原癌基因蛋白質c-Myc及骨膜蛋白在腦膠質瘤中的表達及與腫瘤侵襲轉移的相關性

陳 璐，喬建新，王鵬飛

腦膠質瘤是大腦或脊髓膠質細胞癌變產生的常見顱腦原發(fā)腫瘤，起源于神經(jīng)上皮，且大多數(shù)為惡性腫瘤，發(fā)病率占顱腦腫瘤的36%～63%[1-2]。腦膠質瘤的惡性程度高，侵襲力強，目前對腦膠質瘤的治療主張術后同步放療或者化療，但是手術治療風險高，難以完全清除，容易復發(fā)。隨著分子生物學技術的不斷發(fā)展，原癌基因蛋白質c-Myc及骨膜蛋白在腦膠質瘤中的表達引起了諸多學者的注意，有研究發(fā)現(xiàn)在高級別膠質瘤樣本中，骨膜蛋白呈高表達，c-Myc也發(fā)生表達異常，認為二者的表達變化與膠質瘤惡性程度的關系密切[3-4]。因此，本研究觀察c-Myc及骨膜蛋白在腦膠質瘤中的表達及與腫瘤侵襲轉移的相關性，旨在為腦膠質瘤的臨床診斷及預后評估提供參考。現(xiàn)將研究結果報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2017年2月—2018年10月我院行腫瘤切除術的腦膠質瘤82例作為研究組，其中男49例，女33例；年齡39～74(47.35±6.23)歲；病程1～24(12.16±5.84)個月。根據(jù)WHO膠質瘤分級[5]分為：低級別組(Ⅰ～Ⅱ級，惡性程度低)32例、高級別組(Ⅲ～Ⅳ級，惡性程度高)50例。①納入標準：均為原發(fā)腦膠質瘤，符合腦膠質瘤的臨床診斷標準[6]，且經(jīng)CT、MRI及術后病理檢查確診；術前未行放化療；均無遠處轉移。②排除標準：有血液系統(tǒng)疾病者；有其他惡性腫瘤者；有臟器功能異常者；有免疫系統(tǒng)疾病或結締組織病變者。另選取同期于我院行顱內減壓手術的腦外傷60例作為對照組，均經(jīng)CT和MRI等影像學檢查證實無任何腫瘤性疾病，其中男37例，女23例；年齡38～73(48.01±5.97)歲。研究組與對照組的基本資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準執(zhí)行。

1.2方法 c-Myc及骨膜蛋白均采用免疫組織化學染色法檢測[7]。將研究組腦膠質瘤組織及對照組正常腦組織均使用4%甲醛固定24 h，石蠟包埋后保存至4 ℃冰箱中，制備厚度為3～4 μm的連續(xù)切片，嚴格按照說明書予以二甲苯脫蠟，然后置于蒸餾水中，抗原修復液進行抗原修復，室溫孵育30 min，滴加一抗稀釋液，4 ℃過夜，甩除一抗，加入二抗，常溫孵育30～40 min后甩除二抗，在顯微鏡動態(tài)觀察下DAB顯色，注意保證每個切片顯色時間一致。DAB顯色劑與SP試劑盒均購自上海研生實業(yè)有限公司。免疫組織化學檢測結果判定均由專業(yè)病理科醫(yī)務人員進行，c-Myc及骨膜蛋白免疫染色后主要定位于細胞核，出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，反之則為陰性。隨機選取5個視野，記錄視野中陽性腫瘤細胞數(shù)，計算在1000個腫瘤細胞中染色陽性所占比例，根據(jù)其百分比判斷著色程度分級，共分為4個等級[8]：①陽性細胞率<10%為陰性；②陽性細胞率≥10%，且≤40%為弱陽性；③陽性細胞率>40%，且≤70%為中度陽性；④陽性細胞率>70%為強陽性。陽性率=(弱陽性+中度陽性+強陽性)/總例數(shù)×100%。

1.3觀察指標 比較c-Myc及骨膜蛋白在兩組及不同級別腦膠質瘤中表達的差異，分析c-Myc及骨膜蛋白與腫瘤侵襲轉移的相關性。

2 結果

2.1研究組和對照組c-Myc表達比較 研究組c-Myc表達陽性率高于對照組(P<0.01)。見表1。

表1 腦膠質瘤組織和腦外傷正常腦組織兩組c-Myc表達比較[例(%)]

