòng)脈狹窄將患者分為頸動(dòng)脈狹窄患者和無頸動(dòng)脈狹窄患者。并于入院后取其空腹靜脈血約3 ml，3 000 r/min，離心10 min 取上清液置于-70℃冰箱待測。采用紫外分光光度計(jì)檢測血清miR-181d 和血清miR-210 相對(duì)表達(dá)量，并提取總RAN，然后使用Takara 公司試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用QRT-PCT 對(duì)cDNA進(jìn)行PCR，再將其放入熒光定量PCT儀上進(jìn)行反應(yīng)，共循環(huán)40 次，然后計(jì)算miR-181d 和miR-210 相對(duì)表達(dá)量。并搜集兩組患者年齡、性別、高血壓、高血脂、糖尿病、冠心病、吸煙史、喝酒史心房顫動(dòng)等臨床資料。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS19.0 數(shù)據(jù)軟件建立數(shù)據(jù)庫，計(jì)量資料均符合正態(tài)分布，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組內(nèi)比較采取配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，組間比較采取獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采取χ2檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用逐步Logistic回歸分析影響腦梗死預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，入選標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05。根據(jù)危險(xiǎn)因素繪制ROC 曲線分析危險(xiǎn)評(píng)分模型對(duì)預(yù)后不良的預(yù)測價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料及血清miR-181d，miR-210 水平表達(dá)比較 見表1。兩組性別、年齡、發(fā)病時(shí)間等一般資料較為接近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。頸動(dòng)脈狹窄組患者血清miR-181d 表達(dá)量水平顯著高于無頸動(dòng)脈狹窄組，而miR-210 表達(dá)量水平均顯著低于無頸動(dòng)脈狹窄組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 兩組一般資料及血清miR-181d，miR-210 水平表達(dá)比較（±s）

表1 兩組一般資料及血清miR-181d，miR-210 水平表達(dá)比較（±s）

類 別 頸動(dòng)脈狹窄組（n=278） 無頸動(dòng)脈狹窄組（n=202） t/χ2 值 P 值性別（男/女） 135/143 84/118 2.296 0.130年齡（歲） 5 6.47±5.34 57.26±5.49 1.581 0.115發(fā)病時(shí)間（天） 2.35±1.14 2.48±1.16 1.224 0.221血清miR-181d 水平 2.42±0.46 1.75±0.34 17.513 0.000血清miR-210 水平 1.57±0.36 1.92±0.33 10.888 0.000

2.2 不同頸動(dòng)脈狹窄程度患者血清miR-181d 和miR-210 表達(dá)量比較 頸動(dòng)脈輕度狹窄患者血清miR-181d 表達(dá)量（1.15±0.23）顯著低于中度狹窄（1.36±0.26）、重度狹窄（1.42±0.35）患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.874，6.246，均P=0.000）。頸動(dòng)脈輕度狹窄患者血清miR-210 表達(dá)量（1.39±0.35）顯著高于中度狹窄（1.29±0.28）、高于重度狹窄（1.16±0.22）患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.172，5.427，P=0.031，0.000）。

2.3 影響腦梗死患者預(yù)后不良的單因素分析 見表2。隨訪半年內(nèi)預(yù)后情況，預(yù)后良好192 例，占40.00%；預(yù)后不良288 例，占60.00%。兩組各危險(xiǎn)因素比較，性別、年齡、并發(fā)高血脂、并發(fā)冠心病、吸煙史、喝酒史等資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。兩組高血壓、糖尿病、心房顫動(dòng)、血清miR-181d 和血清miR-210 等資料差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表2 影響腦梗死患者預(yù)后不良的單因素分析[n（%）]

2.4 影響腦梗死患者預(yù)后不良的多因素分析 見表3。將有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義危險(xiǎn)單因素納入多因素回歸分析，采用Logistic 回歸方程進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，血清miR-181d 表達(dá)量升高（OR=1.164，95%CI：1.137～71.192），血清miR-210 表達(dá)量降低（OR=10.196，95%CI：6.677～15.570）是腦梗死患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（OR ＞1，P＜0.05）。

