多發性骨髓瘤患者骨髓中CD56和CD117水平表達對評估疾病預后的價值

侯艷軍，張秋怡，單志娟，郜偉峰，周合冰（.首都醫科大學附屬北京潞河醫院血液科,北京 049； .內蒙古科技大學包頭醫學院基礎醫學與法醫學院，內蒙古包頭 04040）

多發性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）是一種惡性的漿細胞腫瘤，好發于中老年，分泌異常單克隆免疫球蛋白，從而引起一系列臨床表現：骨痛、貧血、腎功能損害[1-2]。白細胞分化抗原56（CD56）是一種神經細胞黏附分子，參與骨髓瘤細胞和基質細胞的相互作用，是漿細胞錨定在基質結構上的標志，對骨髓瘤的存活至關重要[3]。CD117 是一種具有酪氨酸激酶活性的造血生長因子受體，多表達于髓系祖細胞。在MM 患者中，CD117 的表達與MM 的特定致癌途徑有關[4]。在意義未明的單克隆免疫球蛋白血癥（monoclonal gammopathy of undetermined significance, MGUS）中CD117 和CD56 是表達陽性，隨著從MGUS 發展為MM，CD117 和CD56 的表達降低[5-6]。正常漿細胞CD56-CD117-，MM 患者 中CD56 和CD117 表達呈現高度異質性[7-8]。關于CD56 和CD117 在MM疾病預后評估中的意義尚不明確。因此本研究回顧性分析32 例初診的MM 患者的基本資料，研究MM患者骨髓瘤中CD56 和CD117 表達與疾病預后的關系，為MM 的早期診斷、預后判斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2019年12月～2020年12月在首都醫科大學附屬北京潞河醫院就診的32 例多發性骨髓瘤患者，其中男性19 例，女性13 例。中位年齡66 歲(47～85 歲)。MM 的診斷、分期及風險狀態均按照美國國家綜合癌癥網絡指南（NCCN）（2015年第 3 版，2017年第 3 版）[9-10]。取材時，患者均簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑 FACS Calibur 流式細胞儀、所有單克隆熒光抗體購自美國BD 公司；熒光原位雜交試劑購自上海睿昂生物技術有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標本采集與處理：治療前，抽取骨髓4 ml，肝素抗凝，采集過程嚴格無菌操作。

1.3.2 流式細胞術(FCM)檢測:取含106個細胞的骨髓液，加20μl 單克隆抗體，避光孵育后溶血15min，然后在四色流式細胞儀上分析100 000 個細胞，以SSC 與CD138 設門，圈定目標細胞群，分析漿細胞表面抗原表達情況。陽性判斷標準：膜抗原表達陽性率≥20%界定為該抗原表達陽性[11-12]。根據骨髓中CD56 和CD117 表達，分為CD56+CD117+，CD56+CD117-，CD56-CD117+和CD56-CD117-四組。

1.3.3 熒光原位雜交技術(FISH)檢測：肝素抗凝骨髓液，通過CDl38 磁珠分選法分離濃集骨髓瘤細胞，然后進行原位雜交。檢測探針位點包括TP53 標 記17q13，1q21 標 記1q21，FGFR3/IGH 檢測t （4 ；14）（p16 ；q32），MAF/IGH 檢測t（16；14）（q23；q32），CCND1/IGH 檢測t（11；14）（q13；q32）。每個標本分析500 個間期細胞，判讀標準：缺失、擴增、易位/融合采用的閾值是5%[13-14]。

1.3.4 其他臨床指標檢測：骨髓閱片計數骨髓瘤細胞，Helena Sife 3000 全自動電泳儀進行血清蛋白電泳檢測M 蛋白含量[15]。

1.4 統計學分析 采用SPSS 20.0 軟件進行統計學分析，數據以均數±標準差(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析。率的比較采用雙側卡方檢驗，以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MM 患者骨髓瘤細胞和M 蛋白含量 見表1。32 例MM 患者（9 例患者由于標本抽取原因，未能同時獲得骨髓瘤細胞數和免疫分型結果）中的23 例MM 患者骨髓瘤細胞的平均值為（26.61± 19.58）%，CD56-CD117-組骨髓瘤細胞明顯高于其他三組，差異有統計學意義（F=4.061，P=0.022）。32 例MM 患者中（11 例患者血清蛋白電泳無法定量M 蛋白含量）的21 例患者M 蛋白平均含量為（25.80±16.24）%，CD56-CD117+組明顯高于其他三組，差異有統計學意義（F=3.25，P=0.048）。

表1 多發性骨髓瘤患者骨髓瘤細胞和M 蛋白檢測結果[(±s)%]

表1 多發性骨髓瘤患者骨髓瘤細胞和M 蛋白檢測結果[(±s)%]

指標 CD56+CD117+ CD56+CD117- CD56-CD11+ CD56-CD11- F P 骨髓瘤細胞 12.1±7.3 24.4±5.9 5.5±2.8 36.6±23.9 4.061 0.022 M 蛋白 26.0±11.4 34.5±15.0 35.2±27.3 13.0±10.3 3.25 0.048?