2.2研究組和對照組骨膜蛋白表達比較 研究組骨膜蛋白表達陽性率高于對照組(P<0.01)。見表2。

表2 腦膠質瘤組織和腦外傷正常腦組織兩組骨膜蛋白表達比較[例(%)]

2.3不同級別腦膠質瘤組織c-Myc表達比較 高級別組c-Myc表達陽性率高于低級別組(P<0.05)。見表3。

表3 不同級別腦膠質瘤組織c-Myc表達比較[例(%)]

2.4不同級別腦膠質瘤組織骨膜蛋白表達比較 高級別組骨膜蛋白表達陽性率高于低級別組(P<0.01)。見表4。

表4 不同級別腦膠質瘤組織骨膜蛋白表達比較[例(%)]

2.5c-Myc、骨膜蛋白與腫瘤侵襲轉移的關系 Pearson直線相關分析發(fā)現(xiàn)，c-Myc和骨膜蛋白與腫瘤的侵襲轉移均呈顯著正相關(r=0.561和0.615，P=0.002和0.001)。見圖1。

3 討論

腦膠質瘤屬于常見的腦部惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展與基因及細胞因子共同作用有關，故通過基因及細胞因子檢測，發(fā)現(xiàn)腦膠質瘤早期診斷標志物是目前的主要研究方向[9]。

c-Myc是體內重要的原癌基因蛋白質，其表達產物功能多樣，參與了細胞的調控、增殖、分化及代謝活動，c-Myc在組織內呈現(xiàn)不表達和低表達屬于正常范圍，但在過度表達時會誘導正常細胞惡性轉化甚至凋亡[10-11]。研究證實，c-Myc和骨膜蛋白具有促進細胞凋亡的作用，在胃癌、宮頸癌等腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達，對腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重大影響[12]。據(jù)相關研究報道，c-Myc表達異常會破壞細胞內的控制系統(tǒng)，導致細胞增殖失去控制，促進細胞的轉化和腫瘤的進展[13]。故控制c-Myc基因編碼蛋白含量對維持細胞正常功能具有重要作用[14]。

骨膜蛋白是一種細胞外基質蛋白，最早在小鼠成骨細胞系中發(fā)現(xiàn)，又稱為成骨細胞特異性因子-2[15-16]。據(jù)文獻報道，骨膜蛋白通過與腫瘤細胞受體相結合進而調控腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，其高表達與胰腺癌、胃癌等腫瘤的侵襲性相關[17]。有學者認為，骨膜蛋白對細胞的黏附和遷移至關重要，很可能促進腫瘤細胞的侵襲轉移，是一個能夠預測腫瘤侵襲轉移和患者預后的重要蛋白[18-19]。基于此，本文比較腦膠質瘤組織及腦外傷正常腦組織中c-Myc和骨膜蛋白的表達水平，結果顯示研究組c-Myc和骨膜蛋白表達陽性率均高于對照組，說明c-Myc和骨膜蛋白在正常腦組織中不表達或低表達，而在腦膠質瘤組織中高表達。本研究還發(fā)現(xiàn)，在不同級別腦膠質瘤組織中，高級別組c-Myc和骨膜蛋白表達陽性率均高于低級別組，說明c-Myc和骨膜蛋白表達水平越高，腦膠質瘤患者的病情越嚴重。另外，在相關性研究中發(fā)現(xiàn)，c-Myc和骨膜蛋白與腫瘤侵襲轉移均呈正相關，說明c-Myc和骨膜蛋白表達水平越高，腫瘤發(fā)生侵襲轉移的可能性越大，這與既往報道結果相符合[20]。分析其中原因，可能是c-Myc的高表達導致細胞增殖失去控制，激活了與細胞增殖分化有關的基因，加速膠質瘤細胞增殖；同時骨膜蛋白在腦膠質瘤發(fā)生和發(fā)展過程中能夠調控膠質瘤的發(fā)展狀態(tài)，參與膠質瘤的間質轉化過程，二者對腦膠質瘤患者的早期診斷及預后評估具有重要意義。

綜上所述，c-Myc及骨膜蛋白在腦膠質瘤中呈現(xiàn)高表達，并且與腫瘤侵襲轉移呈正相關，通過檢測c-Myc及骨膜蛋白表達水平，可為患者病情、預后評估提供參考。