FDP、PTX3聯合TLR9檢測在小兒過敏性紫癜臨床診斷、病情監測中的應用研究

許漢斌，陳少全,許長勝，鄭輝乾

過敏性紫癜(henoch-schonlein purpura, HSP)如累及到腎臟出現血尿和(或)蛋白尿則稱為紫癜性腎炎(henoch-schonleinpurpura nephritis, HSPN)[1]。目前臨床上對HSP的檢測缺乏統一標準，選擇一種可快速診斷HSP的特異性生物指標對改善患者預后有重要意義[2]。纖維蛋白(原)降解產物(FDP)是在纖溶酶的作用下所產生的各種降解產物的總稱[3]。正五聚蛋白3(PTX3)則與免疫系統疾病的發生關系密切[4]。而Toll樣受體9(TLR9)屬于Toll樣受體(TLRs)蛋白家族，參與了多種自身免疫性疾病、超敏反應、炎癥反應、細胞凋亡及移植排斥反應等疾病的發生[5]。本研究通過檢測HSP患兒外周血FDP、PTX3聯合TLR9表達水平，分析三者在HSP患兒臨床診斷、病情監測中的作用，為HSP的治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月—2020年1月本院收治的HSP患兒102例作為HSP組，男58例，女44例，年齡1～12(6.73±1.57)歲。納入標準：符合HSP診斷標準[6]；首次發病；入組前1個月內未進行治療者。排除標準：既往或目前患有原發性腎臟疾病者；存在免疫性疾病引起的腎臟損傷；存在精神疾病家族史、癡呆等無法配合本研究者。選取同期于本院接受健康體檢者90例作為對照組，男48例，女42例，年齡1～13(6.75±1.52)歲。2組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2檢測方法

1.2.1FDP、PTX3檢測：所有患兒和健康體檢兒童抽取靜脈血3 ml，加入枸櫞酸鈉抗凝，3000 r/min離心10 min。采用酶聯免疫吸附試驗檢測FDP、PTX3水平，檢測試劑盒購自美國R&D公司。本研究所有操作均由專人嚴格按照操作說明書進行。

1.2.2TLR9檢測：2組入選兒童均于入院后次日清晨采集外周靜脈血3 ml加入到肝素鋰抗凝管中，采用Epics XL/XL-MLL型流式細胞儀(美國Beckman Coulter 公司)檢測TLR9蛋白表達水平。

1.2.3尿流式細胞分析和尿微量白蛋白(MA)[7]水平：所有HSP組于入院后1周內的第1、4、7天動態監測尿流式細胞分析和MA水平并統計陽性率變化情況。根據尿流式細胞分析提示，統計HSPN無MA[僅紅細胞>3/HP(單純血尿型)]和HSPN伴MA(入組后1周內第1、4、7天時MA均≥20 mg/L)者的例數。

2 結果

2.1FDP、PTX3、TLR9蛋白水平 HSP組外周血FDP、PTX3、TLR9蛋白水平均高于對照組(P<0.01)。見表1。

表1 HSP組與對照組外周血FDP、PTX3、TLR9水平比較

2.2102例HSP患兒HSPN發生情況及各組間FDP、PTX3、TLR9水平比較 入院7 d后，102例HSP患兒中未發生HSPN者61例作為A組，發生HSPN者41例，其中無MA者19例作為B組，伴有MA者22例作為C組。C組外周血FDP、PTX3、TLR9水平高于A組和B組(P<0.05)，但A組和B組外周血FDP、PTX3、TLR9水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 3組不同病情程度HSP患兒外周血FDP、PTX3、TLR9水平比較

2.3影響HSP患兒發生HSPN的單因素分析 反復皮疹、腹痛、關節痛及FDP、PTX3、TLR9水平升高與HSP患兒HSPN的發生有顯著相關性(P<0.01)，年齡、性別、上呼吸道感染史、血管神經性水腫與HSP患兒HSPN的發生無顯著相關性(P>0.05)。見表3。

表3 影響HSP患兒發生HSPN的單因素分析(例)

2.4影響HSP患兒發生HSPN的多因素Logistic分析 反復皮疹及FDP、PTX3、TLR9水平升高是影響HSP患兒發生HSPN的獨立危險因素(P<0.01)。見表4。

表4 HSP患兒發生HSPN的危險因素多因素Logistic回歸分析

3 討論

HSP是最常見的毛細血管變態反應性疾病，目前臨床多認為炎性介質、凝血與纖溶機制、遺傳易感因素與其發病密切相關[8]。而HSPN是兒童最常見的繼發性腎損傷，由含免疫球蛋白A1的循環免疫復合物沉積在腎小球基底膜造成[1]。有研究報道，病情發展嚴重程度常直接影響HSP患兒的病程和預后[9]，故提高早期診斷率、加強病情監測至關重要。

FDP體現了機體纖溶系統活性的整體水平，能抑制纖維蛋白形成，有抗凝血酶作用[10]。本研究結果顯示，HSP患兒FDP異常升高，提示FDP參與HSP發生和發展。結合既往文獻，認為其可能的機制為HSP患兒存在繼發性纖維蛋白溶解亢進，考慮血管內皮細胞損傷間接激活纖溶系統，FDP即升高[11-12]。進一步多因素Logistic回歸分析發現，FDP水平升高與HSPN的發生顯著相關，此過程可能與腎損傷程度相關，提示其水平變化可作為HSP患兒早期診斷及評估HSPN患兒腎損傷程度的參考指標[13]。

PTX3是人類發現的第一個長正五聚蛋白，具有調節炎癥反應、參與病原菌免疫及清除凋亡細胞等作用[14]。有研究發現，PTX3可作為小血管炎癥反應的重要標志物[15],其作用機制可能是早期炎癥階段在白細胞介素、腫瘤壞死因子作用下快速產生和釋放巨噬細胞、中性粒細胞、血管內皮細胞，激活補體經典途徑，抑制巨噬細胞對末期多核巨細胞的吞噬而在炎癥反應中發揮作用。本研究結果顯示，HSP患兒PTX3水平顯著升高，且為HSP患兒發生HSPN的獨立危險因素，表明PTX3能早期評估HSP炎癥反應情況，并對臨床病情發展進行監測，從而為臨床治療提供依據。

TLRs受體是通過識別微生物DNA，激活細胞信號，產生炎癥反應[16]。而TLR9主要表達區域為樹突狀細胞、B淋巴細胞，可識別細菌和病毒中的非甲基化胞嘧啶磷酸鳥嘌呤二核苷酸。國內研究發現，在HSP急性期中，TLRs受體相關分子異常增高[16-17]，其中包括TLR5、TLR9，本研究結果與其報道一致。猜測各病原激發的TLRs信號通路活化過多，也許是導致HSP發病主要因素之一。本研究結果發現，HSPN伴MA者TLR9水平高于HSP無腎損傷者和HSPN無MA者，提示TLR9的持續活化與HSP腎損傷有關，參與介導了HSPN發生發展過程[18]。

綜上所述，FDP、PTX3、TLR9水平在HSP患兒中異常升高，聯合檢測三者可作為臨床診斷的有效指標，且與HSP患兒發生HSPN關系密切，在病情監測中具有重要價值。