胎盤組織中AQP-9、HIF-1α表達(dá)水平與子癇前期患者病情程度的關(guān)聯(lián)性分析

高艷麗

（汝州市人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科，河南 汝州 467599）

子癇前期是臨床常見婦產(chǎn)科疾病，具有顯著高血壓、蛋白尿的特點(diǎn)，發(fā)病率約為2%～8%，在發(fā)展中國家成為威脅產(chǎn)婦與新生兒死亡的重要原因，也是導(dǎo)致母體繼發(fā)糖尿病、心腦血管疾病的危險(xiǎn)因素［1］。但目前子癇前期的具體發(fā)病機(jī)制尚不明確，唯一途徑是通過分娩的胎盤組織進(jìn)行病理檢查，探究其發(fā)生發(fā)展機(jī)制［2］。胎盤含氧量會(huì)直接參與滋養(yǎng)細(xì)胞生理病理改變，水通道蛋白-9（AQP-9）是新發(fā)現(xiàn)跨膜蛋白質(zhì)，能調(diào)控自由水被動(dòng)跨生物膜轉(zhuǎn)運(yùn)作用，在細(xì)胞分化遷移過程中發(fā)揮重要作用，加速滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致胎盤組織缺血缺氧［3］；而缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）能在缺氧條件下通過調(diào)節(jié)靶基因血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)錄參與調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖浸潤能力參與病理過程［4］。本研究選取汝州市人民醫(yī)院子癇前期患者112 例，旨在探討胎盤組織中AQP-9、HIF-1α 表達(dá)水平與病情程度相關(guān)性。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

回顧性采集2019 年12 月至2020 年12 月汝州市人民醫(yī)院112 例子癇前期患者及90 例同期健康妊娠產(chǎn)婦的臨床資料，其中子癇前期患者年齡25～38 歲，平均（29.58±2.18）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）18.4～27.2 kg/m2，平均（23.16±1.89）kg/m2。健康妊娠產(chǎn)婦年齡24～39 歲，平均（30.02±2.21）歲；BMI18.5～27.0kg/m2，平均（22.96±1.91）kg/m2。兩者基線資料（年齡、BMI）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 選例標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：子癇前期患者妊娠20 周后收縮壓（SBP）/舒張壓（DBP）≥140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）；24 h 尿蛋白≥0.3 g 或隨機(jī)尿蛋白測(cè)試為陽性；均伴有水腫、胸悶、頭暈頭痛、惡心嘔吐、上腹部疼痛；均為單胎妊娠且胎兒健康無異常；同期健康妊娠產(chǎn)婦無任何妊娠期合并癥；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：孕前合并嚴(yán)重心肺功能不全；伴有胎盤早剝、先兆流產(chǎn)、胎盤前置等妊娠并發(fā)癥；胎兒染色體異常；宮內(nèi)死胎；合并糖尿病、原發(fā)性高血壓；合并免疫缺陷性疾病、肺結(jié)核、甲狀腺功能亢進(jìn)、慢性腎炎等重要臟器功能障礙。

1.3 方法

①胎盤組織采集：產(chǎn)婦娩出胎兒后，立即取半徑5 cm 范圍內(nèi)胎盤母體面中央?yún)^(qū)域，大小為1 cm×1 cm×1 cm，并避免梗死、鈣化、出血區(qū)域，采用4℃生理鹽水沖洗血污，放置于無菌、無核酶EP管中，并立即采用液氮冷凍處理，然后將胎盤組織轉(zhuǎn)移至溫度為-80℃的冰箱中保存，擇期測(cè)定AQP-9 信使核糖核酸（mRNA）、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平。②胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平測(cè)定：將液氮中冷凍的胎盤組織加入1 mL Trizol，并研磨為粉末狀，提取胎盤組織中總核糖核酸（RNA），然后檢測(cè)RNA 含量與純度；采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄處理得到互補(bǔ)脫氧核糖核酸（cDNA），并對(duì)引物序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法檢測(cè)胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)量，反應(yīng)體系為20 μL，反應(yīng)程序?yàn)?0 min 95℃預(yù)變形、15 s 90℃變性、10 s 60℃退火、15 s 95℃延伸，共計(jì)40 個(gè)循環(huán)；以β-actin 作為內(nèi)參，各基因引物序列如下：AQP-9 上游引物為5'-CTCCTGATTATTGTC ATTGC-3'，下游引物為5'-ATCCACCAGAAGTrGTI T-3'；HIF-1α 上游引物為5'-CAGCTATTTGCGTGT GAGGA-3'，下游引物為5'-CCAAGCAGGTCATAGG TGGT-3'；內(nèi)參β-actin 上游引物為5'-TGACGTGGA CATCCGCAAAG-3'，下游引物為5'-CTGGAAGGTG GACAGCGAGG-3'。最終采用2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)基因表達(dá)量。③病情程度評(píng)估：妊娠20 周后SBP/DBP為（140/90～160/110）mmHg、24 h 尿蛋白為（0.3～2.0）g 或隨機(jī)尿蛋白為陽性（+）、伴有上腹部不適、頭痛、視力模糊等癥狀為輕度子癇前期；SBP/DBP>160/110 mmHg、24 h 尿蛋白為>2.0 g 或堆積尿蛋白為陽性（++）、血清肌酐>106 μmol/L、血小板<100×109/L、出現(xiàn)微血管溶血、血清谷丙轉(zhuǎn)苷酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶>40 u/L、伴有持續(xù)性疼痛或其他腦神經(jīng)、視覺障礙、持續(xù)性上腹部不適為重度子癇前期。

