孕婦血清親環(huán)素A和組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶水平檢測與子癇前期發(fā)生不良妊娠的相關(guān)性研究

薛 偉，易福凌，王 苗，王遼菊

（1.咸陽市第一人民醫(yī)院a.輸血科;b 檢驗科;c.婦產(chǎn)科,陜西咸陽712000； 2.西安市第一醫(yī)院檢驗科，西安710002）

子癇前期(preeclampsia,PE)是一種妊娠期高血壓疾病。PE 孕婦在妊娠20 周以后出現(xiàn)高血壓和蛋白尿等疾病。研究發(fā)現(xiàn)PE 可以引起多種母兒并發(fā)癥,是導致孕婦發(fā)生不良妊娠的主要原因[1-2]。目前的研究表明,親環(huán)素A(cyclophilin A,CYPA)可能參與PE 孕婦妊娠期高血壓的病理過程,高水平的CYPA 可能導致妊娠并發(fā)癥的發(fā)生[3]。目前認為組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,tTG)能夠促進細胞凋亡,加重血管內(nèi)皮損傷,tTG 水平的變化與PE 的病變進展有關(guān)[4]。本研究通過分析PE 孕婦血清CYPA 和tTG 水平的變化,旨在探討兩指標與PE 發(fā)病機制的相關(guān)性,并為PE 孕婦不良妊娠的風險評估提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機選擇 2018年1月～ 2020年1月在咸陽市第一人民醫(yī)院和西安市第一醫(yī)院就診的112 例PE 孕婦作為研究對象。納入標準：①單胎妊娠孕婦；②孕婦年齡20 ～40 歲；③孕前無糖尿病、血管性疾病、自身免疫性疾病、肝炎、腫瘤和炎癥,無吸煙和酗酒等不良嗜好。排除標準：①伴原發(fā)性高血壓者；②有心、肝、腎及內(nèi)分泌病史者；③胎膜早破者。依據(jù)妊娠結(jié)局將PE 孕婦分為正常妊娠組和不良妊娠組。正常妊娠組納入85 例患者,平均年齡29.38±2.97 歲,平均孕齡35.27±3.83 周；不良妊娠組納入27 例患者,平均年齡30.67±3.07歲,平均孕齡35.93±3.52 周。PE診斷標 準[5]：孕 20 周后出現(xiàn)舒張壓≥90 mmHg 和(或)收縮壓≥140 mmHg,尿蛋白≥0.3 g/24 h 或隨機尿蛋白陽性。選取51 例同期體檢健康孕婦作為對照組，平均年齡30.93±3.37 歲,平均孕齡35.71±3.63 周。三組研究對象的年齡及孕齡比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究通過咸陽市第一人民醫(yī)院和西安市第一醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準,并得到所有研究對象的知情同意。

1.2 儀器與試劑 血清tTG 和CYPA 水平檢測試劑盒分別購于上海晶抗生物工程有限公司和上海江萊生物科技有限公司,實驗過程嚴格按照試劑盒說明進行操作。采用飛利浦 IU22 型超聲診斷儀分析子宮動脈血流阻力狀況,設置探頭頻率為3.5MHz。

1.3 方法 收集所有研究對象的年齡、孕齡和血壓等資料，分析子宮動脈血流阻力狀況，采用免疫比濁法檢測24h 尿蛋白水平，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清tTG 和CYPA 水平。對所有研究對象進行隨訪,記錄母親及新生兒健康情況,若出現(xiàn)胎兒死亡、羊水污染≥III 度、胎兒宮內(nèi)窘迫、HELLP 綜合征、胎盤早剝、子癇、心衰及肺水腫,則認為存在不良妊娠。

1.3.1 標本采集: 所有研究對象于空腹狀態(tài)被采集靜脈血3ml,以3 000r/min 離心10min,提取上層血清用于tTG 和CYPA 水平分析。收集所有研究對象的24h 尿液用于檢測24h 尿蛋白水平。

1.3.2 子宮動脈血流阻力檢測: 患者取仰臥位,膀胱輕度充盈,在髂內(nèi)動脈1cm 處檢測雙側(cè)子宮動脈血流狀況。先自子宮下段兩側(cè)肌層與盆壁間找到兩側(cè)髂內(nèi)動脈,尋出左右兩側(cè)子宮動脈主干,獲取連續(xù)3 個形態(tài)一致且穩(wěn)定的血流頻譜,計算出左右兩側(cè)子宮動脈的血流阻力檢測參數(shù),包括搏動指數(shù)(pulsatility index,PI)和阻力指數(shù)(resistance index,RI),取平均值。

