膠體金免疫層析技術在食品快速檢測中的應用

◎ 宋 姣，何婷婷 ，齊冬琴

（1．新正檢驗檢測有限公司，新疆 烏魯木齊 830000；2．烏魯木齊海關技術中心，新疆 烏魯木齊 830063）

隨著時代的發展，食品安全已經成為社會各界高度重視的問題。就目前食品安全現狀來看，世界各國均存在不同程度的食品安全問題，造成嚴重的經濟損失。為提高食品安全性，保障人們的身體健康，各種食品安全檢測技術被廣泛應用于食品檢測中。通過快速且便捷的食品安全檢測技術，人們能在最短時間內實現對食品的檢測，減少食品安全事故的發生。免疫層析技術屬于獨特的免疫分析方法，最早出現于20世紀80年代初。膠體金是氯金酸在檸檬酸三鈉及白磷共同作用下聚合成金顆粒，受靜電作用形成的穩定膠體溶液。膠體金免疫層析方法的操作簡單，有較強的靈敏性。

1 膠體金免疫層析技術的原理及特征

1.1 膠體金免疫層析技術原理

隨著科學技術的發展，多種檢測技術被應用于食品檢測中。其中，膠體金免疫層析是一種新穎的技術手段。膠體金在學術領域中，也稱之為氯金酸水溶液。是將膠體金與檸檬酸三鈉、白磷相結合，基于還原和聚合反應，形成大小合適的顆粒。在靜電作用下，顆粒性質會發生改變，形成電子密度高、穩定性比較好的膠體溶液[1]。顆粒聚集的密度若超過規定閾值上限，表面會形成直徑較大的紅色斑點。檢測人員通過肉眼即可觀察到紅色斑點的數量，從而得出相應的檢測結論。

1.2 膠體金免疫層析技術特征

通過對膠體金免疫層析的分析，發現該技術具有鮮明的特征。①檢測范圍廣泛[2]。該技術作為新穎技術，能夠檢測食品中的農藥、真菌霉素及微生物情況，對各種動物流感性疾病可進行快速診斷，檢測范圍廣泛。②操作簡單快捷。膠體金免疫層析的操作流程簡化，并不需要使用特殊或是大型設備，只需要定量分析被檢測食品的樣品，綜合處理數據資料，便可獲取藥物檢測的結果。③檢測靈敏度高。在應用膠體金免疫層析時，多以單抗體克隆美酶原抗體方式，對酶實施抗原標記。通過對酶抗原決定簇的作用，可提高靈敏度。④攜帶方便。膠體金免疫層析檢測時，以試紙為主。試紙的化學穩定性良好，檢測卡的重量較小，方便攜帶。

2 食品快速檢測中膠體金免疫層析技術的應用

2.1 檢測食品農藥殘留

隨著人們生活質量的改善，食品類型日益多樣[3]。部分生產養殖者為獲取更多效益，未能合理控制用藥量，導致不少深加工食品中也存在農藥或獸藥殘留，威脅消費者的身體健康。膠體金免疫層析技術可應用于食品農藥殘留檢測中，該方法操作簡單快捷。在檢測牛奶中的氟喹諾酮類藥物殘留時，應用膠體金免疫層析技術檢測時間短、效率高。膠體金免疫層析技術與三聚氰胺藥物無交叉反應，檢測準確性較高。在溫度為4 ℃的環境中，測試紙的保存期限為1年。膠體金免疫層析預處理內容簡單方便，特異性和靈敏性均較強。磺胺類藥物主要用于治療動物感染，該藥物會殘留在動物體內，提高細菌耐藥性。消費者若長期食用該藥物殘留的動物食品，可能會出現白細胞減少的癥狀，或引發皮炎疾病。以牛初乳為例，采用膠體金免疫層析技術檢測牛初乳時，可將IgG 作為檢測的依據。通過檢測結果中的IgG 含量，對牛初乳中生物活性物質的含量加以評估。通常來說，IgG 與生物活性物質的含量呈正相關[4]。檢測時，檢測人員可將IgG作為競爭抗原，利用膠體金對IgG 進行標記，于紙條捆扎墊完成涂層，同時固化自制的免疫抗牛IgG 抗體，通過比較得到牛初乳的IgG 水平。

