Ki-67、P16、Pin1在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

陳婷婷，任曉燕，楊棹霞，陶玉梅，袁明明，黃國(guó)琴

宮頸癌是常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，其發(fā)展是多步驟的生物過(guò)程，由一系列的遺傳和轉(zhuǎn)錄變化啟動(dòng)[1]。早期的宮頸癌絕大部分經(jīng)手術(shù)、放療或化療等綜合治療后預(yù)后較好，晚期患者的替代治療預(yù)后較差。因此，早期診斷宮頸癌并及時(shí)給予相應(yīng)治療可改善患者預(yù)后。鱗狀細(xì)胞癌和腺癌是常見(jiàn)的組織學(xué)亞型，分別約占所有宮頸癌的70%和25%[2]。有研究報(bào)道，人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素，而HPV16和HPV18占宮頸癌及癌前病變的70%[3]。HPV的DNA檢測(cè)敏感度高，但特異度有限，因此臨床需要更具特異性的標(biāo)志物進(jìn)行宮頸癌篩查。Ki-67是一種與細(xì)胞周期有關(guān)的核蛋白，在細(xì)胞周期的所有活躍期均表達(dá)。Ki-67被認(rèn)為是腫瘤發(fā)展的預(yù)測(cè)因子，其表達(dá)水平與多種癌癥的不良預(yù)后相關(guān)，如乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌。因此，Ki-67表達(dá)水平可反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)[4]。P16參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)活躍的細(xì)胞周期蛋白D/CDK的水平，反饋調(diào)節(jié)微小染色體維持蛋白(MCM)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和細(xì)胞周期蛋白E的水平。有研究表明，宮頸癌中P16過(guò)度表達(dá)是HPV E7蛋白對(duì)pRb功能性失活的結(jié)果[5]。因此，使用P16免疫細(xì)胞化學(xué)分析作為傳統(tǒng)宮頸癌篩查方案的補(bǔ)充，可能有助于減少假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果[6]。脯氨酰異構(gòu)酶Pin1在許多腫瘤組織中過(guò)度表達(dá)，對(duì)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展有著顯著的影響。因此，評(píng)估針對(duì)Pin1的癌癥治療方案的效果非常重要[7-8]。本研究探討宮頸癌組織中Ki-67、P16、Pin1的表達(dá)及臨床意義，旨在為臨床早期診斷和治療提供參考。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2018年3月—2021年5月收治的宮頸癌188例。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理學(xué)檢查確診為宮頸癌；年齡>18歲；經(jīng)檢查無(wú)嚴(yán)重內(nèi)科或外科疾病；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：入院前3個(gè)月內(nèi)接受過(guò)放療和(或)化療的患者；妊娠期或哺乳期患者。188例中年齡>45歲85例，≤45歲103例；宮頸鱗狀細(xì)胞癌163例，宮頸腺癌25例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)臨床分期：Ⅰ期98例，Ⅱ期64例，Ⅲ期26例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移117例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移71例；分化程度：低分化57例，中分化78例，高分化53例。

1.2方法 術(shù)中取宮頸癌組織及癌旁正常組織，使用甲醛固定、石蠟包埋，用Leica RM2235全自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)連續(xù)切片，約5 μm，常規(guī)烘烤脫蠟,最后分別用兔單克隆抗體Ki-67、鼠單克隆抗體P16、兔單克隆抗體Pin1對(duì)標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)(SP)染色，按照SP檢測(cè)試劑盒要求進(jìn)行。兔單克隆抗體Ki-67、鼠單克隆抗體P16、兔單克隆抗體Pin1及SP檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自廣州安必平公司。Ki-67、P16和Pin1主要在細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，以染色出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒判定為陽(yáng)性細(xì)胞。

1.3觀察指標(biāo) 觀察Ki-67、P16和Pin1在宮頸癌及癌旁正常組織中的表達(dá)情況，并分析陽(yáng)性表達(dá)患者的臨床病理特征。分析Ki-67、P16和Pin1陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1Ki-67、P16和Pin1的表達(dá)情況 宮頸癌組織中Ki-67、P16、Pin1陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 宮頸癌組織和癌旁正常組織中Ki-67、P16和Pin1的陽(yáng)性表達(dá)情況[例(%)]

2.2Ki-67、P16、Pin1陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 宮頸癌組織中Ki-67和P16陽(yáng)性表達(dá)與年齡、病理類(lèi)型、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度均無(wú)關(guān)(P>0.05)；Pin1陽(yáng)性表達(dá)與年齡、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度均無(wú)關(guān)(P>0.05)，與病理類(lèi)型有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 Ki-67、P16、Pin1陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