1.4 統(tǒng)計學分析 研究數(shù)據(jù)采用SPSS21.0 進行統(tǒng)計學分析,符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標準差(±s)表示。年齡、孕齡、收縮壓、24h尿蛋白水平、RI，PI，tTG 及CYPA 水平的組間比較采用單因素方差分析及q檢驗。不良妊娠發(fā)生率的組間比較采用卡方檢驗。PE 孕婦發(fā)生不良妊娠的危險因素采用Logistic 回歸分析。相關(guān)性分析采用Pearson 法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PE 孕婦不良妊娠分析 112 例PE 孕婦中27例發(fā)生不良妊娠,發(fā)生率為24.10%. 51 健康孕婦中沒有不良妊娠發(fā)生。PE 孕婦不良妊娠發(fā)生率明顯高于對照組(χ2=14.735，P=0.000)。

2.2 三組孕婦血清tTG 和CYPA 水平分析 見表1。與對照組比較,正常妊娠組和不良妊娠組的tTG(q=5.63，7.83) 和CYPA(q=5.12，6.77) 水 平明顯增高,不良妊娠組與正常妊娠組比較tTG 和CYPA 水平增高更顯著(q=6.29，5.43)，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0. 05)。

表1 三組孕婦血清tTG 和CYPA 水平分析(±s)

表1 三組孕婦血清tTG 和CYPA 水平分析(±s)

項目 對照組(n=51) 正常妊娠組(n=85) 不良妊娠組(n=27) F 值 P 值tTG(ng/ml) 7.21±1.13 10.68±1.67 13.35±2.35 100.061 0.000 CYPA(ng/L) 59.16±9.71 79.50±13.91 96.18±17.25 59.286 0.000

2.3 三組孕婦收縮壓、24h 尿蛋白水平及子宮動脈血流阻力分析 見表2。與對照組比較,正常妊娠組和不良妊娠組的收縮壓(q=4.35，6.27)及24h 尿蛋白水平(q=13.20，19.73)明顯增高,RI(q=4.57，6.49)及PI(q=9.41，13.74)明顯增大,不良妊娠組與正常妊娠組比較收縮壓、24h 尿蛋白、RI 和PI 水平增高或增大更顯著(q=5.64，14.52，4.28，4.59)，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。

表2 三組孕婦收縮壓，24h 尿蛋白水平及子宮動脈血流阻力分析(±s)

表2 三組孕婦收縮壓，24h 尿蛋白水平及子宮動脈血流阻力分析(±s)

項目 對照組(n=51) 正常妊娠組(n=85) 不良妊娠組(n=27) F 值 P 值收縮壓(mmHg) 113.96±7.51 149.16±8.83 170.29±9.27 589.380 0.000 24h 尿蛋白(g/L) 0.05±0.02 1.13±0.75 2.43±1.03 95.794 0.000 RI 0.52±0.07 0.63±0.12 0.70±0.13 30.094 0.000 PI 0.61±0.09 1.20±0.21 1.52±0.29 241.862 0.000

2.4 Logistic 回歸分析 見表3。Logistic 回歸分析顯示,收縮壓、24h 尿蛋白水平、RI, PI, tTG 和CYPA 均為 PE 孕婦發(fā)生不良妊娠的獨立危險因素(均P＜0.01)。

表3 多因素Logistic 回歸分析

2.5 相關(guān)性分析 正常妊娠組和不良妊娠組的tTG和CYPA 水平分別呈正相關(guān)性(r=0.793，0.812, 均P<0.01)。正常妊娠組的tTG，CYPA 水平分別與收縮壓、24h 尿蛋白水平、RI 及PI 有正相關(guān)性（rtTG=0.802，0.816，0.823，0.799， 均P<0.01；rCYPA=0.823，0.806，0.813 和0.805，均P<0.01）。不良妊娠組的tTG，CYPA 水平分別與收縮壓、24h尿蛋白水平、RI 及PI 有正相關(guān)性（rtTG=0.815，0.827，0.833，0.807，均P<0.01；rCYPA=0.831，0.812，0.824，0.817，均P<0.01）。

