犢牛致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

高祥軍

摘要：目的：為確診青海省民和縣某奶牛場致犢牛腹瀉病死的病原菌以及敏感藥物。方法：對病死犢牛進行尸體剖檢，采集樣本進行細菌分離鑒定、生化試驗、藥物敏感性試驗。結果：在犢牛腸道內檢測到一種溶血性大腸桿菌，藥敏實驗結果對頭孢類抗生素敏感。結論，XX地區奶牛養殖場引起犢牛病死的致病菌為大腸桿菌，對頭孢類藥物敏感，該牧場可用頭孢類藥物對致犢牛腹瀉類疾病進行預防和治療。

關鍵詞：犢牛;致病性大腸桿菌;分離鑒定;藥敏試驗

中圖分類號：S858.23 ? 文獻識別碼：A

大腸桿菌作為一種革蘭氏陰性菌，廣泛的存在于環境中，在不同的條件下可以加引起疾病的發生。牛大腸桿菌可經過消化道、生殖系統等方面感染，且對于犢牛傷害十分嚴重[1]。大腸桿菌主要表現為引起腹瀉、敗血癥、痢疾、腸毒血癥嚴重者幾小時或者1天內死亡[2]。大腸桿菌對于成年牛傷害較小，不會引起很高的死亡率，主要表現為乳房炎，產奶量下降等癥狀。大腸桿菌作為腸道的常在菌，是各種原因綜合引起的疾病，所以在飼養的過程中要加強管理，發生疾病以后要盡快進行相應的處理，做到早發現、早預防、早治療，采取必要的措施[3]。2021年11月XX地區發生了犢牛腹瀉致死的情況，本試驗通過對病死犢牛進行病原分離鑒定以及藥物敏感性試驗，為XX地區的養牛業更好的發展提供有力的保障。

1 材料和方法

1.1病料

病料采集于青海省民和縣地區某奶牛養殖場。

1.2 采樣

無菌環境下采集青海省民和縣地區某奶牛養殖場致死犢牛的肝、肺、脾、腸道。肝、肺、脾取病變與健康交界處的樣本，腸道進行結扎保存，保存于無菌培養皿內，保存與4℃環境內盡快進行分離培養。

1.3 試驗材料

無菌培養皿、載玻片、血平板、藥敏片、革蘭氏染色劑、生化試驗試劑盒。

1.4 細菌培養

無菌環境下，用酒精棉對樣本表面進行消毒，取出表皮后用剪刀切取1cm*1cm的組織塊，鑷子夾取組織塊均勻涂抹于血平板上，腸道樣本用接菌環蘸取樣本均勻的在血平板進行劃線。倒置放于37℃培養箱內培養16小時，觀察菌落形態。

1.5 細菌染色

無菌環境內，用接菌環將菌落挑至滴有生理鹽水的載玻片上，酒精燈輕烤載玻片，固定完成后，即可進行革蘭氏染色，分別草酸銨結晶紫染色1min，清水沖洗干凈后碘液染色1min，無水乙醇脫色30s，沙黃復染30秒后進行鏡檢。

1.6 細菌鑒定

顯微鏡觀察染色后的菌體形態，對菌種進行初步的判定。

1.7 生化試驗

根據鏡檢結果結合臨床經驗，選擇適當的生化試劑，37℃培養36h觀察生化管的變化。

1.8 藥敏試驗

將純化后的細菌均勻涂布于血平板上，貼藥敏片，37℃培養24小時觀察結果。

2 結果

2.1 細菌分離結果

血平板培養的結果顯示，接種肝、肺、脾、腸道病料中，只有接種腸道內容物的血平板觀察到長了溶血性的菌落，菌落形態為灰白色、四周光滑、像水珠狀，散發出特殊的氣味，鏡檢結果顯示染色后細菌為革蘭氏陰性菌，短桿狀，個別為球狀或長絲狀。可初步判定為大腸桿菌。

2.2 生化試驗結果

將細菌接種于生化管內可以觀察到該類細菌可以引起葡萄糖、乳酸、麥芽糖、甘露醇產酸產氣，木糖、山梨醇、阿拉伯糖、硝酸鹽陽性產酸、其他幾類為陰性，對比生化試驗結果顯示該種細菌符合大腸桿菌生化特征。

2.3藥敏試驗

2.4 藥敏試驗結果

對分離出的大腸桿菌進行藥敏試驗，結果顯示對頭孢噻肟、頭孢曲松敏感、對阿奇霉素、多西環素中度敏感，對環丙沙星、恩諾沙星 、鏈霉素耐藥。結果見表2

3 討論

致病性大腸桿菌對于犢牛的傷害十分的嚴重，且隨著疾病發生的增多，發生了很多耐藥的情況。2015年普紹林等[4]在云南分離到一株致犢牛腹瀉的大腸桿菌并進行了藥敏試驗，結果顯示該細菌對小鼠具有很高得致病性，且對環丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、頭孢噻肟、頭孢哌啶、頭孢吡啶、頭孢曲松鈉高度敏感。2016年劉少昆[5]對北京、天津部分地區的致牛腹瀉大腸桿菌進行分離鑒定，并對其耐藥性進行分析，結果顯示天津、北京地區致病株對諾氟沙星耐藥率最高，分別達到100%和86.67%。2017年岳山[6]對于黑龍江部分地區肉牛大腸桿菌的耐藥性進行調查結果顯示多重耐藥性較為普遍，對青霉素、氨芐西林、四環素、甲氧芐啶等藥物具有較強的耐藥。

本試驗檢測結果顯示該奶牛場引起犢牛腹瀉的主要致病菌為大腸桿菌，藥敏試驗顯示該細菌對頭孢噻肟、頭孢曲松具有較強的敏感、對環丙沙星、恩諾沙星、鏈霉素耐藥。該牧場可選用頭孢類藥物對該病進行有效的防治。為了減少耐藥性的發生，希望大家能夠精準用藥，避免濫用藥，高效的防治疾病的發生，為養牛事業的發展提供一份力量。

參考文獻：

[1]嚴勇，李新圃，武小虎，丁學智，嚴作廷，王勝義，李宏勝，王旭榮.牛源大腸桿菌研究進展[J].中獸醫醫藥雜志，2020，39（05）：35-41.

[2]崔銀雪，敖日格樂，王純潔，斯木吉德，阿日查，何利娜，張劍，劉波，張晨.致病性大腸桿菌誘發腹瀉對犢牛早期腸道黏膜通透性及免疫功能的影響[J].黑龍江畜牧獸醫，2020（23）：16-19+27.

[3]趙玉印，姜茹.新生牛犢腹瀉大腸桿菌的分離和診治[J].養殖與飼料，2021，20（02）：69-70.

[4]普紹林，石於友，李美荃，宋聰，劉寧，楊榮麗，姚俊.致犢牛腹瀉大腸桿菌云南株的分離鑒定及藥敏試驗[J].云南畜牧獸醫，2015（03）：1-4.

[5]劉少昆. 京津部分地區犢牛腹瀉大腸桿菌分離鑒定及耐藥性分析[D].吉林農業大學，2016.

[6]岳山. 黑龍江部分地區肉牛大腸桿菌耐藥基因與毒力基因檢測及耐藥性分析[D].黑龍江八一農墾大學，2017.