2.2 MM 患者骨髓瘤細胞表面抗原表達 32 例MM 患者中（8 例患者由于骨髓干抽，未送檢流式細胞學檢測）的24 例MM 患者CD38 和CD138均為陽性，CD56+ 陽性率62.5%，CD117+ 陽性率33.3%，其中CD56+CD117+，CD56+CD117-，CD56-CD117+和CD56-CD117-組分別為6，9，2和7 例。

2.3 MM 患者熒光原位雜交（FISH）結果 見表2，3，4。32 例MM 患者中（10 例患者由于標本抽取原因，未能同時獲得FISH 結果和免疫分型結果）的22 例MM 患者，有7 例正常核型，15 例異常核型。TP53陽性4 例；1q21+陽性10 例；CCND1/IGH 陽性8 例；FGFR3/IGH 陽性4 例（有病例可出現3 種以上復雜核型）；未見MAF/IGH。TP53 陽性率在CD56-組（25.0%）顯著高于CD56+組（14.3%），差異有統計學意義（χ2=3.854，P=0.04）。而1q21+，CCDN1/IGH 在CD56+與CD56-中比較差異無統計學意義（χ2=3.127，0.057， 均P>0.05）。CD117+ 組 與CD117-組相比，TP53，1q21+和IGH 融合陽性率比較差異無統計學意義（χ2=0.323～2.677，均P>0.05）。TP53，CCDN1/IGH陽性率在CD56-CD117-組（33.3%，50.0%）明顯高于CD56+CD117+ 組（20.0% 和40%）和CD56+CD117-組（11.1%，33.3%），差異均有統計學意義（χ2=6.036～14.579，均P<0.05），CD56-CD117-組中有一例患者出現復雜核型：+8，-11，+16。

表2 CD56+組和CD56-組患者細胞遺傳學結果[%(n)]

表3 CD117+組和CD117-組患者細胞遺傳學結果[%(n)]

3 討論

多發性骨髓瘤是B 細胞來源的惡性腫瘤，隨疾病的進展，漿細胞表面抗原發生改變。正常漿細胞表面標志是CD38+，CDl38+，CD56-，CD117-；MM 患者CD56 和CD117 表達陽性率增加[16]。但是MM 患者的CD56 和CD117 表達在不同患者中呈現出高度的異質性。CD56 缺乏與漿細胞惡性腫瘤特征相關，當CD56 陽性率下降，細胞增殖旺盛，容易擴散[17]，更易出現腫瘤細胞的髓外浸潤。而CD117 與MM 的某致癌途徑相關，在MGUS 進展為MM 的過程中，CD117 和CD56 陽性率降低。

表4 CD56 和CD117 表達各組患者細胞遺傳學結果[%(n)]

本研究發現MM 患者CD56 陽性率為62.5%，CD117 的陽性率為33.3%，與SKERGET 等[18]研究發現CD56 表達率為71%的結果較一致。CD56-組骨髓瘤細胞比例明顯高于CD56+組，差異有統計學意義（P<0.05），且在CD56-和CD117-雙陰性組漿細胞比例更高，骨髓中存在較高腫瘤負荷，認為CD56-，CD117-可以作為患者預后不良的因素。

另一方面，TP53 是患者預后差最常見的遺傳學異常[19]。在初診MM 中約為10%，疾病后期比例逐漸增加，與髓外侵犯以及短生存期相關[20]。本研究發現TP53 陽性率在CD56-CD117-雙陰性組（33.33%）明顯高與其余三組（P=0.001），說明TP53 缺失與CD56-，CD117-存在某種聯系，均可作為預后不良的因素。此外，CCND1/IGH 陽性率在CD56-CD117-組明顯高于其余三組（P=0.049），并且出現復雜核型（>3 種異常核型），同樣證明CD56 和CD117 雙陰性時，出現CCND1/IGH，復雜核型的機率更高，患者預后不良。有研究[21]報道：CD56-及其高增殖活性與MM 患者染色體上MAF/IGH 有關，但是本研究并未發現MAF/IGH，FGFR3/IGH相關性，可能與本研究中病例較少有關。

綜上所述，CD56-和CD117-與高腫瘤負荷、不良的細胞遺傳學密切相關，通過上述三者的關系，證明CD56 和CD117 表達可以用于判斷預后，CD56+和CD117+是預后的良好標志，關于骨髓瘤細胞膜抗原的異常與基因異常的相關性，本研究未進行討論，在接下來的研究中可以擴大樣本量，增加其他分子指標進行探討，揭示MM 患者其他膜抗原的臨床意義。