表3 影響腦梗死患者預(yù)后不良的多因素分析

2.5 腦梗死患者預(yù)后不良預(yù)測價(jià)值 見圖1。以特異度為橫坐標(biāo)軸，靈敏度為縱坐標(biāo)軸，計(jì)算ROC曲線面積，來評(píng)估預(yù)后不良的準(zhǔn)確性，血清miR-181d 預(yù)測腦梗死預(yù)后不良的ROC 曲線下面積為0.76（95% CI：1.013～1.124），此時(shí)的敏感度和特異度分別為71.23%和73.45%。而血清miR-210 預(yù)測腦梗死預(yù)后不良的ROC 曲線下面積為0.79（95% CI：1.125～1.206），此時(shí)的敏感度和特異度分別為73.42%和75.36%，聯(lián)合檢測的ROC 曲線為0.83（95% CI：1.147～1.235），此時(shí)敏感度和特異度分別為79.33%和82.41%。

圖1 血清miR-181d，miR-210 預(yù)測腦梗死 預(yù)后不良ROC 曲線

3 討論

腦梗死因具有高達(dá)50%的致殘率，約10%的病死率而被臨床重點(diǎn)關(guān)注，但因其無明顯臨床表現(xiàn)易錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)，但復(fù)發(fā)率較高，且復(fù)發(fā)后會(huì)嚴(yán)重影響患者的日常生活和社會(huì)功能，甚至增加死亡率[6]。因此，明確影響不良預(yù)后因素，并對(duì)其進(jìn)行有效治療對(duì)于提高患者生活質(zhì)量及生存率具有重要意義。據(jù)相關(guān)研究表明[7]，血清miR-181d 和miR-210 通過miRNA 進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)和免疫調(diào)節(jié)參與炎性反應(yīng)，與腦梗死的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系。為進(jìn)一步探究其對(duì)腦梗死頸動(dòng)脈狹窄與不良預(yù)后的影響作用，研究對(duì)不同頸動(dòng)脈狹窄及不同預(yù)后結(jié)果患者進(jìn)行血清miR-181d 和miR-210 相對(duì)表達(dá)量比較，發(fā)現(xiàn)其水平表達(dá)變化與頸動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)，并且是影響腦梗死患者預(yù)后不良的重要影響因素，在臨床治療及改善預(yù)后中具有良好預(yù)測價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，頸動(dòng)脈狹窄患者血清miR-181d 表達(dá)量處于較高水平，而miR-210 表達(dá)量處于較低水平，且頸動(dòng)脈輕度狹窄程度越嚴(yán)重，提示血清miR-181d 和miR-210 表達(dá)量與腦梗死患者頸動(dòng)脈狹窄程度密切相關(guān)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，較高表達(dá)血清miR-181d 和較低表達(dá)的血清miR-210 是影響腦梗死患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，血清miR-181d 和miR-210 表達(dá)量腦梗死預(yù)后密切相關(guān)。因此，血清miR-181d 和miR-210 可作為腦梗死患者頸動(dòng)脈病變程度的重要評(píng)估指標(biāo)之一，且與預(yù)后有著重要聯(lián)系[8-9]。近年來相關(guān)報(bào)道表明[10-11]，炎性因子通過炎癥反應(yīng)促進(jìn)腦組織的炎性反應(yīng)及血管斑塊的形成，其炎性因子水平與病情嚴(yán)重程度及梗死面積密切相關(guān)。機(jī)體炎癥是影響腦梗死的重要因素，與機(jī)體氧化應(yīng)激激活、促進(jìn)NF-KB 通路信號(hào)傳導(dǎo)、進(jìn)而引起腦缺血再灌注、從而導(dǎo)致神經(jīng)損傷有關(guān)，參與腦梗死的發(fā)生與發(fā)展。因此，有效評(píng)估患者炎癥反應(yīng)及腦損傷程度對(duì)于及時(shí)改善預(yù)后具有積極意義。