2.3Ki-67、P16和Pin1表達(dá)的相關(guān)性 宮頸癌組織中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)與P16表達(dá)呈中等正相關(guān)(r=0.541，P<0.05)；Ki-67陽(yáng)性表達(dá)與Pin1表達(dá)呈較弱正相關(guān)(r=0.368，P<0.05)；P16陽(yáng)性表達(dá)與Pin1表達(dá)呈中等正相關(guān)(r=0.680，P<0.05)。

3 討論

宮頸癌是嚴(yán)重危害婦女健康和生命的常見(jiàn)惡性腫瘤，且在世界范圍內(nèi)有較高的病死率[9-12]，通過(guò)改進(jìn)臨床篩查和診斷方法，其病死率在發(fā)達(dá)國(guó)家下降了約75%[13]。宮頸活組織檢查為診斷宮頸癌的金標(biāo)準(zhǔn)，然而由于宮頸細(xì)胞變異性極高，因此對(duì)宮頸癌患者進(jìn)行準(zhǔn)確的臨床診斷和進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)非常重要[14-16]。

Ki-67是一種只存在于細(xì)胞核內(nèi)的蛋白質(zhì)，可用于判斷細(xì)胞的增殖活性，其位于宮頸上皮內(nèi)瘤變基底層和副基底層，在具有典型細(xì)胞核的細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)，隨著宮頸上皮內(nèi)瘤變程度的增加，其陽(yáng)性表達(dá)水平也隨之升高[17]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁正常組織，且Ki-67陽(yáng)性表達(dá)與年齡、病理類(lèi)型、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度均無(wú)關(guān)。提示Ki-67可作為反映病變程度的敏感生物標(biāo)志物，與之前的研究結(jié)果一致[18]。

P16是一種細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制劑，通過(guò)作用于細(xì)胞周期的G1檢查點(diǎn)來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖。宮頸病變組織中P16的上調(diào)與HPV16和18基因的表達(dá)有關(guān)，表明了P16的上調(diào)可引發(fā)HPV感染，導(dǎo)致宮頸癌[19]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中P16陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁正常組織，P16的陽(yáng)性表達(dá)與年齡、病理類(lèi)型、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度均無(wú)關(guān)，表明P16過(guò)度表達(dá)是一種有用的標(biāo)志物。有研究表明，P16在宮頸癌細(xì)胞系中表現(xiàn)出致癌活性,表明P16不僅是宮頸腫瘤形成的診斷標(biāo)志物，也是宮頸癌細(xì)胞存活所必需的蛋白[20]。FU等[21]報(bào)道P16的消耗可以促進(jìn)HeLa細(xì)胞的化學(xué)和放射抗性；ZHANG等[22]發(fā)現(xiàn)敲低P16會(huì)抑制SiHa和HeLa細(xì)胞系中的細(xì)胞增殖、遷移和侵襲；MENDAZA等[23]研究報(bào)道，探索P16的亞細(xì)胞位置可以提供比P16整體表達(dá)檢測(cè)更有用的抗腫瘤活性信息。

Pin1是腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵催化劑，涉及脯氨酸介導(dǎo)的磷酸化[24]。Pin1通過(guò)破壞癌基因和腫瘤抑制基因之間的平衡來(lái)促進(jìn)腫瘤發(fā)生，并激活許多癌癥驅(qū)動(dòng)途徑[7]。敲低Pin1基因可減少許多腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，如乳腺癌、肺癌和肝癌[25]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中Pin1陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁正常組織，Pin1陽(yáng)性表達(dá)與年齡、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度均無(wú)關(guān)，與病理類(lèi)型有關(guān)。提示Pin1在宮頸癌中有重要作用,且鱗狀細(xì)胞癌Pin1陽(yáng)性表達(dá)率低于腺癌，可能與癌細(xì)胞的類(lèi)型不同有關(guān)。有研究報(bào)道，Pin1抑制劑具有腫瘤抑制作用[26-27]。Pin1抑制劑和激動(dòng)劑在其他相關(guān)疾病中的應(yīng)用研究有限，需要對(duì)Pin1進(jìn)行更詳細(xì)的臨床研究。

已經(jīng)有研究證明，P16/Ki-67雙染色可提高組織病理學(xué)的診斷準(zhǔn)確性[27]，但Ki-67、P16和Pin1間的相關(guān)性研究報(bào)道較少。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)與P16和Pin1表達(dá)呈正相關(guān)，P16陽(yáng)性表達(dá)與Pin1表達(dá)呈正相關(guān)，推測(cè)Ki-67、P16和Pin1可以作為評(píng)估宮頸癌病情的生物標(biāo)志物，并可能存在協(xié)同作用。

綜上所述，Ki-67、P16和Pin1在宮頸癌組織中表達(dá)上調(diào)，可作為宮頸癌診斷的重要生物標(biāo)志物。