3 討論

子癇前期(PE)的發(fā)病機制目前尚未完全被闡述，但有學者認為,炎癥、內(nèi)皮功能損傷和氧化應激等因素是導致PE 的主要原因。研究認為氧化應激反應可誘導血管內(nèi)皮細胞損傷及胎盤灌注不足。這些過程可導致血管收縮功能增強及通透性增加,進而引起孕婦血壓升高和尿蛋白水平增加[6-7]。本研究Logistic 回歸分析結(jié)果顯示,收縮壓和24h 尿蛋白水平為 PE孕婦發(fā)生不良妊娠的獨立危險因素。目前PE 已被證實與孕婦死亡、早產(chǎn)、死胎和其他不良妊娠有關(guān)[8]。本研究的分析顯示PE 孕婦不良妊娠發(fā)生率明顯增高。研究表明,子宮動脈血流阻力狀況的變化與PE 孕婦不良妊娠相關(guān)[9-10]。本研究Logistic 回歸分析結(jié)果顯示子宮動脈的RI 和PI均為 PE 孕婦發(fā)生不良妊娠的獨立危險因素。進一步地分析發(fā)現(xiàn)PE 孕婦的PI 和RI 隨著病情加重明顯增大，這與相關(guān)文獻[10]的報道相符。提示通過分析孕婦子宮動脈血流阻力狀況可以預測PE 的發(fā)生，進而評估PE 孕婦發(fā)生不良妊娠的風險。

CYPA 是近年來發(fā)現(xiàn)的新型炎癥標志物。研究認為機體過度的氧化應激反應可誘導血管平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞及單核細胞等分泌過量的CYPA。CYPA 可進一步促進炎癥細胞聚集并導致血管內(nèi)皮細胞損傷。同時CYPA 還可抑制細胞內(nèi)膽固醇外流,增加泡沫細胞內(nèi)的膽固醇濃度,促進動脈粥樣硬化的形成,進而增加高血壓的發(fā)生風險[11]。目前CYPA 在PE 中的應用價值已被證實。研究發(fā)現(xiàn)PE孕婦孕早期CYPA 水平與正常孕婦相比明顯升高。CYPA 水平與收縮壓和24h 尿蛋白水平均呈正相關(guān)性[12]。本研究結(jié)果也印證了上述文獻的觀點。本研究進一步地分析顯示CYPA 水平與PE 孕婦子宮動脈的PI 和RI 有相關(guān)性。推測CypA 可能參與PE的發(fā)病機制。提示血清CYPA 水平的變化可能與PE 孕婦不良妊娠的發(fā)生相關(guān)。

tTG在人體內(nèi)的作用相當廣泛,其與惡性腫瘤、糖尿病和肝纖維化等疾病的發(fā)生有關(guān)[13]。相關(guān)研究認為腫瘤壞死因子及白細胞介素-6 等炎癥因子可能誘導tTG 的表達。PE 孕婦子宮的低氧暴露和炎癥狀態(tài)誘導胎盤合胞體滋養(yǎng)層分泌大量tTG[14]。提示tTG 可能與PE 的發(fā)生及病變進展有關(guān)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)PE 孕婦血清tTG 水平、收縮壓及24h尿蛋白含量均明顯高于對照組,且重度PE 孕婦明顯高于輕度患者。進一步的報道認為PE 孕婦血清tTG 水平與收縮壓及24 h 尿蛋白水平呈正相關(guān)性[15]。本研究對PE 孕婦的分析與上述文獻的結(jié)論相符。此外,本研究超聲分析的結(jié)果顯示PE 孕婦血清tTG 水平與子宮動脈的PI 和RI 有相關(guān)性。提示血清tTG 水平的差異性變化能反映PE 孕婦的血管內(nèi)皮損傷及PE 病情進展的程度。因此通過檢測血清tTG 水平可以為PE 孕婦不良妊娠的風險評估提供依據(jù)。

綜上所述,tTG 和CYPA 可能參與PE 的發(fā)病機制,且兩指標過量表達可能誘導妊娠高血壓和蛋白尿的發(fā)生,進而增加PE 孕婦不良妊娠的發(fā)生率。然而本研究僅分析了一個時間點的子宮動脈血流參數(shù)及血清tTG 和CypA 水平,并未分析其在不同孕周的動態(tài)變化情況。在后續(xù)的研究中將整理更多的數(shù)據(jù),以得到更有臨床價值的結(jié)論。