組織中蛋白激酶Cε表達對乳腺癌婦女臨床病理特點的影響

石瑞芳

（新鄉市第一人民醫院 病理科，河南 新鄉 453000）

乳腺癌是多發于女性的并呈逐年上升趨勢的乳腺上皮組織部位的惡性癌癥，據世界衛生組織（WHO）統計，乳腺癌在全球癌癥發病率中排名第二，死亡率排名第五［1］。乳腺癌患者的細胞連接較健康細胞能力弱。脫落后的乳腺癌細胞會通過血液及淋巴轉移到其他器官，形成新的癌癥，對人體造成危害［2］。隨著對乳腺知識的普及，越來越多的女性開始重視自己的乳腺健康問題，定期對乳腺進行檢測。在現有醫療水平下，能夠通過蛋白指標檢測來確診乳腺癌。蛋白激酶C（PKC）是檢測乳腺是否健康的指標之一。PKC 是需要依賴膜脂甘油二酯（DAG）和Ca2+的多功能絲氨酸和蘇氨酸，蛋白激酶Cε（PKCε）是一種新型PKC，PKCε 激活需要DAG、磷脂或佛酸酯［3］。本文通過免疫組化法檢測組織中蛋白激酶Cε 表達對乳腺癌婦女臨床病理特征的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集新鄉市第一人民醫院2016 年10 月至2018 年10 月的乳腺癌切除手術的標本113 例，包括非特殊型乳腺癌56 例，導管原位癌38 例，特殊型浸潤性乳腺癌19 例。按乳腺癌患者手術時間進行排序。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①成年女性，首次發病；②病理資料完整，按乳腺癌分期進行針對性治療；③在手術切除前未進行其他手段治療。排除標準：①患有其他惡性疾病的患者；②術后短期內死亡患者；③患有心腦血管疾病者。

1.3 方法

免疫組化法進行檢測兔抗人PKCε 多克隆抗體濃縮液（購自武漢Abbkine 公司）；DAB 顯色液購自北京梅科萬德公司。收集的新鮮乳腺癌組織，使用4% 福爾馬林固定14 h，石蠟包埋，切成5 μm 的薄片。利用Xylenes 脫蠟，水化10 min。將組織切片放置在枸櫞酸緩沖液高溫高壓作用15 min，冷卻到25℃左右，利用磷酸鹽緩沖液（PBS）和蒸餾水各清洗3 min/次，各兩次。山羊血清封閉，降低非特異性染色的概率。將多余血清倒出，加入一抗PKCε（1∶85 稀釋），冰箱4℃過夜，室溫下放置20 min，緩沖液5 min/次，共3次。加入二抗，緩沖劑洗3 次（3 min/次）；顯色3 min，流水沖洗10 min，復染，進行酒精梯度脫水，烤箱中烘烤3 min，封片。將乳腺癌陽性切片作為陽性對照，鼠免疫球蛋白G（IgG）及PBS 代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定

將乳腺癌組織切片在光強度和放大倍數（×400）一致的顯微鏡中，根據陽性細胞在全部組織細胞中所占比例以及陽性細胞染色強度判定實驗結果標注陽性細胞數記分。免疫組化判斷標準，見表1。

表1 免疫組化判斷標準

1.5 隨訪方法

兩組均以乳腺癌切除手術日期為零點時間，通過電話聯絡患者、記錄患者復查數據等方式，連續追蹤2 年，觀察腫瘤復發轉移及生存率的發生情況，計算6 個月、1 年和2 年生存率。

1.6 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計軟件進行數據處理。計數資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PKCε 在乳腺癌中的表達

PKCε 在56 例非特殊型乳腺癌中有51 例表達為陽性，陽性率達到91.07%，在38 例導管原位癌中有31 例為陽性表達，陽性率為81.58%，19 例特殊型浸潤性乳腺癌中有16 例為陽性表達，陽性率為84.21%，見表2、圖1。