1.4 觀察指標(biāo)

①比較子癇前期患者、健康妊娠產(chǎn)婦胎盤組織 中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平。②比較不同臨床特征子癇前期患者胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平。③采用Spearman 相關(guān)系數(shù)模型分析胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平與病情程度關(guān)聯(lián)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，行t檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)系數(shù)模型，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胎盤組織中AQP-9、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較

子癇前期患者胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平高于健康妊娠產(chǎn)婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較（）

表1 胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較（）

2.2 不同臨床特征胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較

不同年齡、BMI、生產(chǎn)經(jīng)歷、孕周、子癇前期家族史患者胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；重度子癇前期患者胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平高于輕度子癇前期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 不同臨床特征胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較（）

表2 不同臨床特征胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較（）

續(xù)表2 不同臨床特征胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較（）

續(xù)表2 不同臨床特征胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平比較（）

2.3 胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA表達(dá)水平與病情程度關(guān)聯(lián)性

經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析，子癇前期患者胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平與病情程度呈正相關(guān)（r1=0.539,P1=0.028；r2=0.615,P2=0.033）。

3 討論

子癇前期重要生理病理表現(xiàn)為滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力降低，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜浸潤缺乏，螺旋動(dòng)脈重鑄障礙，損傷全身血管內(nèi)皮，但具體發(fā)生發(fā)展機(jī)制需進(jìn)一步研究探討［5］。

本研究采用PCR 法測(cè)定胎盤組織中AQP-9、HIF-1α 表達(dá)水平進(jìn)行分析，結(jié)果顯示子癇前期患者AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 水平高于健康妊娠產(chǎn)婦（P<0.05）。其中AQP-9 是水甘油通道亞族中成員，在女性生殖系統(tǒng)中的子宮、胎盤、胎膜、輸卵管中均有表達(dá)［6］；且會(huì)參與滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡進(jìn)程，調(diào)控機(jī)體能量代謝與滲透壓平衡，對(duì)卵泡發(fā)育、囊胚形成、分娩過程均具有一定影響，會(huì)導(dǎo)致胎盤缺氧［7］。而與正常妊娠產(chǎn)婦比較，子癇前期患者胎盤組織中滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞的凋亡明顯增加［8］。據(jù)此筆者猜測(cè)AQP-9 與胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡有關(guān)。而缺氧環(huán)境對(duì)于細(xì)胞滋養(yǎng)層侵入至母體蛻膜必不可少，而HIF-1α 在缺氧條件下會(huì)調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因的轉(zhuǎn)錄，抵抗血管生成，并誘導(dǎo)靶基因轉(zhuǎn)錄，作為低氧應(yīng)答反應(yīng)的調(diào)控中心［9］。在子癇前期患者中會(huì)發(fā)生明顯全身性小血管痙攣，影響灌流供血，導(dǎo)致局部組織缺氧，增加胎盤組織中HIF-1α 表達(dá)，從而改善組織對(duì)缺氧耐受性［10］。本研究為進(jìn)一步探究其檢測(cè)價(jià)值，對(duì)二者與病情程度關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示重度子癇前期患者胎盤組織中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平高于輕度子癇前期患者，且AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表達(dá)水平與病情程度呈正相關(guān)（P<0.05）。對(duì)于重癥子癇前期患者，胎盤會(huì)長(zhǎng)期持續(xù)性處于缺氧狀態(tài)下，滋養(yǎng)細(xì)胞中血紅蛋白結(jié)構(gòu)會(huì)進(jìn)一步發(fā)生變化，顯著增加氧化呼吸鏈中活性氧，促進(jìn)AQP-9、HIF-1α 表達(dá)進(jìn)一步增加，呈現(xiàn)明顯關(guān)聯(lián)性［11-12］。據(jù)本研究結(jié)果推測(cè)，AQP-9、HIF-1α 參與子癇前期的發(fā)生發(fā)展，其轉(zhuǎn)錄表達(dá)會(huì)對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤產(chǎn)生一定影響，可推動(dòng)臨床病理學(xué)研究進(jìn)步，有望為子癇前期治療提供科學(xué)性指導(dǎo)，具有重要意義。

綜上所述，子癇前期患者胎盤組織中AQP-9、HIF-1α 表達(dá)水平會(huì)明顯異常升高，且與病情程度密切相關(guān)，為子癇前期的臨床病理研究提供理論依據(jù)。