2.2 檢測非食品添加成分

在食品生產加工中，不少食品生產商家為了牟取暴利，并未遵守國家食品衛生安全法律規定，將各種非食品添加成分添加到食品中，對消費者的身體健康和生命安全造成較大威脅。對于非食品添加成分如羅丹明的檢測，一般可采用高效液相色譜法[5-6]。高效液相色譜法檢測精準度較高，但檢測范圍相對狹窄，設備比較昂貴，且操作流程相對復雜。在此種情況下，應用膠體金免疫層析技術可有效解決上述問題。①在檢測乳制品中的三聚氰胺過程中，可主要采用的是競爭抑制免疫層析原理。具體來說，是將帶有膠體金標記的檢測試劑融入含有三聚氰胺的樣品溶液中，使三聚氰胺樣品溶液與特異性抗體結合，實現對抗體、試紙條檢測線上抗原結合的抑制，致使檢測線顏色發生變化。通過比較質控線的顏色深淺程度，對樣品中的三聚氰胺含量加以判斷，明確乳制品中含有的三聚氰胺含量是否與國家標準相符，以此降低乳制品中的非食品添加成分的添加分風險。一般來說，在常溫的狀態下，生鮮奶容易發生酸敗，因而最好在12 h 內完成檢測。對于保存到冰箱中的生鮮奶，可在48 h 內完成檢測。②對食物中的克倫特羅進行檢測時，可采用克倫特羅快速檢測試劑卡。在檢測時，可采用勻漿和離心的方式處理樣品，在樣品孔中滴入上清液，促使膠體金標記抗體與克倫特羅相結合，將其抗原結合位點封閉，避免金標抗體與克倫特羅蛋白偶聯物結合。若樣品中的克倫特羅含量超出檢測的限定值時，檢測線無紅色條帶，結果提示為陽性。若含量未超出檢測的限定值，檢測線有紅色條帶，結果提示為陰性。③在對動物組織中的沙丁胺醇檢測時，其檢測原理與克倫特羅的檢測原理基本相同。只不過沙丁胺醇含量超出檢測的限定值，則檢測線不顯色，結果提示為陽性，反之則顯色，提示為陰性。綜上所述，通過定性檢測，膠體金免疫層析技術可判別食品中是否含有非添加劑成分。

2.3 檢測食品霉菌毒素

膠體金免疫層析技術還能被應用于食品霉菌毒素檢測中。霉菌會產生霉菌毒素，危害動物和人體健康[7]。霉菌毒素的毒性較強，且污染范圍相對廣泛。采用膠體金免疫層析對食品中的霉菌毒素進行檢測，其檢測準確率與高效液相色譜法的檢測結果一致率較高。由此可以看出，膠體金免疫層析可有效應用到食品霉菌毒素檢測中。在檢測豆腐乳、黃豆醬等食品中的黃曲霉素時，發現鑒定結果準確性較高[8]。為了有效實現對不同物質中黃曲霉素的檢測，膠體金免疫層析技術下，毒素的檢出限是10 ng·mL-1，檢測時間在15 min左右。若在單克隆抗體中應用銀顯影液增強標記，能夠使限值降低至1.25 ng·mL-1。從實驗結果來看，膠體金免疫層析的交叉反應率偏低。

2.4 檢測食品致病菌

食品中常見的致病菌有沙門氏菌、大腸桿菌和布魯氏菌。對此類致病菌進行檢查時，通常以生化鑒定和分離為主[9]。但是，生化鑒定與分離的操作流程復雜，特異性和靈敏性也相對偏低。氣相色譜法、高效液相色譜法在食品致病菌檢測中的效果較好，但是檢測設備成本較高，檢測速度較慢。而膠體金免疫層析技術應用于食品致病菌檢測，則能夠有效避免上述問題。膠體金免疫層析技術可及時對金黃色葡萄球菌進行檢測，檢測的靈敏度相對較高，可將其應用于食品致病菌檢測中。

2.5 檢測食品中的違禁藥品

嗎啡、可卡因等均是常見的違禁藥品，屬于小分子物質，嚴禁添加到食品中[10]。但在食品生產加工過程中，存在部分不良商家將違禁藥品添加其中，威脅消費者的生命安全。調查發現，部分餐飲店為了提高自身營業額，吸引消費者，通常會在出售的食品中添加使人上癮的罌粟殼等，威脅消費者的身體健康。例如，不良商家會將嗎啡或可卡因等違禁藥品添加到麻辣燙、米線中，使消費者上癮，提升購買次數。因而在檢測食品中的違禁藥品時，可應用膠體金免疫層分析法，判斷出違禁藥品在食品中的添加量。具體檢測時，可利用檸檬酸三鈉制備膠體金，確定磺胺甲嗪含量。若檢測結果超過正常含量，提示食品中有嗎啡可卡因等違禁藥品，應要求商家停止售賣，責令其整改。從整體角度來看，膠體金免疫層析技術的檢測準確性較高。

3 結語

在食品安全快速檢測中，應用膠體金免疫層析技術可取得顯著效果。膠體金免疫層析技術操作快捷，結果顯示比較直觀，且不會產生污染，適用于大批量的食品檢測。但就我國膠體金免疫層析的應用現狀來看，其尚處于初級階段，有待未來的進一步發展。