圖1 PKCε 在乳腺中的表達

表2 113 例乳腺癌患者PKCε 蛋白表達 ［n(%)］

2.2 PKCε 在乳腺癌中的臨床病理特點

在72 例47～75 歲的患者中，有59 例的PKCε呈陽性表達，PKCε 蛋白在不同年齡段中表達差異有統計學意義（χ2=9.589,P=0.008）。在乳腺癌腫瘤直徑中，直徑>5 cm 的患者中有93.33% 的PKCε具有高表達。淋巴結轉移的乳腺癌患者有69 例，其中PKCε 蛋白具有高表達的患者有64 例，陽性表達率為92.75%，而未產生淋巴結轉移的患者有44 例，PKCε 蛋白的陽性表達率為75%，比較差異有統計學意義（χ2=6.967,P=0.030）。在TNM 分期中，Ⅲ～Ⅳ期患者34 例乳腺癌組織中，31 例PKCε具有高表達，陽性率達到91.18%，但與Ⅰ～Ⅱ期患者蛋白表達比較差異無統計學意義（χ2=1.139,P=0.286）。組織學分級為Ⅲ級的組織有31 例，其中22 例PKCε 具有高表達，陽性率達70.97%，三組組織學分析結果比較差異有統計學意義（χ2=7.818,P=0.020）。見表3。

表3 PCKε 與乳腺癌組織臨床病理特點的關系 ［n(%)］

2.3 PKCε 對乳腺癌患者生存率的影響

113 例乳腺癌患者2 年生存率為84.07%（95/113），PKCε 表達為陽性的2 年 生存率為85.57%（83/97），PKCε 表達為陰性的2 年生存率為75.00%（12/16）。Log-Rank 分析顯示，PKCε 表達為陽性的患者2 年生存率高于PKCε 表達為陰性的患者，差異有統計學意義（χ2=3.792,P=0.043），見圖2。

圖2 PKCε 對乳腺癌患者預后的影響

3 討論

乳腺癌已成為全球女性人群中患者人數最多的疾病［4］。因受生活方式改變及國家生育政策等的影響，乳腺癌呈現每年2%的增速，使中國成為乳腺癌增長率最快的國家之一［5］。雖然乳腺癌的發病情況呈現上升的趨勢，但其死亡率正呈現下降的趨勢。隨著乳腺癌早期檢測方法的不斷更新和對乳腺健康認識的增加，婦女能夠更早的采取治療措施。PCK 是將蛋白質磷酸化的酶，這會造成癌細胞的凋亡過程受到影響，使細胞生存時間增長，進而通過血管轉移到其他健康組織。有實驗表明［6］在乳腺癌細胞中PKC 表達水平明顯高于健康乳腺細胞。內分泌紊亂和免疫能力下降是形成乳腺癌的因素，而PKCε 主要活躍在內分泌系統和免疫系統中。因此，本實驗通過對乳腺癌婦女切除組織中PKCε 的表達，了解其與臨床病理之間的關系。

PKCε 在56 例非特殊型乳腺癌中有51 例表達為陽性，陽性率達到91.07%。在38 例導管原位癌中有31 例為陽性表達，陽性率為81.58%。113 例乳腺癌患者的切除組織中，不同年齡段之間存在較大差異，大部分集中在47～75 的年齡范圍內。證明PKCε 在乳腺癌增殖表達不明顯。有研究說明，PKCε 能有效調節生理功能，能夠激活免疫系統，調節炎性反應等［7］。有研究表明，PKCε 在前列腺細胞中的表達水平較高，在前列腺癌細胞中的表達降低，說明其具有原癌基因的作用［8］。PKCε 與臨床病理特點之間具有聯系，陽性表達較陰性表達高，說明能夠成為乳腺健康檢查的檢測指標，為乳腺癌檢測提供新的標志物。有研究指出，在結腸癌細胞中PKCε 觸發能夠改變細胞的增殖。如果抑制PKCε 的高表達，就能夠抑制乳腺癌的發生。

綜上所述，組織中蛋白激酶Cε 的表達升高與乳腺癌的患者的年齡、腫瘤直徑、TNM 分期及淋巴結轉移之間具有相關性，PKCε 的表達水平能夠成為檢測乳腺癌的重要標注。