ARNT調(diào)控低氧通路促進(jìn)小鼠骨骼肌再生的實(shí)驗(yàn)研究

李玢，張譽(yù)騰，魯峰

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院整形美容外科，廣州 510515

骨骼肌的損傷修復(fù)是臨床治療的一大難題，研究證實(shí)低氧通路活性與骨骼肌再生能力密切相關(guān)[1]。低氧誘導(dǎo)因子（hypoxia inducible factor，HIF）以及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子A（vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A）等被認(rèn)為是促進(jìn)肌肉再生的重要因素[2,3]。當(dāng)外界氧氣含量下降時，活性HIF-1α轉(zhuǎn)移到胞核內(nèi)，與HIF-1β結(jié)合形成特定的低氧應(yīng)答元件，可以激活下游對血管生成、紅細(xì)胞生成等重要基因的表達(dá)，從而恢復(fù)機(jī)體微環(huán)境的氧代謝平衡[4]。HIF-1α和HIF-2α進(jìn)入細(xì)胞核的過程，以及異二聚體結(jié)合誘導(dǎo)缺氧相關(guān)基因的表達(dá)都是需要與芳基烴受體核轉(zhuǎn)運(yùn)子（aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator，ARNT）相結(jié)合的。ARNT即HIF-1β，屬于堿性螺旋環(huán)螺旋helix-loop-helix（bHLH）-Per-ARNT-Sim家族[5]。ARNT作為一個重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)器，已經(jīng)被證實(shí)參與器官發(fā)生，神經(jīng)發(fā)育，以及胎兒生長受限中的血管化受損，并與癌、糖尿病、黑色素瘤等疾病密切相關(guān)[6,7]。但在骨骼肌再生過程中，ARNT的作用尚未得到評估。本課題圍繞ARNT在骨骼肌老化及再生過程中的作用及機(jī)制進(jìn)行深入研究，探索改善骨骼肌再生能力的方法。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 幼齡組C57BL/6小鼠48只（8～10周、雌雄各半），老齡組C57BL/6小鼠48只（22～24個月、雌雄各半）。環(huán)境恒溫、恒濕，每籠飼養(yǎng)小鼠不超過5只，12 h晝夜規(guī)律交替，小鼠可隨意取食、飲水。

本實(shí)驗(yàn)使用了可誘導(dǎo)的Cre-lox小鼠品系。ARNTfl/fl小鼠曾被用作高效敲除組織特異性的ARNT相關(guān)實(shí)驗(yàn)的動物模型[8]。首先，將轉(zhuǎn)基因的老鼠品系A(chǔ)RNTfl/fl小鼠與可調(diào)控的、其骨骼肌中表達(dá)含人骨骼肌肌動蛋白α-actin（HSA）-Cre ER基因的Cre小鼠進(jìn)行雜交，獲得一個新的轉(zhuǎn)基因小鼠品系?！?br>