miRNA 是主要存在于中樞神經(jīng)的RNA，在促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育方面具有重要作用，是腦損失的特異性miRNA。當(dāng)腦梗死發(fā)生時(shí)，腦區(qū)血液屏障被破壞，miR-181d 進(jìn)入血液而被檢測到，并隨著腦梗死嚴(yán)重程度的加重，其神經(jīng)元損傷嚴(yán)重程度的增加，miR-128d 表達(dá)水平升高，提示其水平表達(dá)與腦梗死程度呈正相關(guān)[12-13]。而miRNA 參與細(xì)胞增殖和分化、凋亡、炎癥反應(yīng)等過程中，miR-181d 可誘導(dǎo)炎性因子釋放，較高水平表達(dá)可抑制炎癥抑制因子水平升高。而神經(jīng)元是由線粒體功能決定，過高水平miR-181d 表達(dá)會(huì)導(dǎo)致線粒體功能紊亂，進(jìn)而加劇神經(jīng)元損害[14-15]。因此，血清miR-181d 可通過調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥反應(yīng)，促進(jìn)NF-KB 信號(hào)傳導(dǎo)，影響神經(jīng)元，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)損傷，對(duì)其水平變化對(duì)神經(jīng)功能損失評(píng)估具有重要作用，同時(shí)可為臨床治療提供依據(jù)，這與相關(guān)研究中腦梗死患者血miR-128d 表達(dá)水平呈較低表達(dá)，且表達(dá)水平與腦梗死嚴(yán)重程度存在負(fù)相關(guān)的報(bào)道一致[16-17]。

而miR-210 是一種缺氧激活因子，在缺氧情況下minR 表達(dá)水平升高，若腦部損傷患者miR-210 表達(dá)下調(diào)則說明患者腦部損傷情況嚴(yán)重。近年來的研究也同樣表明[18-19]，miR-210 表達(dá)水平變化可反映腦部損傷情況，對(duì)于預(yù)后評(píng)估具有重要意義。并且血清miRNA 可被準(zhǔn)確檢測到，其miRNA 表達(dá)量具有作為腦梗死生物學(xué)標(biāo)志物的潛在價(jià)值，且血清檢測簡單方便，準(zhǔn)確性較高，具有臨床應(yīng)用價(jià)值較高[12,20-21]。由此可知，對(duì)腦梗死患者進(jìn)行血清miR-181d 和miR-210 檢測，可及時(shí)了解腦梗死病變情況，對(duì)于預(yù)防不良預(yù)后具有積極意義，并有助于臨床診斷和及時(shí)治療，有助于降低復(fù)發(fā)和死亡等不良事件發(fā)生，對(duì)提高患者生存質(zhì)量具有重要意義[22-23]。

另外，ROC 曲線結(jié)果顯示，血清miR-181d預(yù)測腦梗死預(yù)后不良的ROC 曲線下面積為0.76（95% CI：1.013～1.124），此時(shí)的敏感度和特異度分別為71.23%和73.45%。而血清miR-210 預(yù)測腦梗死預(yù)后不良的ROC 曲線下面積為0.79（95% CI：1.125～1.206），此時(shí)的敏感度和特異度分別為73.42%和75.36%，聯(lián)合檢測的ROC 曲線為0.83（95% CI：1.147～1.235），此時(shí)敏感度和特異度分別為79.33%和82.41%，說明血清miR-181d 和miR-210 對(duì)于腦梗死患者預(yù)后不良發(fā)生具有較好預(yù)測價(jià)值，其敏感度和特異度較好，可為臨床預(yù)防腦梗死發(fā)生提供可靠參考，并經(jīng)曲線證實(shí)其對(duì)預(yù)測腦梗死患者預(yù)后的敏感度高達(dá)70%以上，聯(lián)合檢測準(zhǔn)確性更好，可為臨床及時(shí)診斷和治療提供指導(dǎo)，有助于降低腦梗死預(yù)后不良事件的發(fā)生[24-25]，具有較高臨床預(yù)測價(jià)值。

綜上所述，血清miR-181d 表達(dá)量升高，血清miR-210 表達(dá)量降低是腦梗死患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，在預(yù)防腦梗死預(yù)后方面具有重要預(yù)測價(jià)值。